13个药学部分兽药研究技术指导原则.doc

兽药研究技术指导原则兽用中药、天然药物原料前处理技术指导原则一、 概述兽用中药、天然药物制剂的原料包括药材、中药饮片、提取物和有效成分。为保证中药、天然药物新药的安全性、有效性和质量可控性，应对原料进行必要的前处理。原料的前处理是指原料的鉴定与检验、炮制与加工。二、鉴定与检验中药材品种繁多，来源复杂，即使同一品种，由于产地、生态环境、栽培技术、加工方法等不同，其质量也有明显的差别；中药饮片、提取物、有效成分等原料也可能存在一定的质量问题。为了保证制剂质量，应对制剂的原料进行鉴定和检验。检验合格后方可投料。原料的鉴定与检验以法定标准为依据，现行的法定标准包括中华人民共和国兽药典与农业部颁发标准，同时也认可医药部门现行有效标准。无法定标准的原料，应自行制定该原料的相关质量标准，并按标准进行鉴定与检验。标准如有修订，应执行修订后的标准。多来源的药材除必须符合质量标准的要求外，一般应固定品种。对品种不同而质量差异较大的药材，必须固定品种，并提供品种选用的依据。当药材质量随产地不同而有较大变化时，应固定产地。当药材质量随采收期不同而有明显变化时，应注意采收期。原料质量标准若过于简单，难以满足新药研究的要求时，应自行完善标准。如药材标准未收载制剂中所测成分的含量测定项时，应建立含量测定方法，并制定含量限度，但要注意所定限度应尽量符合原料的实际情况。完善后的标准可作为企业的内控标准。对于毒性较大的药材应提供自检报告；涉及濒危物种的药材应符合国家的有关规定，并特别注意来源的合法性。提取物和有效成分应特别注意有机溶剂残留的检查。三、药材的炮制与加工炮制和制剂的关系密切，大部分药材需经过炮制才能用于制剂的生产。在完成药材的鉴定与检验之后，应根据处方对药材的要求以及药材质地、特性的不同和提取方法的需要，对药材进行必要的炮制与加工，即净制、切制、炮炙、粉碎等。（一）净制即净选加工，是药材的初步加工过程。药材中有时会含有泥沙、灰屑、非药用部位等杂质，甚至会混有霉烂品、虫蛀品，必须通过净制除去，以符合药用要求。净制后的药材称为“净药材”。常用的方法有挑选、风选、水选、筛选、剪、切、刮、削、剔除、刷、擦、碾、撞、抽、压榨等。（二） 切制是指将净药材切成适于生产的片、段、块等，其类型和规格应综合考虑药材质地、炮炙加工方法、制剂提取工艺等。除少数药材鲜切、干切外，一般需经过软化处理，使药材利于切制。软化时，需控制时间、吸水量、温度等影响因素，以避免有效成分损失或破坏。（三）炮炙是指将净制、切制后的药材进行火制、水制或水火共制等。常用的方法有炒、炙、煨、煅、蒸、煮、烫、炖、制、水飞等。炮炙方法应符合国家标准或医药部门制定的炮制规范。如炮炙方法不为上述标准或规范所收载，应自行制定炮炙方法和炮炙品的规格标准，提供相应的研究资料。制定的炮炙方法应具有科学性和可行性。（四） 粉碎是指将药材加工成一定粒度的粉粒，其粒度的大小应根据制剂生产需求确定。对质地坚硬、不易切制的药材，一般应粉碎后提取；一些贵重药材常粉碎成细粉直接入药，以避免损失；另有一些药材常粉碎成细粉后参与制剂成型，兼具赋型剂的作用。经粉碎的药材应说明粉碎粒度及依据，并注意出粉率。含挥发性成分的药材应注意粉碎温度；含糖或胶质较高且柔软的药材应注意粉碎方法；毒性药材应单独粉碎。兽用中药、天然药物提取纯化工艺研究技术指导原则一、概述兽用中药、天然药物提取纯化工艺研究是指根据临床用药和制剂要求，用适宜的溶剂和方法从净药材中富集有效成分、除去杂质的过程。中药、天然药物的成分复杂，为提高疗效、减小剂量、便于制剂，一般需要对药材进行提取、纯化处理。这是中药、天然药物制剂特有的工艺步骤，提取、纯化工艺的合理、技术的正确运用直接关系到药材的充分利用和制剂疗效的充分发挥。在提取、纯化及后续的制剂过程中，浓缩、干燥也是必要的工艺环节，亦在本指导原则的涉及范畴之列。