医学检验实验指导.doc

临床检验基础实验指导（供医学检验专业五年制本科使用） 遵义医学院医学检验系组编 2005年12月 第一章 外周血常规检验综合评价实验【检验流程】 熟悉检验方法及原理 试剂配制及准备标本采集及处理白细胞计数及分类计数红细胞计数及血红蛋白测定血小板计数检验结果综合评价及临床意义探讨实验一 红细胞计数【目的】 掌握显微镜红细胞计数（red blood cell count）方法。【原理】 用等渗稀释液将血液稀释一定的倍数，充入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数量，经换算求出每升血液中的红细胞数量。【器材】 显微镜、改良Neubauer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒。【试剂】 红细胞稀释液（Hayem液）：氯化钠1.0g，结晶硫酸钠5.0g（或无水硫酸钠2.5g）蒸馏水加至200ml。溶解后加20g/l伊红溶液1滴，过滤后使用。【标本】 外周血或抗凝血（EDTA抗凝）。【操作】 1 稀释液 取小试管1支，加红细胞稀释液2ml。2加血 用清洁干燥微量吸管采集末梢血或抗凝血10ul，檫去管外余血，轻轻加至红细胞稀释液底部，再轻吸上清夜清洗吸管23次，立即混匀。3充池 混匀或用微量吸管或玻璃棒将红细胞悬液充入计数池，室温下平放35min，待细胞下沉后于显微镜下计数。4计数 用高倍镜依次计数中央大方格内4角和正中5个方格内的红细胞数。5计算 红细胞/L=N25/510106200=N1010=N/1001012 N ： 表示5个方格内数得的红细胞数。 25/5 ：将5个大方格内数得的红细胞数换算成1个大方格的红细胞数。 10 ：将1个大方格红细胞换算成1ul血液内红细胞。106：1L106ul200：为血液的稀释倍数。【注意事项】1 采血时不能过分挤压采血部位，针刺部位深度必须适当。2 采血应顺利、准确，采血部位不得有水肿、发绀、冻疮、炎症等。红细胞数量增高时可适当加大稀释倍数。3 大小方格内压线细胞的计数遵循数上不数下、数左不数右的原则。避免多数或漏数。4 稀释液要过滤，小试管、计数板均须清洁干燥，以免杂质、微粒等被误认为是细胞。5 如无上述稀释液时，也可用新鲜配制的等渗盐水代替。6 将细胞悬液充入计数池时要一次完成，不能产生满溢、气泡、或充池不足的现象。7 红细胞在计数池中若分布不均，每个方格之间相差超过20个以上时要重新充池计数。正常数值范围内，2次红细胞计数相差不得超过5%。【方法学评价】 目视计数法是传统的的红细胞计数法，不需要特殊设备，但操作复杂、费时。【质量控制】1计数评价在细胞计数的评价中，多采用两差比值（r）评价。2稀释造成稀释倍数不准确的常见原因有：稀释液或血液加样不准确。吸血时吸管内有气泡。未檫去吸管外血。血液加入稀释液时使上清液浑浊，血液被吸管带出。稀释液放置的时间过长，蒸发浓缩。【参考值】 成年男性：（4.05.5）1012。成年女性：（3.55.0）1012。新生儿： （6.07.0）1012。实验二 血红蛋白测定氰花高铁血红蛋白测定法【目的】 掌握氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定方法。【原理】 在血红蛋白转化液中，除硫化血红蛋白外，其余血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与氰离子（CN-）结合，生成稳定的复合物氰化高铁血红蛋白（hemoglobin cyanide，HiCN）。