免疫复合物及检测

免疫复合物及检测 1 当 Ag在体内持续存在或由微生物与 宿主细胞不断释放入细胞外液时， 可引起特异性 Ab产生，从而形成免 疫复合物。 一 .免疫复合物含义及形成： （一）含义： immune complex， IC 它主要指 AgAb复合物 及 AgAbC 复合物 两种。 2 （二） IC的形成： 1.Ag持续存在于体内：（产生 Ab，形成 AgAb或 AgAbC） 感染：是 Ag持续存在于体内的最常见原因， 如细菌、病毒、寄生虫感染； 组织 Ag：自身组织的部分成分发生变异， 如 DNA、 IgG等； 外源性 Ag：在生活、工作环境中接触的外来 性物质如粉尘、药物等； 肿瘤 Ag：如白血病等 3 2.IC的清除受阻： 形成的 IC一般分为 大分子 IC、中等大 小的 IC及小分子 IC三种： 大分子 IC：沉降系数为 19S， MW100万， 易被巨噬 细 胞吞噬而清除； 小分子 IC：可溶性， 沉降系数 6.6S， MW 50万，易被 肾 小球 滤过 而排除； 中等大小的 IC： 沉降系数在 8.8S 19S间， MW在 50 100万间，既不易被 巨噬 细 胞吞 噬也不易被 肾 小球 滤过 ，而沉 积 在血管壁 、 肾 小球基底膜 处 ，形成免疫复合物病。 4 二 .免疫复合物病： （一）致病机理：中等大小的 IC沉积在 体内，通过 激活补体、激活血小板 而致病。 激活补体： a.激活 C3a、 C5a、 C567 趋化嗜中性粒细 胞 释 放溶 酶 体 酶 引起 组织损伤 ； b.激活 C3a、 C5a（过敏毒素） 作用于肥 大 细 胞和嗜碱性粒 细 胞 释 放血管活性物 质 血管通透性增加 引起 组织 水 肿 ； 5 激活血小板： 与血小板上的 IgGFc受体结合 使血小 板聚集 微血栓形成 局部出血缺血 、坏死 6 7 常 见 病 损 部位 肾 小球、关 节 、皮肤 8 （二）所致疾病 内脏毛细血管炎：如急性肾小球肾炎 、变态反应性肺泡炎、溃疡性结肠炎 关节炎：风湿性关节炎、类风湿性关 节炎； 皮肤：皮肤炎、脉管炎； 全身： SLE 9 血血 清清 病病 10 类风湿性关节炎类风湿性关节炎 体内体内 变性变性 IgG刺激机体产生刺激机体产生 抗体抗体 (称为类风湿因子称为类风湿因子 ,IgM 型型 )，形成，形成 IC，沉积于全身，沉积于全身 小关节滑膜处，引起小关小关节滑膜处，引起小关 节红肿、变形僵直、失去节红肿、变形僵直、失去 运动功能。运动功能。 11 系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮 细胞核物质细胞核物质 (如如 DNA 、 RNA、核内可溶、核内可溶 性蛋白性蛋白 )刺激机体刺激机体 产生产生 抗核抗体抗核抗体 ，形，形 成成 IC，沉积于全身，沉积于全身 毛细血管、关节滑毛细血管、关节滑 膜、心脏瓣膜等处膜、心脏瓣膜等处 ，引起全身性损伤，引起全身性损伤 。 12 三 .IC检测方法的分类： (一 ) 局部组织中 IC的检测： 制备局部组织切片，用光学显微镜或电镜 检测 IC所致典型病理改变；或用 IF、免疫酶 技术检测 IC在组织中的沉着。 （二） 循环中 IC的检测： Circle immune complex，简称 CIC。 CIC检测方法大致分为两类： 13 1.抗原特异性方法： 利用 IC中 Ag的特 异性而设计的方法。