中药、天然药物的提取、纯化、浓缩、干燥等工艺的设计研究，既要遵循药品研究的一般规律，注重对其个性特征的研究，又要根据用药理论与经验，认真分析处方组成与复方中各药味的相互关系，参考各药味所含成分的理化性质和药理作用，结合制剂工艺和大生产的实际以及对环境保护的要求，综合各方面的因素后提出合理的试验设计和评价指标，确定工艺路线，优选工艺条件。本指导原则为此提供技术指导。二、工艺路线中药、天然药物提取纯化工艺路线是中药、天然药物生产工艺科学性、合理性和可行性的基础和核心。工艺路线的设计应以保证其安全性和有效性为前提，一般应考虑处方的特点和药材的性质，制剂的类型与临床用药要求，大生产的可行性与生产成本，以及环境保护的要求。在此基础上，还要充分注意工艺的科学性与先进性。（一）提取与纯化工艺中药、天然药物的提取应尽可能多地提取出有效成分，或根据某一成分或某类成分的性质提取目的物。提取溶剂选择应尽量避免使用一、二类有机溶剂（有机溶剂分类目录见兽用化学药物有机溶剂残留量研究技术指导原则）。中药、天然药物的纯化应依据中药传统用药经验或根据提取物中已确认的一些有效成分的存在状态、极性、溶解性等特性设计科学、合理、稳定、可行的工艺，采用一系列纯化技术尽可能多地富集有效成分，除去无效成分。不同的提取纯化方法均有其特点与使用范围，应根据与治疗作用相关的有效成分（或有效部位）的理化性质，或药效研究结果，或通过试验对比，选择适宜的工艺路线与方法。（二）浓缩与干燥工艺浓缩、干燥工艺应主要依据物料的理化性质、制剂的要求，影响浓缩、干燥效果的因素，选择相应工艺路线，使所得物达到要求的相对密度或含水量，以便于制剂成型。对含有热不稳定成分、易融化物料的浓缩与干燥，尤其需要注意方法的选择，以保障浓缩物或干燥物的质量。三、工艺条件工艺路线初步确定后，对采用的工艺方法，应进行科学、合理的试验设计，对工艺条件进行优化。影响工艺的因素通常是多方面的，因此，工艺的优选应采用准确、简便、具有代表性、可量化的综合性评价指标与合理的方法，对多因素、多水平同时进行考察。鼓励新技术新方法的应用，但对于新建立的方法，应进行方法的可靠性、安全性研究。应根据具体品种的情况选择适宜的工艺及设备。为了保证工艺的稳定、减少批间质量差异，应固定工艺流程及相应设备。（一）提取与纯化工艺条件的优化采用的提取方法不同，影响提取效果的因素有别，因此应根据所采用的提取方法与设备，考虑影响因素的选择和提取参数的确定。一般需对溶媒、温度、处理次数、处理时间等工艺条件进行选择、优化。中药、天然药物的纯化工艺，应根据纯化的目的、采用方法的原理和影响因素进行选择。一般应考虑：拟制成的剂型与服用量、有效成分与去除成分的性质、后续制剂成型工艺的需要、生产的可行性、环保问题等。还应通过有针对性的试验，考察各步骤有关指标的情况，以评价各步骤工艺的合理性，选择可行的工艺条件，确定适宜的工艺参数，从而确保生产工艺和药品质量的稳定。（二） 浓缩与干燥工艺条件的优化浓缩与干燥的方法和程度、设备和工艺参数等因素都直接影响着物料中成分的稳定。在物料浓缩与干燥工艺过程中应结合制剂的要求对工艺条件进行研究和优化。四、评价指标工艺研究过程中，对试验结果作出合理的判断的评价指标应该是科学、客观、可量化的。在具体评价指标的选择上，应结合中药、天然药物的特点，从化学成分、生物学指标以及环保、工艺成本等多方面综合考虑。（一）提取与纯化工艺评价指标有效成分提取、纯化的评价指标主要是得率、纯度。有效部位提取、纯化的评价指标除得率、含量等外，还应关注有效部位主要成分组成基本稳定。单方或复方提取、纯化的评价指标应考虑其多成分作用的特点，既要重视传统用药经验、组方理论，充分考虑药物作用的物质基础不清楚的现状；又要尽力改善制剂状况，以满足临床用药要求。在评价指标的选择上，应结合品种的具体情况，探讨能够对其安全、有效、质量可控作出合理判断的综合评价指标，必要时可采用生物学指标等。