《铵态氮实验步骤》word版.doc

6.1.3土壤中铵态氮的测定6.1.3.1靛酚蓝比色法1.方法选择测定土壤铵态氮，主要有直接蒸馏法、浸提后测定法和扩散吸收法等。直接蒸馏法是在氧化镁存在下直接蒸馏土壤，但此法在弱碱蒸馏时仍可能使一些简单的有机氮微弱水解成氨气蒸出，易使结果偏高。浸提后测定法多采用中性盐(硫酸钾、氯化钾、氯化钠等)浸提土壤，土壤溶液中的NH4+，可选用蒸馏、比色、或氨电极法测定。浸提蒸馏法的操作简便，易于控制条件，适合于NH4+含量较多的土壤。氨气敏电极法测定土壤中的NH4+，操作简便，快速，灵敏度高，重复性和测定范围后很好，但仪器的质量必须可靠。在这里我们详细介绍浸提比色法和扩散吸收法。比色法有多种，这里介绍靛酚蓝比色法。靛酚蓝比色法的灵敏度和准确度高，适用于大批样品自动化分析（本法测定范围0.050.5mgL-1铵态氮）。扩散吸收法利用氧化镁水悬液的弱碱性，交换吸附在土壤胶体上的铵态氮，不致破坏土壤矿质部分。此法适用于各种类型土壤样品的测定，特别是对于还原性强的沼泽土和潜育土，可省去消除还原性物质的手续，同时，由于扩散吸收法不须蒸馏装置，设备简单，适用于大批样品的分析（本法测定范围50300g铵态氮）。2.基本原理 土壤浸出液中的NH4+在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的蓝色很稳定，在NH4+浓度为0.050.5mgL-1范围内，其深浅与NH4+含量成正比。3.主要仪器及试剂主要仪器：振荡机；分光光度计。主要试剂：（1）2molL-1KCl溶液：称取149.1g氯化钾（KCl，化学纯）溶于水中，稀释至1L。（2）苯酚溶液：称取10g苯酚（C6H5OH，化学纯）和100mg硝基铁氰化钠（硝普钠）Na2Fe（CN）5NO2H2O稀释至1L【1】。此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4冰箱中保存。（3）次氯酸钠碱性溶液：称取10g氢氧化钠（NaOH，化学纯），7.06g磷酸氢二钠（Na2HPO47H2O，化学纯），31.8g磷酸钠（Na3PO412H2O，化学纯）和 52.5gL-1次氯酸钠（NaOCl，化学纯，即含5%有效氯的漂白粉溶液）10mL溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4冰箱中保存。（4）掩蔽剂：将400gL-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O64H2O，化学纯）与100gL-1的EDTA二钠盐（C10H14O8N2Na2，化学纯）溶液等体积混合。每100mL混合液中加入0.5mL 10 molL-1氢氧化钠，即得清亮的掩蔽剂溶液。（5）5gmL-1铵态氮（NH4+-N）标准溶液：称取0.4717g干燥的硫酸铵(NH4)2SO4，分析纯溶于水中，定容至1L，制备成含铵态氮（N）100gmL 1的贮存溶液；使用前将其加水稀释20倍，即配制成含铵态氮（N）5gmL 1的标准溶液备用。4.操作步骤（1）NH4+浸提【2】： 称取10.00g新鲜土样（若是风干土，过10号筛）准确到0.01g【3】，置于200mL三角瓶中，加入2molL-1氯化钾溶液100mL，塞紧塞子，在振荡机上振荡1h。取出静置过滤，待土壤氯化钾悬浊液澄清后，吸取一定量上层清液进行分析。如果不能在24h内进行，用滤纸过滤悬浊液，将滤液储存在冰箱中备用。同时测定土壤水分含量。（2）比色：吸取土壤浸出液2mL10mL（含NH4+-N 2g25g）放入50mL容量瓶中，用氯化钾溶液补充至10mL，用水稀释至30mL，然后依次加入苯酚溶液5mL和次氯酸钠碱性溶液5mL，摇匀。在室温（20左右【4】）下放置1h后【5】，加掩蔽剂1mL以溶解可能产生的沉淀物，然后用水定容至刻度。2h后，用1cm比色槽在625nm波长处进行比色，读取吸光度。同时做两个试剂空白试验。（3）工作曲线的绘制：分别吸取0，0.5，1，2，3，4，5mL NH4+-N标准液于50mL容量瓶中，各加10mL氯化钠溶液，同（2）步骤进行比色测定。得到浓度为0，0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mgL-1 NH4+-N溶液。5.结果计算W（N）式中：W（N）土壤中NH4+-N的含量，mgkg-1；c显色液铵态氮的质量浓度，gmL 1；V显色液的体积，mL；ts分取倍数，ts；m样品质量，g；K2土样换算为烘干土样的水分换算系数。6.注意事项【1】硝普钠是显色反应的催化剂，能加速显色，并增强蓝色及颜色的稳定性，但硝普钠是剧毒药品，使用时应注意安全。【2】靛酚蓝比色法测定NH4+，也可用测定NO3-时的土壤浸出液，从而节省操作步骤，测定结果可能稍有差异。【3】土样经风干或烘干后可能引起NH4+含量的变化，所以，称样以新鲜土样为好。若以干土计算，应同时测定含水量后换算。【4】显色后在20左右放置1h，再加入掩蔽剂。过早加入会使显色反应很慢，蓝色偏弱；加入