松口蘑应用研究进展.docx

松口蘑应用研究进展邓影妹，赵华（北京工商大学中国化妆品研究中心，北京市植物资源研究开发重点实验室，北京 100048）摘要：论述了松口蘑的主要功效成分及提取分离、分析方法，综述了松口蘑在食品、保健食品、药品及化妆品等领域的应用。同时，展望了在化妆品领域的应用前景。关键词：化妆品；松口蘑；功效成分；应用进展中图分类号：tq658文献标识码：a文章编号：1006-7264（2014）10-0026-05doi：10.13222/ki.dc.2014.10.007松口蘑 （tricholoma matsutake） 是一种与松树共生的真菌，又称松藤、松茸及合菌等，属于担子菌刚 伞 菌 口 蘑 科（tricholomataceae）口 蘑 属（tricholomo）1。 松口蘑广泛分布在美洲、欧洲、东亚及西亚等地区。 在我国，松口蘑主要集中在西南地区。日本每年从世界各地进口松口蘑，约 40%来自中国云南2。松口 蘑生长需要的环境独特，目前还不能完全人工栽培， 属于国家二级濒危保护物种，是一种珍贵的野生食用菌3。研究发现，松口蘑含有多种功效成分，包括多 糖、氨基酸、蛋白质、多肽、甾类、萜类、挥发油、 油脂以及酚类等 4。松口蘑不仅可以作为美味的食 材，还具有抗肿瘤、抗突变、抗辐射、抗菌、增强免 疫功能、保肝、促进胃肠蠕动、抗衰老和美白等多种功能 5，因此，松口蘑不仅可用于传统的医药 、食 品、保健食品行业，也有望在化妆品领域得到广泛的 应用。1.1.1 多糖的提取提取多糖的方法，常用的有热水浸提法、碱液提 取法、酶解提取法、超声波辅助水提法和微波辅助水 提法等。刘刚等用石油醚回流提取脱脂，再用甲醇和 水提取，经浓缩和醇沉后得到松口蘑多糖，提取率达7.91%6 ；廖丽娟等研究了提取温度、酸碱盐介质种 类及浓度等因素对多糖质量浓度的影响，采用 20 g / l na2co3 溶液，在 90条件下提取，再在沸水中提取 得到松口蘑多糖，每千克松茸提取液中松茸多糖质 量为 33.1 g 7；张娅等采用超声波辅助水提取，提 取率可达 5.10%8；蒋中海等采用酶解法复合提取， 在纤维素酶添加量为 2.0%，果胶酶添加量为 2.0%， 木瓜蛋白酶添 加 量 为 2.0% ， 温 度 为 60 ， ph 为4.0， 时 间 为 80 min 条 件下，提取率 达 6.5% 9； 么宏伟等采用微波提取，微波功率为 660 w，萃取时 间为 45 min，提取率达 11.25%10。1.1.2 多糖的分离纯化提取后的粗多糖中通常会含有蛋白质、核酸及生 物碱等物质，常用的分离纯化方法有活性炭色谱法、 离子交换层法和凝胶过滤层析法等。冯磊等通过 x-5 树脂分离纯化松口蘑粗多糖，树脂对松茸多糖的吸附 率可达 30.83 mg/g，且可有效去除糖类等水溶性杂质 及脂溶性杂质，选择性地保留有效成分，使松茸多糖的含量提高 15%左右 11。刘刚等采用 d101 大孔吸附 树脂和 sephadex g-100 凝胶滤过色谱对松口蘑多糖 进行分离纯化，经脱蛋白和脱色后，可得到 3 个松茸松口蘑的功效成分综合文献报道，对松口蘑功效成分的研究，主要 集中在松口蘑多糖、酚类和萜类上，包括提取、分离 纯化和结构鉴定等方面。1.1 多糖多糖是植物的主要功能性成分，多具有包括免疫 调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗辐射、抗菌、抗 病毒及保护肝脏等保健作用。1收稿日期：2014-08-01作者简介：邓影妹 （1988-），女，河北人，硕士研究生。