（二）浓缩与干燥工艺评价指标应根据具体品种的情况，结合工艺、设备等特点，选择相应的评价指标。对含有挥发性、热敏性有效成分的药物在浓缩、干燥时还应考察挥发性、热敏性成分的保留情况。五、实验设计方法工艺研究过程中，工艺条件的筛选和确定，可采用的具体实验方法有多种，如单因素实验设计法、多因素实验设计法等，多因素实验设计法又包括了正交设计法、均匀设计法、球面对称设计法等等。在工艺优化过程中尽可能地引入数理试验设计的思想和方法，积极采用先进科学合理的设计方法以及数据的统计分析方法等。对于主要影响因素、水平取值，一般应注意结合被研究对象特点，根据预试验结果设计。具体的选择应根据研究的情况，需要考察的因素等来确定。但应考虑方法适用的范围，因素、水平设置的合理性，避免方法上的错误。例如，因素、水平选择不当，样本量不符合要求，指标选择不合理，评价方法不妥，适用对象不符等。同时应注意对试验结果的处理、分析。由于工艺的多元性、复杂性以及研究中的实验误差，工艺优化的结果应通过重复和放大试验加以验证。兽用中药、天然药物制剂研究技术指导原则一、概述兽用中药、天然药物制剂研究是指将原料通过制剂技术制成适宜剂型的过程，应根据临床用药需求、处方组成及剂型特点，结合提取、纯化等工艺，以达到“高效、速效、长效”， “剂量小、毒性小、副作用小” 和“生产、运输、贮藏、携带、使用方便”的要求。本指导原则主要阐述中药、天然药物剂型选择的依据、制剂处方设计、制剂成型工艺研究、直接接触药品的包装材料的选择的基本内容，并对以上研究提供技术指导。由于中药、天然药物成分复杂、作用多样，剂型种类、成型工艺方法与技术繁多，加之现代制剂技术迅速发展，新方法与技术不断涌现，不同的方法与技术所应考虑的重点，需进行研究的难点，要确定的技术参数，均有可能不同。因此，应根据药物的具体情况，借鉴传统组方、用药理论与经验，结合生产实际进行必要的研究，以明确具体工艺参数，做到工艺合理、可行、稳定、可控，以保证药品的安全、有效，及其质量稳定。在中药、天然药物制剂的研究中，鼓励采用新技术、新工艺、新辅料。二、剂型选择（一） 选择依据药物必须制成适宜的剂型，采用一定的给药途径接触或导入机体才能发挥疗效。剂型的不同可能导致药物的作用效果的不同，从而关系到药物的临床疗效及不良反应。剂型选择应根据药味组成并借鉴用药经验，以满足临床需要为宗旨，在对药物理化性质、生物学特性、剂型特点等方面综合分析的基础上进行。应提供具有说服力的文献依据和（或）试验资料，充分阐述剂型选择的科学性、合理性、必要性。剂型的选择应主要考虑以下几个方面：1.临床需要及用药对象应考虑不同剂型可能适应于不同的临床病症需要，以及用药对象的顺应性以及生理情况，如年龄、性别、体重等。2.药物性质及处方剂量中药有效成分复杂，各成分溶解性、化学稳定性、在体内的吸收、分布、代谢、排泄过程也各不相同，应根据药物的性质选择适宜的剂型。由于中药处方量、半成品量及性质、临床服用剂量不同，不同剂型的载药量不同，所选择的剂型也应不同。3.药物的安全性在选择剂型时需充分考虑其安全性，应在比较剂型因素产生疗效增益的同时，关注可能产生的安全隐患（包括毒性和副作用）。（二）需要注意的问题1.重视药物制剂处方设计前研究工作。在认识药物的基本性质、剂型特点以及制剂要求的基础上进行相关研究。2.在剂型选择和设计中注意借鉴相关学科的新理论、新方法和新技术，鼓励新剂型的开发。3.在选择注射剂剂型时，应特别关注其安全性、有效性、质量可控性以及临床需要，并提供充分的选择数据。4.已有国家标准兽药的剂型改变，应在对原剂型的应用进行全面、综合评价的基础上有针对性地进行，充分阐述剂型改变的必要性和所选剂型的合理性。三、制剂处方研究制剂处方研究是根据制剂原料性质、剂型特点、临床用药要求等，筛选适宜的辅料，确定制剂处方的过程。制剂处方研究是制剂研究的重要内容。