当归补血汤对防治不同血虚证的作用.doc

当归补血汤对防治不同血虚证的作用张三、李四、王五（大学，班）摘要 目的：通过实验了解血虚证的造模方法和当归补血汤的组方和作用。并掌握氰化高铁血红蛋白测定法及溶血素（抗体）测定实验。方法：在当归补血汤对环磷酰胺致小鼠血虚的防治作用的实验中，采用溶血素测定实验测抗体含量、氰化高铁血红蛋白测定法测血红蛋白含量。在当归补血汤对放血法致小鼠血虚的防治作用的实验中，采血检测血红蛋白含量并进行溶血素（抗体）测定实验。结果：两种造模方法的对照组小鼠出现行动迟缓，嗜睡，困缩弓腰，耳尾苍白而凉，毛蓬竖而少光泽的症状；而正常组和用药组均无此症状。两种造模方法的对照组的小鼠的血红蛋白和溶血素（抗体含量都比正常组低，经用当归补血汤治疗后含量都升高。结论：当归补血汤的确具有升高血红蛋白、增强免疫的作用，从中医来讲具有补益气血的功能。关键词 当归补血汤；血虚证；测定；血红蛋白 当归补血汤为临床常用补血汤之一。本法现代主要用于贫血、白细胞减少证、对抗化疗副作用等。据中医理论认为，有形之血生于无形之气，重用黄芪大补脾肺之气，以资气血生化之源，当归养血和营，如此则阳生阴长，气旺血生，是当归补血汤的配伍特色。本文就当归补血汤对不同血虚证的作用进行研究。1 实验材料1.1药物 当归补血汤煎剂（黄芪：当归=5:1，每毫升含生药1g）、生理盐水、阿氏液、血红蛋白转化液、环磷酰胺、蒸馏水、补体（豚鼠血清）、鸡红细胞悬液、标准血红蛋白1.2主要工具 2ml注射器、天平、吸管、吸球、移液器、血红蛋白吸管、洁净纱布、试管、灌胃针头1.3主要仪器 离心机、恒温箱、分光光度计1.4动物 雄性小鼠30只，体重1822g；豚鼠，雌雄皆可。2 方法与结果2.1 当归补血汤对环磷酰胺致小鼠血虚的防治作用2.1.1 将小鼠随机分成三组：正常组、对照组、用药组，每组10只，均喂以普通饲料，自由饮水。2.1.2 对照组、用药组动物腹腔注射以环磷酰胺1mg/10g,1次；正常组腹腔注射以生理盐水1mg/10mg,1次。用药组用当归补血汤煎剂，每天0.5ml/20mg灌胃，1天；正常组、对照组用生理盐水每天0.5/20mg灌胃，1次1次，共5天。2.1.3 采血检测血红蛋白含量，并进行溶血素（抗体）测定实验。溶血素（抗体）测定实验步骤：在试管中加入1ml生理盐水，取小鼠全血20l,加5%鸡血红细胞悬液0.5ml、补体0.5ml。将试管（上盖塑料薄膜）置入37水浴箱30分钟，离心2500rpm)15分钟，取上清液倒入比色杯中。以空白管调“0”，测定吸光度。结果表明，对照组小鼠的抗体含量比正常组低，经用当归补血汤之后，小鼠的抗体含量都比正常对照组有所增加，故当归补血汤的确具有增强免疫的作用。2.1.4 用氰化高铁血红蛋白测定法测定血红蛋白（单位g/L)：取血20l，加到0.5ml血红蛋白转化液中，混匀，静置5分钟。用分光光度计比色，波长540nm,光径10.0nm，以空白转化液调零，测定吸光度“A”。用定值为50g/L、100g/L、150g/L、200g/L的HiCN参考液，在分光光度计上测定吸光度“A”，在标准计算纸上绘制HiCN标准曲线，用所测吸光度“A”在坐标纸上查出相应的蛋白含量。由结果可得，对照组小鼠的血红蛋白含量比正常组低，经用当归补血汤之后，小鼠的血红蛋白含量都比正常对照组有所增加，说明当归补血汤的确具有升高血红蛋白的作用。2.2 当归补血汤对放血法致小鼠血虚的防治作用。2.2.1 将小鼠随机分成三组：正常组、对照组、用药组，每组10只，均在天平上称重，喂以普通饲料，自由饮水。对照组和用药组皆以摘眼球法放血0.5ml；正常组不做任何处理。2.2.2 放血后，用药组用当归补血汤煎剂，每天0.5ml/20mg灌胃，1天；正常组、对照组用生理盐水每天0.5/20mg灌胃，1次1次，共5天。2.2.3 采血检测血红蛋白含量，并进行溶血素（抗体）测定实验。步骤同上。有结果可得，对照组小鼠的抗体含量比正常对照组低，经用当归补血汤之后，小鼠的抗体含量都比正常对照组有所增加，故当归补血汤的确具有增强免疫的作用。2.2.4 用氰化高铁血红蛋白测定法测定血红蛋白（单位g/L),步骤同上。由结果可得，对照组小鼠的血红蛋白含量比正常组低，经用当归补血汤之后，小鼠的血红蛋白含量都比正常对照组有所增加，说明当归补血汤的确具有升高血红蛋白的作用。2.2.5 将小鼠处死，取出脾脏，称重，算出脾指数。由结果可得，对照组小鼠的脾指数比正常组低，经用当归补血汤之后，小鼠的脾指数都比正常对照组有所增加，说明当归补血汤的确具有补血的作用。