26科 技 广 场第 10 期邓影妹， 赵 华：松口蘑应用研究进展多糖组分 mts-1，mts-2 和 mts-3 12。赵晶等将粗多 糖 经 deae-sepharose f.f 离子交换柱层析和 sephadex g-100 凝胶柱层析分级纯化，并经苯酚 - 硫 酸法跟踪检测，得到 2 个多糖组分 tms-1 和 tms-2 13。1.1.3 多糖结构分析多糖结构复杂，对多糖进行结构分析是多糖研究 的重要环节。刘刚等采用毛细管气相色谱法测定松茸 多糖的单糖组成，用三氟乙酸水解松茸多糖，六甲基 二硅烷( hmds) 和三甲基氯硅烷( tmcs) 作硅烷化试 剂，将单糖衍生化为三甲基硅烷衍生物，再以肌醇为 内标物，用 hp-50 毛细管色谱柱( 0.32 mm30 m)和 氢火焰检测器( fid) 气相色谱法测定了松茸多糖中单 糖组成，表明松茸多糖是由葡萄糖、木糖和半乳糖组 成的杂多糖，其摩尔比为 14.841.421.0014；刘刚等采用三氟乙酸水解松蘑多糖，用 1- 苯基 -3 甲基 -5- 吡唑啉酮柱前衍生，液相色谱梯度洗脱，测定出 松茸多糖由 d- 葡萄糖、d- 半乳糖、d- 阿拉伯糖和 d- 木糖组成，摩尔比为 18.922.681.63115；程 华通过核磁初步推测松茸多糖组分 tmp-5 亚组分 以 （14）-吡喃葡萄糖为主链，支链为 o-6 处连 有岩藻糖（12）甘露糖（13）-吡喃半乳糖16。1.2 酚类物质多酚具有清除自由基、抗氧化、抗衰老及改善血 液循环等多方面的功效。尹秀莲等将松口蘑依次用石油醚、三氯甲烷、乙醇及水提取，乙醇提取部分再用乙酸乙酯和正丁醇萃取，发现水提取物中基本未检出 总多酚，其余几种提取物均含有一定量的总多酚，乙 酸乙酯提取物中含多酚较多，提取率在 2.72%左右17； 黄俊丽等以 80%的乙醇作提取液，料液比为 1 g30 ml， 在 40下水浴浸提 2 h， 浸提次数为 3 次，提出的 多酚浓度约为 2.4 mg/ml 18 ；研究同时也表明，可以 用水提取多酚，在 100沸水浴中浸提 30 min，然 后在 4 000 r/min 转速下离心 20 min，过滤，经测定滤 液 中 多 酚 浓 度 约 为 2.1 mg/ml 18。 kang b h 等 在70 90，2 h4 h 条件下水提取多酚含量为 30 mg/g 50 mg/g 19。尹秀莲等将松口蘑依次用石油醚、三氯甲烷、乙 醇及水提取，乙醇提取部分依次用乙酸乙酯和正丁醇 萃取后发现，各提取物中均含有一定量的黄酮，其中 乙酸乙酯和正丁醇提取物中总黄酮含量较高，分别为6.68% 和 5.36% 17。 hyun-woo lim 等将松口蘑样品 用二氯甲烷室温下萃取放置 12 h （重复 3 次），过滤后将残余物用甲醇萃取，减压蒸馏去溶剂，剩余的 残余物溶解在蒸馏水中，然后用乙酸乙酯、丁醇蒸馏，重复 3 次，可以得到的黄酮含量为 37.4 mg/g 和18.2 mg/g，用乙酸乙酯蒸馏含量高些20。1.3 其他成分刘存芳等对松口蘑中的萜类物质进行了研究，采 用 soxhelt 提取器，以乙醚为溶剂，对松口蘑粉末进行回流提取，并对其脂溶性物质进行定性确定。采用 薄层色谱法 （tlc 法） 分析脂溶性物质的组成，并经 香草醛 - 高氯盐酸实验和浓硫酸实验等，得出松茸脂 溶性物质中共有 9 种萜类物质，得率为松茸干重的4.86%21。