小吞噬细胞实验PPT课件.ppt

小吞噬实验 1 1掌握血液中的中性粒细胞体外吞 噬异物能力的测定方法。 2观察机体的非特异性免疫现象。 实验目的 2 1人外周血中性粒细胞吞噬功能检 测（体外实验）。 2小鼠腹腔中性粒细胞吞噬功能的 检测（体内实验）。 实验内容 3 一.人外周血中性粒细胞吞噬功能检测（体外 实验） 实验原理 血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞，通过趋化、 调理、吞入和杀菌等步骤，能吞噬和消化衰老， 死亡细胞即病原微生物等异物，是机体固有免疫 的重要组成部分。将白细胞悬液与细菌混合，保 持一定时间后，取样涂片染色镜检，可以测定中 性粒细胞吞噬细菌的百分率和吞噬指数。本实验 有助于诊断疑有吞噬细胞障碍的疾病。 在某些情况下，小吞噬细胞也参与某些超敏反 应和自身免疫疾病的组织损伤和炎症过程，因此 ，测定小吞噬细胞的功能可在一定程度上反映机 体的免疫状态，也可作为判定疗效的一种指标。 4 来 源： 骨髓。 存在部位： 血液 、 炎症部位（全 身）。 功能基础：溶酶体，过氧化物酶及 杀菌物质。 功 能：具有吞噬细菌和清除 溃残物质等防御功能。 反应时间及寿命：反应时间快,数 分钟到几小时，寿命短.平均数小 时。 小吞噬细胞 5 1.菌液：表皮葡萄球菌菌液（9亿 /ml） 2.抗凝剂：3.8%枸橼酸钠或肝素（ 25U/ml） 3.毛细吸管、凹玻片、载玻片、 牙签、甲醇、瑞特-吉姆萨染液、 pH6.4PB、酒精棉球、采血针等 。 实验材料 6 1、取样2、孵育3、制片4、镜检 3.8%枸橼酸钠或肝素 0.4ml 无菌采血 0.2ml 菌液 0.02-0.04ml 单凹玻片 湿盒 孵箱 370C孵育30-45min 实验步骤 7 1. 取一小滴上述混合液，置于载玻片上，用另一载玻片推 成薄血片，自然干燥。 2. 滴加甲醇固定5min，水洗。 3. 置瑞特液1min，置pH6.4PB中3min，置吉姆萨液染5- 10min。水洗，待干。 制片 8 红细胞 中性粒细胞 葡萄球菌 镜检 9 油镜观察下，中性粒细胞细胞质呈淡蓝色，细 菌呈深蓝色，红细胞呈褐色，细胞核呈紫色。 结果观察 10 计数100个中性粒细胞，同时计数吞噬细菌的 中性粒细胞数以及被吞噬的细菌总数，计算吞 噬百分率或吞噬指数。 吞噬百分率= 吞噬指数= 表示法 吞噬细菌的中性粒细胞数 100 X 100% 100个吞噬细胞吞噬的细菌总数 100 11 1.1.人类白细胞的吞噬活性在人类白细胞的吞噬活性在3737时最好，温度过时最好，温度过 高过低均会使其吞噬能力减低。高过低均会使其吞噬能力减低。 2.2.个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能 力亦不同。力亦不同。 3.3.掌握好细菌与中性粒细胞的作用时间。中性粒掌握好细菌与中性粒细胞的作用时间。中性粒 细胞对细菌的吞噬是一个非常迅速的过程，吞细胞对细菌的吞噬是一个非常迅速的过程，吞 噬噬5min5min时吞噬率达时吞噬率达45%45%，10min10min时接近时接近 80%80%，20min 20min 即达饱和。即达饱和。 4.4.取取“ “细菌全血细菌全血” ”涂片时，要混匀后再取；制作涂片时，要混匀后再取；制作 血涂片要求推出尾部，过厚或过薄，均不利观血涂片要求推出尾部，过厚或过薄，均不利观 察。察。 注意事项 12 二.小鼠腹腔中性粒细胞吞噬功能检测（体外检测） 1.15-20g小白鼠。 2.表皮葡萄球菌菌液（9亿/ml）。 3.瑞特-吉姆萨染液。 4.注射器及针头、无菌肉汤、解剖板 、剪刀、镊子、碘酊、乙醇。 材料 13 1.诱导：实验前一天给小白鼠腹腔注射无菌肉汤0.5 -1.0ml，轻揉腹部。 2.实验前4-5h给小白鼠腹腔注射无菌肉汤0.5- 1.0ml，轻揉腹部。 3. 注射：实验时给小白鼠腹腔内注射表皮葡菌菌液 0.5ml，轻揉腹部。 4. 取样： 注射后35 -45min处死小白鼠，用毛细吸 管抽取腹腔液滴片或直接涂片 5.染色：标本干燥后瑞氏染-吉姆萨染液染色。（染 色同体外法） 6.镜检，观察中性粒细胞吞噬表皮葡萄球菌的现象。 实验步骤 14 结果观察：油镜检查，先寻找白细 胞，观察细胞质中有无被吞噬