VEGF检测在胸部恶性肿瘤中临床意义.doc

VEGF检测在胸部恶性肿瘤中临床意义马晨光（黑龙江省医院胸外科，150036） 摘要：目的：探讨检测胸部恶性肿瘤患者外周血中血管内皮生长因子（VEGF）的临床意义。方法：32例健康志愿者作为正常对照组，45例肺癌患者，30例食管癌患者。采用ELISA方法检测外周血VEGF的含量，比较各分组间的差异。结果：肺癌、食管癌阳性观察组血清VEGF阳性表达率及含量明显高于正常对照组（P0.05）,VEGF的阳性表达率及含量在按不同的病理生理特征分组的肺癌、食管癌患者中表现出统计学差异（P0.05）。结论：VEGF水平对肺癌、食管癌患者有诊断价值。血清VEGF水平与肺癌、食管癌的病理生理特征、恶性行为密切相关。检测血清VEGF对于判定肺癌、食管癌病理生理特征有一定参考意义。VEGF可作为临床常用检测食管癌、肺癌的血清检测物。关键词：血管内皮生长因子，肺癌，食管癌，ELISAThe Clinical Value of Detection of Serum Level of VEGF in Esophageal CarcinomaMA Chen-guang(The Provincal Hospital of Heilongjiang 150036)Abstract ：Objective: To research the clinical value for thoracic malignant tumors by detection of the serum level of VEGF. Methods: The level of serum VEGF was determined by using enzyme-linked immunosorbent assay in 45 patients with lung carcinoma and 30 patients with esophageal carcinoma, compared with the levels of the controls in which there are 32 volunteers for health examination, and then the results were analyzed. Results: The serum levels and positive rates of VEGF in the positive group are higher than that in healthy group with statistic significant difference（P0.05）; There are significant difference in the serum levels and positive rates of VEGF in the different groups divided on pathophysiologic characters of lung carcinoma and esophageal carcinoma（P0.05）.Conclusion: The detection of serum VEGF may be valuable to the diagnosis of lung carcinoma and esophageal carcinoma. The serum level of VEGF in lung carcinoma and esophageal carcinoma patients were strongly correlated to the pathophysiologic characters and malignant behavior of tumor. There may be some reference value for the prognosis of the pathophysiologic characters of lung carcinoma and esophageal carcinoma by the combined detection of serum VEGF.Key Words: Vascular Endothelial Growth Factor; Lung carcinoma; Esophageal carcinoma，enzyme linked immunosorbent assay 肺癌、食管癌是常见的胸部恶性肿瘤，也是人类最常见的恶性肿瘤之一。我国是肺癌、食管癌的高发国家，近年来二者的发病率逐年升高。食管癌是消化道常见的恶性肿瘤之一，高发年龄在6064岁。我国是世界上食管癌发病率和死亡率最高的国家，全世界每年食管癌新发病例约31.04万，而我国占16.72万，其中河南省林县男性食管癌发病率高达478.87/10万，是世界高发地区之一。肺癌是最常见的肺部原发性恶性肿瘤。世界上至少有35个国家的男性肺癌为各癌肿死因中第一位，女性仅次于乳腺癌的死亡人数。本病多在40岁以上发病，发病年龄高峰在6079岁之间。男女患病率为2.3:1。种族、家属史与吸烟对肺癌的发病均有影响。在我国，肺癌也已在男性中占常见恶性肿瘤的第一位，在女性中占第二位。肺癌、食管癌发病隐匿，早期诊断比较困难，待患者自觉有明显临床症状时，往往已发展到中晚期，而且预后很差，严重威胁人类的生命与健康，如何实施有效的早期筛选方案，探讨肿瘤的发生和发展机理是目前研究者关注的重要问题。