（一）制剂处方前研究制剂处方前研究是制剂成型研究的基础，其目的是保证药物的稳定、有效，并使制剂处方和制剂工艺适应工业化生产的要求。一般在制剂处方确定之前，应针对不同药物剂型的特点及其制剂要求，进行制剂处方前研究。制剂原料的性质对制剂工艺、辅料、设备的选择有较大的影响，在很大程度上决定了制剂成型的难易。在中药、天然药物制剂处方前研究中，应了解制剂原料的性质，并提供文献或试验研究资料。例如，用于制备固体制剂的原料，应主要了解其溶解性、吸湿性、流动性、稳定性、可压性、堆密度等内容；用于制备口服液体制剂的原料，应主要了解其溶解性、酸碱性、稳定性以及嗅、味等内容。以有效成分或有效部位为制剂原料的，应加强其与辅料的相互作用的研究，必要时还应了解其生物学性质。（二）辅料的选择辅料除具有赋予制剂成型的作用外，还可能改变药物的理化性质，调控药物在体内的释放过程，影响甚至改变药物的临床疗效、安全性和稳定性等。新辅料的应用，为改进和提高制剂质量，研究和开发新剂型、新制剂提供了基础。在制剂成型工艺的研究中，应重视辅料的选择和新辅料的应用。所用辅料应符合药用要求。辅料选择一般应考虑以下原则：满足制剂成型、稳定的要求，不与药物发生不良相互作用，避免影响兽药的检测。为了减少服用量，提高靶动物顺应性，须注意辅料的用量，制剂处方应能在尽可能少的辅料用量下获得良好的制剂成型性。（三）制剂处方筛选研究制剂处方筛选研究，可根据药物、辅料的性质，结合剂型特点，采用科学、合理的评价指标进行。制剂处方筛选研究应考虑以下因素：临床用药的要求、制剂原辅料性质、剂型特点等。通过处方筛选研究，初步确定制剂处方组成，明确所用辅料的种类、型号、规格、用量等。在制剂处方筛选研究过程中，为减少研究中的盲目性，提高工作效率，获得理想的效果，可在预实验的基础上，应用各种数理方法安排试验。如采用单因素比较法，正交设计、均匀设计或其他适宜的方法。四、制剂成型工艺研究制剂成型工艺研究是按照制剂处方研究的内容，将经制剂原料与辅料进行加工处理，采用客观、合理的评价指标进行筛选，确定适宜的辅料、工艺和设备，制成一定的剂型并形成最终产品的过程。通过剂型成型研究进一步改进和完善处方设计，最终确定制剂处方、制剂技术和设备。（一）制剂成型工艺研究的原则制剂成型工艺研究一般应考虑成型工艺路线和制备技术的选择，应注意实验室条件与中试和生产的衔接，考虑大生产制剂设备的可行性、适应性。对单元操作或关键工艺应进行考察，以保证质量的稳定。应提供详细的制剂成型工艺流程与各工序技术条件试验依据等资料。在制剂过程中，对于含有有毒药物以及用量小而活性强的药物，应特别注意其均匀性。（二）制剂成型工艺研究评价指标的选择制剂工艺研究评价指标的选择，是确保制剂成型研究达到预期目的的重要内容。制剂处方设计、辅料筛选、成型技术、制剂设备等的优选应根据不同药物及其剂型的具体情况，选择评价指标，以进行制剂性能与稳定性评价。评价指标应是客观的、可量化的。量化的评价指标对处方设计、筛选、制剂生产具有重要意义。例如，颗粒的流动性、与辅料混合后的物性变化、物料的可压性、吸湿性等可作为片剂成型工艺的考察指标的主要内容。对于口服固体制剂，有时还需进行溶出度的考察。（三）制剂技术与制剂设备制剂处方筛选、制剂成型均需在一定的制剂技术和设备条件下才能实现。在制剂研究过程中，特定的制剂技术和设备往往可能对成型工艺，以及所使用辅料的种类、用量产生很大影响，应正确选用。固定所用设备及其工艺参数，以减少批间质量差异，以保证兽药的安全、有效与质量稳定。先进的制剂技术以及相应的制剂设备，是提高制剂水平和产品质量的重要方面，也应予以关注。五、直接接触药品的包装材料的选择在选择直接接触药品的包装材料时应对同类药品及其包装材料进行相应的文献调研，证明选择的可行性。并结合药品稳定性研究进行相应的考察。应符合药品包装材料、容器管理办法（暂行）及相关要求，提供相应的注册证明和质量标准。