3 统计 表1 组别 n血红蛋白(g/l)抗体(OD)值脾指数(mg/g)化学法 放血法化学法 放血法化学法 放血法正常组6 117.25 117.250.04 0.044.8 4.8模型组6 115.88 116.380.04 0.033.6 4.3中药组6 192.75 1290.1 0.085.6 5.2表2 组别 n用药前体重(g)用药后体重(g)体重差(g)化学法 放血法化学法 放血法化学法 放血法正常组6 22.9 22.923.1 23.1 0.6 0.2 模型组6 21.83 21.8822.21 21.56 0.38 -0.32 中药组6 21.71 22.4522.11 23.03 0.4 0.58 4 分析与讨论本实验从观察小鼠的抗体和血红蛋白增加从而从药理学方面证实了当归补血汤在补气血和增强免疫方面的作用。中医学认为：气血是构成机体和维持生命活动的必需物质，气血与机体健康、疾病和生命的关系极为密切。血液中的红细胞具有输氧、免疫等功能，这与中医学“血载气，具有一定的共性含义。氧是生命活动中的重要因素，人体生命活动的能量绝大部分由有氧代谢提供，而氧在人体不能储存，所以红细胞的输氧功能对人体生命活动具有重要的意义。缺氧又是许多疾病的重要诱因，疾病的改善也需通过调理氧代谢。已有研究证明当归补血汤有改善红细胞膜流动性、变形性的作用，说明当归补血汤除了增加血的物质基础外还可通过改善红细胞功能来达到补气生血的双重作用。当归补血汤能显著升高通过放血和环磷酰胺并用所致血虚小鼠血清IL-6、EPO水平，既反映了其补血作用的机制之一，同时也说明了其在补血的同时也有促进免疫的作用，即中医所谓的补气作用，这也正与本方的气血双补相吻合。当归补血汤能刺激骨髓造血祖细胞，从而有可能增强粒系、单核巨噬细胞的生长，成熟与释放，而达到生血补血作用。骨髓红系造血干细胞的正常分裂、分化和成熟受多种细胞因子调控，其中EPO发挥关键性作用。EPO主要是由肾内皮细胞和上皮细胞分泌的一种具有生物学效能的糖蛋白，能特异性刺激红系造血细胞的生长、分化和增殖。血清EPO主要夹源于肾脏。研究已发现当归补血汤能提升鼠血清EPO水平，提示其对红系细胞的作用机理与促进EPO分泌有关。EPO的空间构型与生长激素相似，具有存活因子、分裂原和分化原三重生物活性。当归补血汤通过促进EPO分泌，进而通过EPO的生物学效能，刺激红系细胞的产生、成熟和释放，补充破坏和死亡的红细胞，维持血细胞的相对稳定，发挥补血作用。淋巴细胞对红系细胞造血功能亦有重要调控作用。T淋巴细胞能分泌BPA样刺激因子和红细胞生成素样活性因子，促进BFU-E和CFU-E的生长。当归补血汤能显著促进小鼠SCM中EPO样造血生长因子生成，提示其补血作用机理亦与促进T淋巴细胞分泌EPO样造血生长因子数量或增强EPO样造血生长因子活性有关。当归补血汤在免疫方面的作用主要有在非特异性免疫、体液与细胞免疫、抗真菌的免疫调节作用、抗肿瘤的免疫作用。当归补血汤有显著促进血虚小鼠脾淋巴细胞产生IL2的作用进而改善小鼠免疫功能低下状况；能提高小鼠脾脏巨噬细胞吞噬细菌；能能够抑制脾细胞凋亡,抑制淋巴细胞凋亡,致使更多的淋巴细胞参与淋巴循环,使淋巴细胞免疫活性增强,抗体依赖性细胞毒作用得以很好地发挥,进而使癌细胞在运转和转移过程中被杀灭,起到了抑制癌细胞沿淋巴道转移的作用。参考文献1 金若敏,宁炼,陈长勋,等.血虚模型动物制备及当归补血汤的作用研究.中成药,2001,4:268-271.2 陈云华,孙建宁,陈文为,等.当归补血汤对缺氧小鼠红细胞膜流动性和变形性的影响.中药药理与临床,1999,3:8-10.3 王燕平,李晓玉,宋纯清,等.当归补血汤中不同组分对正常及血虚小鼠免疫功能的影响.中草药,2002,2:135-138.4 张英华,武桂兰,姜廷良.当归补血汤及其服药后血清对小鼠造血祖细胞的影响.中国实验方剂学杂志,1999,6:30-32.5 张英华,武桂兰,姜廷良.当归补血汤及其含药血清对小鼠红系造血祖细胞克隆的影响.中国实验方剂学杂志,1999,4:33-36.6 吴岩,祝彼得,黄秀深,等.“当归补血汤”对人脐静脉内皮细胞的增殖及分泌IL-6和GM+CSF的影响.成都中医药大学学报,2000,4:20-22.7 陈玉春,高依卿,王碧英.加味当归补血汤影响红细胞生成素产生的实验研究.中国医药学报,2002,5:308-310.8 宁炼,陈长勋,金若敏,等.当归补血汤促进造血功能的成分及其作用的研究.中国中药杂志