本研究试图通过统计正常对照组及肺癌、食管癌患者的外周血VEGF含量，分析VEGF在正常对照组及肺癌、食管癌患者中含量和阳性表达情况，以及VEGF在不同病理生理分组中的差异，研究它们的临床意义及相互关系，希望能够将VEGF作为临床上有参考意义的常规血清检测物。1 资料与方法1.1临床资料实验组：全部病例均为我科从2006年9月至2009年1月收治，经临床明确诊断（包括钡餐透视、胸部X线、胸部CT、气管镜、胃镜、脱落细胞学、病理切片证实等）为肺癌、食管癌患者。并根据我国1997年肺癌、食管癌临床病理分期标准确定的临床分期。剔除不符合标准病例，共75例，其中肺癌45例，食管癌30例。肺癌组年龄3679岁，平均60岁。肿瘤3cm患者19例，肿瘤3cm患者26例；按TNM分组：I+II期患者30例，III+IV期患者15例；低分化癌组21例，中高分化癌组24例；无淋巴结转移组18例，已有淋巴结转移组27例。食管癌组年龄3975岁，平均58岁。肿瘤3cm患者13例，肿瘤3cm患者17例；按TNM分组：I+II期患者11例，III+IV期患者19例；低分化癌组10例，中高分化癌组20例；无淋巴结转移组12例，已有淋巴结转移组18例。正常对照组：共32例，来源于健康志愿者，男21例，女11例，3070岁。无心、肺、肝、肾主要脏器疾患，无家族肿瘤病史。剔除标准：近期有严重感染、手术、创伤史患者；服用类固醇药物及有类风湿患者；妊娠、月经期妇女；已进行过放、化疗的肺癌、食管癌患者；贫血，Hb90g/L。1.2方法标本的收集与保存VEGF检测所需血清于手术治疗前应用加促凝剂的真空、分离胶采血管采取晨起空腹静脉血3.5mL，室温放置1015分钟后，2500r/min离心10分钟，分离血清，将标本分别放入Eppendorf管中，于20保存待用。检测方法1、检测试剂与方法VEGF检测所需试剂盒购自博奥生物公司。应用ELISA法检测，检测波长450nm。2、设备（1）酶标仪：Stat Fax-2100酶标仪。（2）血液分析仪：Sysmex公司SF-3000自动血液分析仪。（3）结果判定VEGF阳性界值采用正常人95%可信区间上限：107.6pg/mL（x+1.96s）； 1.3统计学处理数据应用简明统计10.3统计软件包进行统计学分析处理。采用的统计方法为X2检验。2结果2.1 VEGF的阳性表达情况通过上述试验方法、试剂及设备检测血清VEGF含量，记录检测数值。将超过各项指标上限的病例记为阳性病例。统计VEGF在正常对照组、肺癌组、食管癌组以及按不同病理生理特征分组的各组中的阳性表达情况，详见表1、2。表1 VEGF在所有观察对象的阳性表达情况Table 1 The positive rates of serum VEGF in all objects of observation类别 nVEGF阳性n % p正常组 32 4 12.50肺癌组 45 27 60.00 P0.05=0.0000食管癌组 30 16 53.33 P0.05=0.00062.2 VEGF的含量比较肺癌组、食管癌组与正常组比较：肺癌组、食管癌患者血清VEGF含量均较正常对照组显著升高，具有统计学意义（P0.05） 不同病理生理特征分组的肺癌、食管癌患者比较：肺癌组：血清VEGF在淋巴结已转移组及III+IV期组含量明显升高，具有统计学意义（P0.05），而不同肿瘤大小（P=0.139）及不同分化程度（P=0.714）VEGF含量无显著性统计学差异。食管癌组：血清VEGF含量在肿瘤长度3cm组、III+IV期组、已有淋巴结转移组中含量升高，具有统计学意义（P0.05），而不同分化程度（P=1.000）VEGF含量无显著性统计学差异。表2 VEGF在不同临床病理生理分组的阳性表达情况Table 2 The positive rates of serum VEGF in the different groups grouped by the clinical pathophysiological characteristics of thoracic malignant tumors类别nVEGF阳性n%P肺癌 组肿瘤大小3cm19947.37 3cm261869.23P0.05=0.1392TNM分期I+II期301343.33 III+IV期151493.33P0.05=0.0012分化低分化211257.14 中高分化241562.50P0.05=0.7144淋巴结无转移18633.33 已转移272177.78P0.05=0.0029食管癌组肿瘤大小3cm13323.08 3cm171376.47P0.05=0.0086TNM分期I+II期11218.18 III+IV期191473.68P0.05=0.0068分化低分化10550.00 中高分化201155.00P0.05=1.0000淋巴结无转移12216.67 已转移181477.78P0.05=0.00222.3肺癌组与食管癌组比较肺癌组血清VEGF含量与食管癌组VEGF含量比较，二者无显著性统计学差异（P0.05）。3讨论肿瘤血管形成不但为肿瘤细胞生长提供条件, 也使肿瘤细胞较容易地通过尚不成熟的新生血管进入血流进行远处转移。