廖丽娟等用水蒸气蒸馏法提取松茸中的挥 发油，采用气相色谱 - 质谱联用技术( gc-ms ) 和峰 面积归一化法分离分析其化学成分和相对含量，得出 松口蘑挥发油的主要成分有己酸(11.04) 、乙酸冰片 酯(11.28)和肉桂酸甲酯(27.37)等22。刘刚采用索氏提取法提取松茸中的粗脂肪，通过甲酯化并运用气 相色谱 - 质谱联用 gc/ms 技术测定其脂肪酸组成与 含量，结果从松茸的脂肪中检出 6 种主要脂肪酸，其 中不饱和脂肪酸含量达 85.3%，以油酸和亚油酸为 主，油酸与亚油酸相对含量分别为 57.6%和 26.7%23。 另外，xuhui ying 等采用水料比例为 101(v / w)，超声辅助提取 10 min 后，60 水浴提取 1 h，然后采 用高效液相色谱分析发现松口蘑中的 12 种成分，包 括酪氨酸、胞苷、尿苷、eritadenine、苯丙氨酸、烟酰胺、肌苷、鸟苷、色氨酸、腺苷、5- 脱氧 -5- 甲 硫和核黄素等24；王元忠等采用火焰原子吸收法测定 松 口 蘑 中 k、 ca、 na、 mg、 fe、 pb、 cd、 co、 cr、 zn、mn 和 cu 等，结果表明除含有较高 的 k、 na、 ca 和 mg 和一定量的有害元素 pb 和 cd 外，其余 6 种对人体有益的微量元素较为丰富25。2 松口蘑的应用2.1 食品和保健食品方面品质好的松口蘑质地硬实，颜色微白，香气浓 郁，口感好，营养成分高 。 松 口 蘑 粗 蛋 白 、 粗 脂 肪、粗纤维、粗多糖、氨基酸、灰分、vc 及矿质元素的含量分别为 12.02、7.74、7.84、9.53、8.67、5.76 、0.504 6 mg/g；矿质元素中 k 和 p 含量较高，平均可达 24.063 mg/g 和 5.278 mg/g，zn 含量高于其他常见食用菌子实体 ， 平 均 含 量 为0.564 8 mg /g，同时含有甾体等有效成分26, 27。可以看 出，松口蘑的营养丰富，功效成分和微量元素含量较 高，是一种良好的营养食材。松口蘑不仅是营养丰富的食品，其具有有效清除 自由基，增加人体抗氧化能力和抗衰老能力，同时具27日用化学品科学科技广场第 37 卷提高人体免疫力和记忆力的功效，更为其用于保健品的开发提供可能。研究发现，松口蘑提取物能有效清 除 fenton 反应产生羟基自由基和光照核黄素产生超 氧阴离子自由基，抑制羟基自由基诱发卵磷脂脂质过 氧化损伤，增加机体抗氧化能力，对辐射所致的小鼠免疫功能损伤有明显的保护作用9。松口蘑提取物能 明显增强小鼠的脾指数、脾细胞对 cona 的增殖反 应、巨噬细胞吞噬功能和抗体生成能力28。松口蘑提 取物可能正是通过提高机体免疫和抗氧化能力而发挥 抗衰老作用。通过建立 d- 半乳糖致衰老小鼠模型， 研究松茸多糖的抗衰老作用。研究发现，低、高剂量 组可明显提高衰老小鼠的学习和记忆能力，降低衰老 小鼠的脑、胸腺及脾指数，还可不同程度提高衰老小 鼠血清和脑组织 sod 和 gsh-p x 活性，抑制 mda水平升高29。目前，市场上以松口蘑为原料的食品和保健食品已 经存在一些，如松茸腐乳、松茸冲片及松茸保健酒等。2.2 医药方面松口蘑具有很高的抗肿瘤活性，在 27 种担子菌 抗癌食用菌中，其抗癌活性居第 2 位30。多糖是由多 个单糖分子缩合、失水而成，是一类分子机构复杂且 庞大的糖类物质，活性多糖是指具有某种特殊生理活 性的多糖化合物31。生物多糖来源广泛，在抗肿瘤、抗病毒、降血糖、抗凝血及抗衰老等方面发挥着重要 的生理活性作用32。目前，对松口蘑抗癌作用的活性 成分研究上，主要集中在松口蘑多糖上。