蛋白质含量测定方法小结.docx_第1页
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表2 蛋白质含量测定方法小结方法名称基本原理优点缺点凯氏定氮法氮元素在蛋白质分子中含量约为16%，故测定出蛋白质分子中氮元素含量再乘以6.25即为蛋白质含量测定简单快捷只有在被测物的组成是蛋白质时才能用此方法来估算蛋白质含量。其他任何含氮物质均会影响结果。该法曾经是经典的标准方法，但现已不多用双缩脲法蛋白质在碱性条件下与cuso4发生双缩脲反应生成紫红色化合物，该化合物在540-560nm处比色即可求得蛋白质含量该法简便迅速，不受蛋白质特异性的影响该法灵敏度较差，所需样品浓度需在0.2-1.7mg/mlfolin-酚法（lowry法）碱性铜试剂与蛋白质肽键发生双缩脲反应后，蛋白质中酪氨酸的酚基容易与磷钼酸和磷钨酸反应生成蓝色物质，在500nm处比色即可得蛋白质含量该法灵敏度非常高，为25-250g/ml，比双缩脲法的灵敏度高100倍各种蛋白质显色强度有所不同；酚类和柠檬酸对于测定有干扰；folin酚试剂乙的配制十分麻烦、复杂考马斯亮蓝结合法（bradford法）考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水区相结合，结合后现蓝色，在595nm处比色即可得到蛋白质含量该法灵敏度更高，大约比lowry法高四倍；测定快速简便；干扰的物质少该法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差；大量的去污剂如sds会严重干扰测定紫外吸收法蛋白质分子中酪氨酸、色氨酸在280nm处有最大吸收值，各种蛋白质中这几种氨基酸含量差别不大，但由于蛋白质样品中常含核酸类物质，故应分别测定280nm和260nm处的吸光值，并利用经验公式：蛋白质质量浓度=1.45a280-0.74a260,依此得到蛋白含量该法十分简便，测定迅速，样品可回收样品蛋白
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