某些恶性肿瘤为了获得足够的氧气和营养物质,自身可以释放一些化学物质诱导新生血管的形成,血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor VEGF)被认为是最重要的物质之一,VEGF是一种由肿瘤细胞分泌并特异性作用于血管内皮细胞的一种血管生长因子,对血管形成有较强诱导性1。 VEGF是众多血管生成因子中针对内皮细胞特异性最高，促血管生成作用最强的有丝分裂素，起着中心调控作用，它直接参与诱导肿瘤的血管生成2,3，是肿瘤生长和转移的基础，近年来受到越来越多的重视。VEGF最早由Senger等在肿瘤细胞分泌物中发现。VEGF使血管通透性增加，可引起肿瘤血管中的蛋白质外渗，有助于肿瘤生长、转移，当VEGF被抑制时，肿瘤新生血管及肿瘤生长将受到抑制。血清中的VEGF可能是肿瘤细胞、血小板、白细胞共同分泌的结果，病例选择中应用剔除标准可一定程度上地减少肿瘤以外因素对测定结果的影响。本实验结果显示：肺癌患者血清VEGF含量及阳性表达较正常对照组显著增高（P0.001），这可能是由于肿瘤细胞分泌的VEGF随穿过血管壁的血液细胞进入血液循环;或是由于VEGF使血管壁通透性增加,从而弥散到血液中。据报道,VEGF和肿瘤血管计数可作为肺癌的独立预后因素4,通过比较不同临床病理特征的肺癌患者血清VEGF的含量。发现不同肿瘤大小及不同分化程度VEGF含量无显著性差异,但血清VEGF含量与淋巴结转移及肿瘤临床分期密切相关,提示VEGF在肺癌淋巴结转移及临床分期进展过程中起重要作用。Ellis5等认为,肿瘤细胞要完成淋巴结转移必须经历以下几个过程。肿瘤细胞进入淋巴结;肿瘤细胞从基质脱落时细胞凋亡得到抑制;肿瘤细胞逃避免疫监视;转移灶中血管形成。由此可见,肿瘤细胞的淋巴结转移受到多个环节的影响,并可能与VEGF家族的其他成员VEGF-B，VEGF-D，VEGF-C及其他血管生长因子的调节有关6。文献报道VEGF表达与肺癌淋巴结转移呈正相关7。本研究发现血清VEGF含量在已有淋巴结转移组中含量升高,提示VEGF可通过血循环而影响癌细胞的淋巴结转移。我们推测,VEGF在促进肺癌血管生成,促使血管增加的同时出现大量结构和功能异常的肿瘤血管,由于这类新生血管管壁不完整,缺乏基膜,而VEGF是已知最强的血管渗透剂,能增加微血管(特别是毛细血管后静脉和小静脉)的渗透性,加之瘤区缺乏有效的淋巴循环,导致瘤内及瘤周间质水肿,使组织间隙变宽和开放,大量组织间液在回流过程中引导瘤细胞向毛细淋巴管方向运动,最后随组织液进入毛细淋巴管,故最终导致淋巴系统转移。Fontanini等8采用RT-PCR及原位杂交方法研究VEGF121mRNA，VEGF165mRNA及VEGF189mRNA在非小细胞肺癌的表达情况时发现,在3种VEGF亚型中仅有VEGF121mRNA表达与肺门及纵隔淋巴结转移密切相关。VEGF121是VEGF最主要的可溶形式9,因此我们认为血清VEGF含量可以预测肺癌淋巴结的转移情况。此外本研究还发现随着肺癌临床分期的进展,血清VEGF含量也随之增高,提示血清VEGF含量可作为评价肺癌临床分期进展的一种有价值的指标。目前国内外学者纷纷研究证实VEGF是食管癌转移的重要调节因子之一。研究发现,VEGF水平与食管癌微血管密度、外浸程度、转移及预后等密切相关10，11。Kitadai等检测了119例食管癌中VEGF的表达,结果VEGF表达率为59.7%,且VEGF的表达与肿瘤浸润深度、肿瘤分期和淋巴结转移密切相关。本研究得到了类似的结论。食管癌患者血清VEGF含量及阳性表达较正常对照组显著增高（P0.001），且血清VEGF含量在肿瘤长度3cm组、III+IV期组、已有淋巴结转移组中含量升高（P0.05），说明VEGF在食管癌中有过量的表达，并通过对微血管的生成促进作用影响食管癌肿瘤的生长。因此，VEGF一方面促进了肿瘤的血管新生，另一方面也间接促进了肿瘤淋巴系统的增生。丰富的微血管系统和淋巴管网使肿瘤具有高度的增殖活性和侵袭性。肿瘤越大，表面积越大，其侵及附近微血管或淋巴管的可能性相对也越大。癌细胞可以直接侵入邻近的微血管或淋巴管或通过静脉一淋巴管交通支形成血路或淋巴路转移。VEGF还可以诱导纤维蛋白溶解酶原激活剂及其在内皮细胞上的受体，进而通过纤维蛋白溶解酶系统以及金属蛋白酶降解肿瘤边缘的基质，扩大原发肿瘤的侵袭性，增加淋巴结转移的可能性12。因此，在食管癌临床病理分期中，随着浸润深度的增加和淋巴结转移的出现，VEGF呈升高趋势，检测食管癌患者血清VEGF水平方法不仅在食管癌诊断中有一定的意义，而且简单易行，尚可较早地反映其发生进展情况，有利于对治疗措施的选择和预后的判断。 研究证明VEGF与肿瘤的关系，为合理应用抗VEGF 药物打造了肿瘤治疗的一个崭新平台。抗VEGF治疗是肺癌治疗的一个崭新领域,它具有特异性强、不易产生耐药性、不受肿瘤细胞周期限制等优点, VEGF因其在肿瘤血管生成中的重要作用,而成为抗肿瘤血管生成的重要靶点,具有良好的应用前景。但是,抗肿瘤血管生成只能抑制肿瘤细胞的生长和转移,并不能完全消灭肿瘤细胞,一旦停药肿瘤细胞又可恢复增殖,而且抗血管生成治疗的靶向性问题、药效监测问题、与细胞毒药物联合使用的问题及最佳用药时机等问题尚有待进一步评价。相信随着对肺癌与的深入研究及其相关学科的发展,这些问题将会得到解决,血管靶向治疗将会成为治疗肺癌最有前途的策略之一。参考文献：1. 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