棕红色的氰化高铁血红蛋白在波长540nm处有吸收峰，可用校正的高精密分光光度计进行直接定量测定，或用HiCN参考液进行比色法测定，根据标本的吸光度即可求出血红蛋白浓度。【器材】 一次性消毒采血针，微量吸管，试管。5ml移液管，75%（V/V）乙醇棉球，无菌干棉球，分光光度计，试管。【试剂】1HiCN转化液（文齐液）氰化钾（KCN）50mg，高铁氰化钾K3Fe（CN）6200mg，无水磷酸二氢钾（KH2PO4）140mg，Triton X 100 1.0ml，蒸馏水加至1000ml，纠正pH至7.07.4。此液淡黄色透明溶液，用蒸馏水调零，比色杯径1.000cm，波长540nm处的吸光度应80【注意事项】1 由于醛反应快速，应在规定时间内观察结果。2 卟胆原、内生性吲哚、黑素原可造成假阳性。3 阳性反应时稀释的方法同改良Ehrlich法。4 尿液要新鲜。【方法学评价】 干化学法操作简便、快速，既可定性，也可以定量，适用于肉眼观察与仪器检测，而且不受尿中胆红素的影响，很少出现假阳性，因此该法优于Ehrlich法。【质量控制】 同改良Ehrlich法。【参考值】 阴性或弱阳性，1：20稀释后阴性。实验五 尿沉渣检查非染色法尿沉渣显微镜检查【目的】 掌握尿沉渣非染色法显微镜检查的内容和方法。【原理】 采用显微镜观察的方法，根据尿液细胞、管型等有形成分的形态特征，识别并记录其在显微镜一定视野内（或一定体积尿液内）的数量。【器材】 载玻片、离心机、刻度离心管、盖玻片（2mm2mm）、滴管、普通显微镜、定量尿沉渣分析板。【标本】 新鲜尿液。【操作】1 未离心直接涂片法 混匀：充分混匀尿液。 制备涂片：取混匀的尿液1滴与载玻片上，加盖玻片，注意避免产生气泡。 观察计数：先用低倍镜观察全片细胞、管型等成分的分布情况，然后用高倍镜确认。注意使用暗视野观察尿液有形成分，特别是透明管型。管型在低倍镜下观察。至少计数20个视野；细胞在高倍镜下观察至少计数10个视野，取其平均值报告；结晶按高倍镜视野中分布范围估计报告。计数时要注意细胞的完整性，还要注意有无其他异常巨大的细胞、寄生虫虫卵、滴虫、黏液丝等，男性尿液标本还要注意有无精子及卵磷脂小体。2 离心沉淀涂片法（1） 离心尿液：适用与尿外观非明显浑浊的尿标本，是尿沉渣检查标准化推行的方法。取尿液10ml离心5min（1500r/min），要求相对离心力（RCF）为400g。（2） 提取尿沉渣：手持离心管倾斜4590，用滴管吸去上层尿液，保留下层尿0.2ml尿沉渣。（3） 涂片：轻轻混匀尿沉渣后，去1滴（大约50l）置载玻片上，用18mm18mm或22mm22mm的盖玻片覆盖后显微镜检查。（4） 观察计数：与未离心尿直接涂片法相同。3 定量尿沉渣分析板法 定量尿沉渣分析板由一块硬质塑料板制成。每块板内分为10个统一深度（0.1mm）的计数池，每个计数池内的计数区为1.0l。计数区分为10个大方格，每个大方格又分为9个小方格。 未离心法：直接取充分混匀的尿液1滴充入定量尿沉渣分析板计数池内，在低倍镜下计数10个大方格内管型总数，在高倍镜下计数10个大方格内细胞总数，此即每微升尿液某种细胞或管型的数量。 离心法：尿液标本处理同离心沉淀涂片法，然后充池计数，方法同上。4 报告结果 涂片法：细胞以最低数最高数/HP、管型以最低数最高数/低倍镜视野（LP）报告。