松口蘑多糖具有体外抗肿瘤活性，作用机制可能 与其能够上调 r63 基因，上调 p53m rna 表达水平， 抑 制 u87、 hela、 panc-1 以 及 mcf-7 细 胞 生 长 ， 引起上述细胞 s 期阻滞有关33, 34。松口蘑茵丝体中活 性糖蛋白 mtsgs1 能够抑制细胞周期中 s 到 g2m 期 的转化阶段，从而抑制 hela 细胞增殖，诱导细胞形 态异常，细胞发生凋亡35。另外，采用细胞培养法观察，松口蘑对 k562 细胞增殖具有明显的抑制作 用36, 37。松口蘑乙醇提取物能够抑制小鼠 s180 肉瘤的 生长。对松口蘑抗肿瘤活性部位进行研究发现，醇提 部位 mtx 能对肿瘤细胞的增殖有抑制作用38。松茸 多糖对肿瘤细胞的抑制作用随纯度和浓度的提高而提 高，降解后的多糖没有直接抗肿瘤活性。另外，研究发现，松口蘑提取物对染发剂的致突 变作用抑制率很高，其抑制作用存在明显的剂量 - 反应关系39。采用修改的 ames 试验，研究真菌植物松口蘑提取物 amh 能显著性抑制 2-af 和卷烟焦油 的致突变作用，amh 可使 2-af 的诱发回变菌落数28下降至阴性范围40, 41。采用修改的 ames 试验 ，研究松茸提取物 pme 能显著性抑制 b(a)的致突变作用， 在肿瘤预防方面具有应用前景42。松口蘑提取物具有 抗突变作用，在肿瘤预防和降低遗传危害方面具有应 用前景。从抑菌作用来看，松口蘑发酵液中提取的多糖或 是菌丝体提取的多糖都有明显抑菌作用，抑菌圈大小 接近。对金黄色葡萄球菌有明显抑菌作用，随着浓度 增大，抑菌圈增大43。松口蘑脂溶性物质对肠炎沙门 菌 50040 株和大肠杆菌 atcc25922 株的 mic 和 mbc 都较小，说明松茸脂溶性物质对这 2 个实验菌株有强 烈的抑制和灭活作用21。这将为松口蘑抗菌消炎方面 的研究提供参考。松口蘑具有很高的药用价值，据文献记载，松口蘑具有强身、益肠胃、止痛、理气化痰和驱虫等功 效。现代医学研究表明，松口蘑具有抑制肿瘤细胞增 殖、抗癌、抗突变和抑菌等功能44, 45，为松口蘑用于 药物筛选打下基础。由于松口蘑生活习性独特，目前 还不能进行人工栽培，离开共生植物的松口蘑菌丝体 生长速度缓慢，容易污染杂菌，制约着对松口蘑的深 入研究。因此研究出适于松口蘑生长的培养方法，不 仅能使优良风味的松口蘑高产，满足人们需求，也能 将其更好的用于研究以制备药物46, 47。2.3 化妆品方面松口蘑除用于食品保健品方面的研究外，在化 妆品领域的应用研究也逐渐成为热点 。研究发现， mp-5 亚组分能够抑制酪 氨酸酶活性，同时对 dpph 自由基有一定的清除作用。mp-5 亚组分样 品通过对下调基因和主要影响因子 mitf、pomc 和 tyr 的基因表达水平，从而减少黑色素的形成，且 优于熊果苷16。另外，松口蘑与景天的混合提取物有 美白的功效，其美白作用通过抑制酪氨酸酶活性来实 现48。桑枝与松口蘑的混合提取物也发现有此功效49。松口蘑和绿茶的混合提取物具有抗炎和抗氧化的作 用50。松口蘑中得到的反式甲基肉桂酸盐能阻止黑色 素形成，同时有降低有效活性成分变性的作用51。以 上研究表明，松口蘑用于美白化妆品的研发是具有可 行性的。研究发现，松口蘑多糖具有良好的抗氧化活性， 与茶多酚相近。松口蘑含有酚类化合物，酚类化合物 由于其羟基取代的高反应性和吞噬自由基的能力而有 很好的抗氧化活性52，醇提的松口蘑多酚具有很强的还原力，能够清除羟基自由基和卵磷脂脂质体53, 54。松口蘑的脂溶性物质包括萜类物质和黄酮。