各种染色方法及应用

染色方法 革兰氏染色 瑞 -吉染色 细胞化学染色 免疫组化染色革兰氏染色与细胞壁C.Gram（ 革兰）于 1884年发明的一种鉴别不同类型细菌的染色方法。革兰氏染色革兰氏染色1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。3、用乙醇或丙酮冲洗进行脱色。在经历脱色后仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细胞呈无色。4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对涂片进行复染。例如复红，它使原来无色的革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革兰氏阳性细菌继续保持深紫色细胞化学染色 ，是一种以 形态 为基础，结合运用 化学 或 生物化学 技术对血细胞内各种化学成分作 定位 、 定性 及 半定量 分析的方法。用于研究 血细胞生理 、 病理 和化学结构；临床上为某些血液病的诊断、鉴别诊断、疗效观察、预后监测和发病机制的探讨，提供重要依据。细胞化学染色血细胞化学染色的基本要求是在 原位 显示细胞成分和结构，反应产物应是 有色沉淀物 ，具有一定的 稳定 性。血细胞化学染色可显示 糖原 、 脂类 、 酶 、 蛋白质 等。（一） 固定固定有 物理法 与 化学法 ，物理法 为干燥和火焰固定，化学法 最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。血细胞化学染色流程（二） 显示1、 偶氮偶联法 ：利用人工合成的酶底物，在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐结合引起偶氮偶联，使其形成不溶性的偶氮色素，以此证明酶的存在。2、 联苯胺法 ：粒细胞和单核细胞中的过氧化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧，使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。 3、 普鲁士蓝法 ：细胞内、外铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。 4、 雪夫反应 ：过碘酸氧化细胞内糖类中乙二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用，使无色品红形成红色沉淀。 5、 金属沉着法 其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色（显示脂质）、荧光显示、放射自显影以及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学诊断。 （三） 细胞化学定量 粗略估量 ，以染色反应的强弱，受色的深浅，人为地区别为阴性和各种程度的阳性。 百分法 ，只能反映细胞阳性率，不能反映受色强弱。 积分法 ，是常用的半定量法，将等级估量与百分率相结合它既反映了细胞阳性率的高低，又反映了细胞受色的强弱。下面介绍几种常用的细胞化学染色方法，这些方法学在白血病的鉴别诊断上具有重要意义。一、过氧化物酶染色（ POX） 【 原理 】 粒细胞 和 单核细胞 的胞浆内的髓过氧化物酶 （ POX orMPO）分解 过氧化氢 ，释放 新生态氧 ，使 无色 联苯胺氧化成 蓝色 联苯胺，后者进一步变成 棕色 化合物沉着于 细胞质内。M1 - POX(+)过氧化物酶染色临床意义主要用于 鉴别急性白血病类型 ，急性髓细胞白血病多呈 阳性 反应，以 M3和 M2型反应最 强 ， MI和 M5型反应较 弱 ，故有助于区别 M3和 M5型。急性淋巴细胞白血病 呈 POX阴性 反应，故为 急性髓细胞 和 淋巴细胞白血病鉴别 的重要指标。二、过碘酸一雪夫（ PAS)染色【 原理 】胞浆内存在 糖原 或 多糖类 物质（如粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等）中的 乙二醇基 （CHOH-CHOH） 经过 碘酸 （ periodic acid） 氧化，转变为 二醛基 （ CHO-CHO）， 与 雪夫 (Schiff )试剂中的 无色品红 结合，形成 紫红色染料 而沉积于 胞浆 中。该反应称为过碘酸一雪夫 (PAS)阳性反应。L1 PAS(+)AML-M6 PAS(+)【 临床意义 】（ 1） M6与巨幼贫的鉴别M6的幼红细胞 PAS可呈 强阳性 ，积分明显增高， 巨贫 、再障、溶贫时 PAS反应为 阴性 。（ 2）急性白血病的类型鉴别ALL， PAS呈大块状阳性，也可是阴性，AML为 阴性 ，急性单核细胞白血病时 原单 核细胞及 幼单 核细胞 PAS阳性 ，积分增高，阳性颗粒小而多，呈弥散分布。三、骨髓铁染色【原理】 正常人骨髓中的贮存铁主要存在于 骨髓小粒 和 幼红细胞 中，骨髓中的铁在 酸性 环境下与 亚铁氰化钾 作用，形成 普鲁士蓝 反应，形成 蓝色 的 亚铁氰化铁 沉淀，定位于含铁的部位， 从而反映骨髓中铁的储存量。细胞外铁细胞内铁环形铁粒幼细胞【临床意义】骨髓铁染色是诊断 缺铁性贫血 及指导 铁剂治疗 的重要方法；也 是诊断 铁粒幼细胞贫血 的有效方法。【 基本原理 】 免疫组化是应用免疫学基本原理 抗原抗体反应 ，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素 ) 显色来确定组织细胞内抗原 (多肽和蛋白质 )，对其进行 定位、定性及定量 的研究。免疫组 (织 )化 (学 )1