ztt动物细胞工程22

动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体制备 动物体细胞 核移植技术和克隆动物思考与回忆： 1、动物细胞全能性特点？ 随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。 2、能否用植物组织培养的方法使动物细胞发育成动物个体？ 不能。动物细胞和组织在体外培养的过程中，伴随一定的组织分化，不管采用什么手段和培养条件，由于细胞的运动、变化，细胞发生结构功能变异，结果长时间的培养只能使单一类型的细胞保存下来，最终成了简单的细胞培养。 3、动物的细胞培养的理论依据（原理）？ 细胞增殖动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体技术核移植动物细胞工程常用技术其它动物细胞工程的基础本节内容：一、动物细胞培养的应用和概念：1、概念： 动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的 组织 ,将它分散成 单个细胞 ,然后 ,放在适宜的 培养基中 ,让这些 细胞生长和增殖 .2、原理： 细胞增殖定义： 人们通常将动物组织 消化后 的初次培养 称为原代培养。胰蛋白酶处理取出组织胚胎或幼龄动物器官组织剪碎单个细胞细胞悬液转入培养瓶内培养 （ 贴壁生长 长成单层细胞。有 接触抑制 现象） 。 原代培养3：过程 图示原代培养强调一：细胞贴壁过程细胞贴壁： 在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。培养瓶或培养皿壁要求： 表面光滑、无毒、易于帖附。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的 接触抑制 。强调二：接触抑制定义：当原代培养的细胞处于 接触抑制后, 用 胰蛋白酶 处理 ,使细胞从瓶壁上 脱离下来 ,然后加入新的培养液 ,将 细胞分离稀释 ,并 从原培养瓶内转接到新的培养瓶内 ,这个过程称 传代培养 .（ 分瓶培养的过程 ） 传代培养归纳过程取 的组织、器官细胞悬浮液酶 细胞贴壁、接触抑制培养40-50代细胞 培养细胞株无限传代细胞系单个细胞加 液遗传物质 改变遗传物质改变动物胚胎或幼龄动物胰蛋白培养原代传代未已原代培养特点： 细胞贴壁、接触抑制4.动物细胞培养的条件 :1）无菌、无毒的环境： 适宜的温度： 人和哺乳动物细胞最适温度为36.50.5 。适宜的酸碱度： PH： 7.2-7.4液体合成培养基：（ 糖、氨基酸）、促生长因子、（水、无机盐、微量元素） 等；通常还需加入 血浆、血清等 天然成分。4）气体环境：2）营养：3）温度和 pH：“95 空气 +5 CO2”的混合气体培养箱。 氧 气是细胞代谢必须的； CO2维持培养液的 PH。对培养液和所有培养用具 无菌处理； 培养液中 添加抗生素 防止培养过程中污染； 定期更换培养液 以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。问题 3：为什么用胰蛋白酶处理？问题 1：、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。问题 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？扩大细胞与培养液的接触面积，利于细胞吸收营养。问题 4：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？动物细胞培养的最适 PH值为 7.2-7.4，胰蛋白酶作用的适宜 PH为 7.2-8.4，胃蛋白酶适宜 PH为 2.胃蛋白酶在 PH为 7.2-7.4的动物细胞培养中无活性。问题 5：用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋白质 (胶原蛋白等 )。问题 6、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？问题 7、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维生素和动物血清等。独特之处有： 1、液体培养基 2、成分中有动物血清等不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体问题 8、动物细胞培养的原理： 细胞增殖。问题 9、目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在 10代以内，为什么？10代以内的细胞 遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。5.动物细胞培养技术的应用 :1.蛋白质生物制品的生产如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体2.