FISH技术临床应用ppt课件

FISH技术的临床应用 1 荧光原位杂交（荧光原位杂交（ Fluorescence in situ Hybridization， FISH） 基本原理：应用荧光染料标记探针 DNA，变性成 单链后与变性后的染色体或细胞核靶 DNA杂交， 在荧光显微镜下观察并记录结果。 生命科学中的 “ 钓鱼 ” 技术 2 3 4 5 6 操作流程简图 制片 预处理 FISH结果分析 破坏细胞膜利于探针 杂交。 蛋白酶消化、 HCl处理 变性 杂交 洗涤 复染 制备的质量 新鲜程度 操作流程简图 7 标本为新鲜细胞制片： 阈值建立 采集 20例正常人细胞。 阈值测定：每例分析至少 100个细胞，统计出现 2个以上阳性信号细胞 数目的百分比。 阈值 = 平均数（ M） + 3X标准差（ SD） 结果判断 每例样本随机计数细胞（至少 100个） 如果检测值 阈值，判定为阳性结果； 如果检测值 阈值，判定为阴性结果； 如果检测值 =阈值，加大观测样本细胞数目。 结 果 判 断 8 FISH在血液及淋巴肿瘤中的应用 FISH技术在产前诊断中的应用 FISH在泌尿系肿瘤中的应用 FISH技术在宫颈癌检测中的应用 其它 FISH技术的临床应用 9 FISH在血液及淋巴肿瘤中的应用 10 11 12 13 赵荣 骨髓象 (CML)赵荣 血象 （ CML） 14 覃长江血象 (MD/MPD) 覃长江骨髓象 (MD/MPD) 15 BCR/ABL阴性 (图片来自覃长江 ) MD/MPD BCR/ABL阳性 (图片来自赵荣 ) CML 16 17 18 陆晓逸骨髓象（ CLL ） 19 D13S25/P53基因阴性 （来自陆晓逸） CSP12基因阴性 （来自陆晓逸） 20 21 22 23 24 25 26 PML/RARa阳性 (图片来自卜丽敏 ) PML/RARa阴性 (图片来自彭志新 ) 27 卜丽敏骨髓象 28 29 30 FISH技术在产前诊断中的应用 31 染色体异常的发生机率 出生婴儿 0.6% 先天性智力障碍（ MR）患者 23% 先天性心脏病 13% SAB 夫妇 5% 死胎和 围产期死亡胎儿 6.0% 自然流产 (前三个月 ) 60% 32 唐氏综合症 21号染色体三体 , 95-97% 多余的染色体来自母亲 , 唐氏综合症与母亲 的年龄有关系 , 确切的病因不是很了解 . 活产新生儿发病率为 1 /800 to 1 /1,100 , 唐氏综合症与文化、种族、 社会阶层以及地理区域都没有必然的联系。 智能较正常儿童低，认知困难，发育迟缓。他们也有很特殊的面貌， 通常双眼距离较远、眼睛向上斜、鼻梁骨平坦，嘴、牙齿及耳朵均细 小。 肌张力低。 33 Turner 综合症 1个 x染色体的全部或者部 分丢失 ，只发生在女性。 是最常见的染色体异常导 致的疾病 ( 活产女性新生 儿发病率大约为 1 / 2500 ) 身材矮小、卵巢不发育、 性幼稚、 蹼颈、 肾脏和 甲状腺有问题 , 骨骼畸形 等 生长激素治疗 , 雌激素替 代治疗等 34 21+13+ GLP13/GLP21阴性 35 FISH在泌尿系肿瘤中的应用 36 常用诊断及监测膀胱癌 膀胱镜检查：病人痛苦，难以接受 细胞形态学检测：敏感性低 尿液中抗原检测：虽灵敏性高于细胞形态 学检测，但特异性较低，不能成为可靠的 诊断指标。 概 述 37 FISH检测： 9号染色体部分（如 p16位点）或全部丢失。 3号、 7号及 17号染色体的非整倍性。 膀胱癌的灵敏度大约 80%, 特异性大约 96% 非创伤性及非痛苦性 概 述 38 疾病 名称 检测探针 标记颜 色 探针定位 探针名称 患者中常见 异常类型 膀胱癌 GLP P16/CSP 17 红 /绿 P16： 9p21 CSP17:17p11. 1-q11.1 P16： 细胞周期 蛋白依赖性激 酶抑制因子 2A CSP17:17号染 色体着丝粒 P16缺失； 17号染色体 非整倍性 临床意义 随着对膀胱癌遗传学改变的深入研究，人们发现 9号染色体部 分（如 p16位点）或全部丢失是最常见遗传学改变，且这一改变与 膀胱癌的早期发生密切相关。 P16为抑癌基因，通过 CDK4对细胞增 殖分裂起负调控作用， CDK4与 cyclin D形成复合物促进细胞从 G1-S 转换，促进细胞有丝分裂， P16基因异常在膀胱癌发生早期出现 . 膀胱癌 FISH 探针组 (一 ) 39 疾病 名称 检测探 针 标记颜 色 探针定位 探针名称 患者中常见 异常类型 膀胱 癌 CSP 7/CSP3 红 /绿 CSP7: 7p11.1- q11.1 CSP 3: 3p11.1- q11.1 3 、 7号染色 体着丝粒 3、 7号染色 体非整倍性 临床意义 膀胱癌的发展与染色体不稳定性紧密相连，特别是与 3号、 7号 及 17号染色体的非整倍性密切相关。 3、 7、 17 染色体的不稳定 性与肿瘤的浸润行为有关 ， 3， 7， 17改变在病程发展中出现。 膀胱癌 FISH 探针组 (二 ) 40 CSP 7/CSP3阴性 CSP7/CSP3阳性 41 FISH技术在宫颈癌检测中的应用 42 传统巴氏细胞学涂片 &液基薄层细胞检测 (TCT ） HPV病毒检测 荧光原位杂交（ FISH） 检测 临床检测方法 43 方 法 特异性（） 敏感性（） 形态学检测 90 55-80 HPV检测 64 95 84-100 FISH 90 90 三种检测方法比较 44 TERC（人类染色体末端酶 ）基因定位在 3q26.3 ，该基因 的扩增可阻止细胞凋亡，导致肿瘤产生 宫颈细胞由非典型性发育异常向宫颈癌转变的过程中几乎 都伴有 3号染色体长臂扩增。其中，涉及到的最重要的基 因可能是 TERC基因。该基因扩增能准确区分宫颈细胞高度 癌前病变与低度癌前发育异常，鉴别诊断的敏感性及特异 性均在 90%以上；同时，这一扩增也能