实验二dna与rna的化学显色反应

实验三核酸 (DNA和 RNA)的细胞核定位观察 p220作业：1、说明 DNA和 RNA的亚细胞定位在哪里 ?为什么？2、解释一下本实验中设立对照组的必要性是什么，三氯乙酸和丙酮各起什么作用实验原理Unna染色法n 主要成分：甲基绿 -派洛宁混合染料（ 碱性染料 ） n 原理：核酸是 酸性 的，它们对于碱性染料具有亲和力，但是 DNA和 RNA对 甲基绿 -派洛宁 混合染料的亲和力不同，而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。 DNA被甲基绿染成绿色 ， RNA被派洛宁染成红色 ，这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来“样品的固定 ” 王金发 书 p37目的：迅速 杀死细胞 ，稳定细胞的化学成分，以便在后面的处理、切片时不被破坏。固定使得 细胞大分子交联而保持在一定位置上，不至于在后面的染色等 处理过程 中移位或丢失而产生 人工假象 。 常用的固定液： (醛类 ：甲醛、戊二醛 )Unna染色法实验步骤 撕取洋葱内表皮 小离心管 Carnoy固定剂 15 min95%酒精复水 5 min 70%酒精复水 5 min H2O 5min 小离心管表面皿中实验组 对照组 5% 三氯乙酸 （ TCA） 90 保温 ,15minH2O 5minUnna 染液 20min(室温 ) H2O漂洗几秒后丙酮 分色 6-10Sec H2O洗片刻水压片分别镜检观察Unna 法背景知识n 核酸是一种线形多聚核苷酸，它的基本单位是核苷酸。细胞核内存在有两种核酸： DNA和 RNA， 它们具有类似的化学组成，即均由 含氮碱基 ， 戊糖 和 磷酸 组成，可表示如下 :磷酸 核糖（ RNA）核酸 核苷酸 戊糖脱氧核糖（ DNA）核苷 A、 G、 C、 U (RNA)碱基（嘌呤 /嘧啶）A、 G、 C、 T（ DNA）n DNA是染色体的主要成分，在细胞核内呈双螺旋结构。n RNA是单链线形，主要有三种类型 :核糖体 RNA (rRNA)转运 RNA（ tRNA)信使 RNA（ mRNA) rRNA含量大，占细胞 RNA总量的 80左右， 是核糖体的重要组成部分，而 rRNA的合成、加工和核糖体亚单位的装配都是在 核仁 中进行的。 tRNA约占全部 RNA的 15，它在蛋白质生物合成过程中具有转运氨基酸的作用。 mRNA的含量最少，只占 5左右，它是以 DNA为模板合成的，它又是蛋白质合成的模板。rRNA基因的转录 快速生长的哺乳动物细胞中 (培养的 Hela细胞), 转录生成的 RNA总量的 80%- rRNA; 15%-tRNA; 编码蛋白质的 mRNA量少 处于生长中的高等真核细胞一般需 107核糖体以确保蛋白质的合成 , so真核细胞中有关编码核糖体基因 (ribosomal gene)会在染色体的 核仁区以 100-5000个重复 copy串联成中度重复序列 , 成簇分布在少数 特定染色体 的核仁区。The general structure of ribosomes in prokaryotes and eukaryotesrNTs: number of ribonucleotides The macromolecular composition of a mammalian ribosomeStructure of T. thermophilus 70S ribosome as determined by x-ray crystallographySmall ribosomal proteins, dark gray;Large ribosomal proteins, light grayLight micrograph of an isolated nucleus from a Xenopus ootyte stained to reveal the hundreds of nucleoli.核仁纤维中心 (FC)： 位于核仁中央， 低电子密度、染色浅， rRNA基因的储存位点 。稠密区 (DFC)： 电子密度最高，由致密的纤维构成，一般见不到颗粒； 含正在转录的RNA分子 。颗粒区 (GC)：位于周边， 直径为 15-20nm的 核糖核蛋白颗粒 (RNP)-代表 已合成的核糖体亚单位前体 颗粒。A section of part of a nucleus with a nucleolus核仁 (nucleolus)重