结晶以所占视野面积报告，无结晶为（-）；结晶占1/4视野为（+）；结晶占1/2视野为（+）；结晶占3/4视野为（+）；满视野结晶为（+）。如果细胞、管型的数量过多难以计算，也可按结晶的报告方式报告结果。 定量尿沉渣分析板法：以每微升某种细胞或管型数报告。【参考值】 非染色法尿沉渣检查参考值见下表。表 尿沉渣主要成分参考值第三章 浆膜腔积液常规检验综合评价实验【检验流程】熟悉检验方法及原理试剂配制及准备标本采集及处理关节腔积液检查胸腹水检查脑脊液检查检验结果综和平价及临床意义探讨一 脑脊液检验实验一 脑脊液理学检查【目的】 掌握脑脊液理学检查的内容、方法。【标本】 新鲜脑脊液。【操作】1 观察颜色 肉眼观察脑脊液的颜色，分别以无色、乳白色、红色、棕色或黑色、绿色等文字如实描述报告。2 观察透明度 肉眼观察脑脊液透明读变化。正常脑脊液清晰透明，病理情况下可出现不同程度浑浊，可分别以“清晰透明、微浑、浑浊”等如实报告。3 观察凝块或薄膜 轻轻倾斜试管，肉眼仔细观察有无凝块或薄膜。正常脑脊液无凝块或薄膜，脑膜炎时可形成凝块或薄膜，分别以“无凝块”、“有凝块”、“有薄膜”等如实报告。【注意事项】1 当标本颜色或透明度改变不明显时，应在灯光下以白色或黑色为背景仔细观察，同时观察有无凝块。2 怀疑为结核性脑膜炎时，标本应在24环境中静置1224h，再观察脑脊液表面有无薄膜形成。【参考值】 无色，清晰透明，放置后无凝块或薄膜形成。实验二 脑脊液显微镜检查【目的】 掌握脑脊液显微镜检查的内容、方法。【器材】 显微镜、改良牛鲍计数板、微量吸管、刻度吸管、小试管。【试剂】 生理盐水或红细胞稀释液，冰乙酸，白细胞稀释液，瑞氏染液或瑞-吉染液。【标本】 新鲜脑脊液。【操作】（一） 细胞总数计数1 直接计数法（适用于清晰透明或微浑脑脊液） 充池：直接用微量吸管吸取混匀的脑脊液，充入血细胞计数板的上下2个计数池。 计数：静置23min后，低倍镜下计数2个计数池内四角和中央大方格共10个大方格内的细胞数。 计算：10个大方格内的细胞总数即为每微升脑脊液细胞总数，再换算成每升脑脊液细胞总数。2 稀释计数法（适用于浑浊的脑脊液） 稀释：如标本细胞过多，可根据标本内细胞多少，用生理盐水或红细胞稀释液对标本进行一定倍数稀释。 充池：用微量吸管吸取混匀后的稀释脑脊液充入1个计数池。 计数：静置23min后，低倍镜计数2个计数池内四角和中央大方格共5个大方格内的细胞数。 计算：根据5个大方格内细胞总数及稀释倍数，计算每升脑脊液的细胞总数。（二） 白细胞计数1 直接计数法（非血性清晰透明或微浑浊脑脊液） 除去红细胞：在小试管内加入冰乙酸12滴，转动试管，使内壁黏附少许冰乙酸后倾去，滴加混匀的脑脊液34滴，混匀，放静置数分钟，使红细胞破坏。 充池：用微量吸管吸取破坏红细胞后的脑脊液（吸取前混匀），充入2个计数池。 计数：静置23min后，低倍镜计数2个计数池内四角和中央大方格共10个大方格内的白细胞数。 计算：10个大方格内的白细胞总数即为每微升脑脊液白细胞总数，再换算成每升脑脊液白细胞总数。2 稀释计数法（浑浊脑脊液） 稀释破坏红细胞：根据标本内白细胞多少情况，用白细胞稀释液对标本进行一定倍数的稀释，混匀，放置数分钟，破坏红细胞。 充池：用微量吸管吸取混匀稀释后的脑脊液充入1个计数池。 计数：静置23min后，低倍镜计数1个计数池内的四角和中央大方格共5个大方格内的白细胞数。 计算：根据5个大方格内的白细胞总数和稀释倍数，计算每升脑脊液的白细胞总数。（三）白细胞分类计数1 直接分类法 白细胞计数后，转换高