对松口蘑科 技 广 场第 10 期邓影妹， 赵 华：松口蘑应用研究进展的脂溶性物质做抗氧化实验发现，脂溶性物质对oh均有清除作用22。由于松口蘑具有抑制酪氨酸酶、下调黑色素生 成和清除自由基抗老化的作用，将松口蘑提取物用 于化妆品的添加，开发松口蘑天然产物化妆品，是一个值得探讨的问题。目前，市场上已经出现了添 加松口蘑的产品，包括松口蘑面膜、清肌乳、肌源 水、乳液、精华液和眼霜等。产品的宣称具有清除 自由基、抑制酪氨酸酶和分解抑制黑色素的生成的 作用，能延缓细胞衰老，使皮肤亮白 、色泽光亮， 与文献报道基本一致。中国植物学会药用植物及植物药专业委员会, 2010.9 张娅, 李宝才, 项朋志, 等. 松茸多糖超声提取物抗氧化活性 研究j. 化学与生物工程, 2011, 28(9), 75-78.10 么宏伟, 张学义, 冯磊, 等. 微波、超声波萃取技术提取松茸 多糖的研究j. 中国林福特产, 2008 (6): 10-15.11 冯磊, 么宏伟，谢晨阳, 等. 树脂吸附法分离松茸多糖的研 究j. 中国林福特产, 2012(5): 73-74.12 刘刚, 王辉, 郭成希. 松茸多糖的分离与纯化j. 中国药师,2011(8): 1099-1102.13 赵晶. 松茸多糖的分离纯化及其美白活性的研究d. 长春: 长春中医药大学, 2010.14 刘刚, 王辉, 周建, 等. 柱前衍生化毛细管气相色谱法分析松 茸 多 糖 的 单 糖 组 成 j. 中 国 实 验 方 剂 学 杂 志 , 2011, 21:62-64.15 刘刚, 王辉, 周本宏. 高效液相色谱法分析松茸多糖的单糖 组成j. 中国医院药学杂志, 2012, 32(10): 758-761.16 程华. 松茸多糖的分离纯化、结构鉴定及其美白途径的研究d. 北京: 北京工商大学, 2013.17 尹秀莲, 游庆红, 蒋中海, 等. 松茸不同溶剂提取物及其抗氧 化活性j. 食品与发酵工业, 2011, 37(5): 194-198.18 黄俊丽, 张慜. 松茸、黑牛肝菌、双孢白蘑菇提取物体外抗 氧 化 性 试 验 研 究 j. 食 品 与 生 物 技 术 学 报 , 2011, 30 (1):342-347.19 kang b h, lee j m, kim y k. optimization of hot water extra-ction conditions for tricholoma matsutake by response surface methodology j. journal of the korean society of food scienceand nutrition, 2010, 26(3): 497-503.20 hyun-woo lim, jung-hye yoon, young-suk kim, et al. free radical-scavenging and inhibition of nitric oxide production byfour grades of pine mushroom (tricholoma matsutake sing.) j.food chemistry, 2007, 103: 1337-1342.21 刘存芳. 三种真菌子实体脂溶性成分的研究j. 食品工业科 技, 2009(3):172-174.22 廖丽娟, 金光洙. 松茸挥发油化学成分的气相色谱 - 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