应用于基因工程主要用于作为受体细胞3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.细胞的生理、药理、病理研究 如用于筛选抗癌药物 植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目 植物组织培养 动物细胞培养原理 细胞的 细胞培养基特有成分、植物激素 葡萄糖、 培养结果 植物体培养目的 快速繁殖、培育无病毒植株获得全能性 增殖蔗糖 动物血清细胞株、细胞系细胞二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1、 定义： 动物核移植是将动物的 一个细胞的细胞核 ,移入一个已经 去掉细胞核的卵母细胞中 .使其重组并发育成一个 新的胚胎 ,这个新的胚胎最终发育为 动物个体 .3、 分类： 胚胎核移植、体细胞核移植。胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易。动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难2、 原理： 动物细胞核具有全能性4、体细胞核移植过程 -示动物克隆 -无性繁殖1.）克隆羊多利培育过程：黑面绵羊去核卵母细胞白面绵羊乳腺细胞核细胞核移植重组细胞电脉冲刺激早期重组胚胎胚胎移植另 一头绵羊的子宫妊娠、出生克隆羊多利 特别注意： 克隆动物性状与供体动物完全一样吗？不可能！ 因为：一、供体动物只提供细胞核，而细胞质中的遗传物质（如线粒体 DNA）来自于受体卵母细胞 .二、生物的性状不仅与遗传物质有关，还受环境的影响。供体受体代孕受体黑面绵羊去核卵母细胞白面绵羊乳腺细胞核a重组细胞电脉冲刺激早期重组胚胎b另 一头绵羊的子宫妊娠、出生克隆羊多利1、写出 AB所代表细胞工程名称： a表示： b表示 : 2、实施细胞工程时，所需受体细胞大多采用卵母细胞的原因：体积大，易操作。含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。3、多利面部毛色是： 根据遗传学原理说明判断依据。4、若黑面绵羊的基因型为 AA,白面绵羊的基因型为 aa，则克隆羊的基因型为 核移植胚胎移植白色多利全部的核基因都来自白面绵羊aa 取供体细胞传代培养 10代以内的细胞 .为什么？ 用的是去核的减数第二次分裂中期细胞（ M 中期 ）为什么？ 激活方法： 激活目的： 促融方法：电刺激 胚胎移植至代孕受体内妊娠、分娩2.）核移植流程供体：优质高产奶牛 受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养）1.体积大，易操作。 2.含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。有人说它三个母亲，对吗？核移植流程 :1、供体细胞的采集与培养5、用物理或化学方法激活受体细胞，使其完成减数分裂进程。6、电刺激促融使供体核进入受体卵母细胞，构建重组胚胎。4、将供体细胞注入去核卵母细胞3、显微操作去除卵母细胞中的核2、受体卵母细胞的采集与体外培养7、胚胎移植入代孕母牛体内8、妊娠分娩与供体遗传物质基本相同的犊牛。4.体细胞核移植技术的应用前景5.体细胞核移植技术存在的问题看书 P49-50页 1、单个细胞；生长；增殖 2、制成细胞悬液；转入培养液；原代培养；传代培养 3、 (1)无菌 (2)糖；氨基酸；促生长因子；血清 (3)36.5； 7.27.4 (4)O2； CO2 4、病毒；单克隆抗体 、 1、细胞核；卵细胞 2、 (1)胚胎细胞核 (2)体细胞核 3、 (1)体细胞 (2)卵母细胞；减数第二次分裂中期 (3)去核卵母细胞；融合；重组胚胎 (4)移植 4、 (1)遗传改良 (2)濒危 (3)医用蛋白 (4)供体 (5)组织器官 15 CDABC 6 、 全部基因（全部遗传物质）；受精卵 细胞分裂 分化 已分化的动物细胞核 核移植 1、定义： 指用自然或人工方法使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。一、动物细胞融合 细胞杂交： 不同基因型的细胞之间的融合就是 细胞杂交。 杂交细胞： 融合后形成的具有原来 两个或多个细胞遗传信息 的 单核细胞 成为杂交细胞 。细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合 受精作用动物细胞融合2、 诱导融合的因素 生物法： 灭活的病毒 诱导融合 .(利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。 这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。 ) 化学法： 聚乙二醇 PEG诱导融合 . 物理法： 电激 融合病毒颗粒黏 附细胞表面细胞膜连接细胞膜被 病毒颗粒穿通细胞融合、形成杂种细胞3