但由于每一待测 标本中 Ag的特异性是不同的，不同 Ag 就需不同方法进行检测，造成方法不 统一，因此临床上使用较少。 2.抗原非特异性方法： 利用 CIC与游离 的 Ag或 Ab相比较，在物理性质、生物 学活性上的差异而设计的方法。 14 根据物理性质上的差异而设计的方法： A.根据 CIC与游离的 Ag或 Ab分子大小不同 而设计的方法：凝胶过滤超滤法、蔗糖密 度超速离心法； B.根据 CIC与游离的 Ag或 Ab溶解度不同而 设计的方法：聚乙二醇（ PEG）沉淀试验 15 根据生物学性质的差异而设计的方法： A.根据 C1q+CIC （ AgAb)而设计的方法： 抗补体试验、 C1q结合试验； B.根据 IgGFc受体 CIC （ AgAb)而设计的 方法：血小板凝集试验； C.根据 C3b受体 CIC（ AgAbC)而设计的 方法： Raji细胞试验 16 四 .IC检测方法概述： 1.聚乙二醇（ PEG）沉淀试验： 原理： PEG为水溶性多聚体，在 3 -4 低浓度时，能使血清中 CIC沉降。 17 方法： PEG待测血清 使 PEG终浓度达到 3 4 4 过夜 离心，取出沉淀 将沉淀用 NaOH溶解 在分光光度计上测定 OD（ A）值 18 优缺点： 该试验不但可检测 IC，还可获得 IC（收集 沉淀），简单，快速； 特异性差，易受血清中大分子物质干扰； 常作为 CIC检测的粗筛试验 19 2.抗补体试验：抗补体试验： 原理： C1q+IC 方法：豚鼠血清（含补体 )+待测血清 (561h 灭活其中补体） 再加入致敏羊红细胞 不溶血 溶血 （ IC阳性） （ IC阴性） 20 21 优缺点： 该试验敏感，干扰因素多，易出现假阳性 凡引起补体失活的原因都可引起假阳性， 因此豚鼠血清必须保持新鲜； 待测血清在 561h灭活自身补体时，对其中 的 Ig构型有改变，可引起 Ig聚集代替 IC而与 C1q结合，出现抗补体活性。 22 3.C1q结合试验 ： 原理： C1q IC 方法： 待测血清（灭活补体）同位素标记的 C1q PEG(使 IC沉降） 测定沉淀物中的放射活性 优点：对 IC的检测既可定性又可定量，重复 性好，结果客观； 缺点：易出现假阳性， C1q不但能与 IC结合， 还能与血清中鱼精蛋白、 C反应蛋白结合 23 4.血小板凝集试验： 原理： IC+血小板上的 IgGFc 受体 血小板凝集 方法：待测血清血小板 若出现凝集，则待测标本中含有 IC ； 若不出现凝集，则待测标本中无 IC 。 特点：由于不同个体血小板对 IC的敏感性不同， 所以实际运用时，至少需要三份不同个体的混合 血小板。 可出现假阳性：高浓度的 Ig、凝血酶、蛋白溶解 酶、胶原等都可使血小板凝集。 24 5.Raji 细胞试验： 原理： Raji细胞是一种有 B细胞特征的淋巴 母细胞样细胞，由 Burkitt氏淋巴瘤衍变而 来，其表面无 SmIg，含有大量的补体受体 ，尤其是 C3b受体。该法仅适用于检测 AgAbC复合物。 方法：待测血清 +Raji细胞 孵育 洗 涤 ，加 入同位素 标记 的抗人 IgG 离心、洗 涤 检测 沉淀 细 胞的放射活性。 25 五 .IC检测的有关技术问题： 到目前为止，所有检测 IC 的试验，还没有 另人满意的标准化措施； 在体外制备的 IC还很不稳定，因此用人工 合成的复合物作为定量标准不适宜。 目前普遍应用的标准品是 HAHG 热聚合 人 IgG（不是真正的 IC）。 26 检测 IC的理想方法 ： 操作简便，敏感； 可检测各种类型 I