在某些特殊情况或文献资料不充分的情况下，应加强药品与直接接触药品的包装材料的相容性考察。采用新的包装材料，或特定剂型，在包装材料的选择研究中除应进行稳定性实验需要进行的项目外，还应增加相应的特殊考察项目。兽用中药、天然药物中试研究技术指导原则一、概述兽用中药、天然药物的中试研究是指在实验室完成系列工艺研究后，采用与生产基本相符的条件进行工艺放大研究的过程。中试研究是对实验室工艺合理性的验证与完善，是保证工艺达到生产稳定性、可操作性的必经环节，是药物研究工作的重要内容之一，直接关系到药品的安全、有效和质量可控。本指导原则为中试研究规模、批次、样品质量、中试场地、设备等相关内容提供技术指导。二、中试研究的作用为保证质量标准的制订、稳定性考察、药理毒理和临床研究结果的可靠，所用样品都应经中试研究确定的工艺制备而成。通过中试研究，可发现工艺可行性、劳动保护、环保、生产成本等方面存在的问题，以降低药品研发的风险。三、中试研究的有关问题中试研究设备应该与生产设备的技术参数基本相符。中试样品如用于临床研究，应当在符合兽药生产质量管理规范条件的车间制备。由于药品剂型不同，所用生产工艺、设备、生产车间条件以至辅料、包装等都有很大差异，因此在中试研究中要结合剂型，特别要考虑如何适应生产的特点开展工作，注意以下问题。（一）规模与批次投料量、半成品率、成品率是衡量中试研究可行性、稳定性的重要指标。一般情况下，中试研究的投料量为制剂处方量(以制成1000个制剂单位计算)的10倍以上。装量大于或等于100ml的液体制剂应适当扩大中试规模。以有效成分、有效部位为原料或以全生药粉入药的制剂，可适当降低中试研究投料量，但均要达到中试研究的目的。半成品率、成品率应相对稳定。中试研究一般需经过多批次试验，以达到工艺稳定的目的。申报临床研究时，应提供至少1批稳定的中试研究数据，包括批号、投料量、半成品量、辅料量、成品量、成品率等。（二）质量控制中试研究过程中应考察各关键工序的工艺参数及相关的检测数据，注意建立中间体的内控质量标准。与样品含量测定相关的药材，应提供所用药材及中试样品含测成分含量数据，并计算转移率。兽用中药、天然药物稳定性试验技术指导原则一、概述稳定性试验是考察药物在温度、湿度、光线、微生物的影响下随时间变化的规律，目的是为中药、天然药物制剂的生产、包装、贮存、运输条件以及最终药品有效期的确定提供科学依据。稳定性试验包括加速试验与长期试验。加速试验与长期试验要求用三批供试品进行。中药制剂的供试品应是放大试验的产品，其处方与工艺应与大生产一致。每批放大试验应达到一定的规模，如片剂10000片以上，大体积包装的制剂（如静脉输液、口服液等）每批放大规模的数量至少应为各项试验所需总量的10倍。特殊品种、特殊剂型所需数量，根据情况，灵活掌握。供试品的质量标准应与各项基础研究及临床验证所使用的供试品质量标准一致。加速试验与长期试验所用供试品的容器和包装材料及包装方式应与上市产品一致。研究中药、天然药物的稳定性，要采用专属性强、准确、精密、灵敏的分析方法并对方法进行验证，以保证稳定性试验结果的可靠性。由于放大试验比大规模生产的数量要小，故申报者应在获得批准后，从放大试验转入大规模生产时，对最初通过生产验证的三批大规模生产的产品仍需进行加速试验与长期稳定性试验。二、加速试验 此项试验是在超常的条件下进行，其目的是通过加速中药、天然药物的化学或物理变化，探讨其稳定性，为中药、天然药物制剂的审评、工艺改进、包装、运输及贮存提供必要的资料。供试品要求3批，按市售包装，在温度402，相对湿度75%5%的条件下放置6个月。所用设备应能控制温度2，相对湿度5%，并能对真实温度与湿度进行监测。在试验期间第1个月、2个月、3个月、6个月末各取样一次，按稳定性重点考察项目检测。在上述条件下，如6个月内供试品经检测不符合制订的质量标准，则应在中间条件下即温度302，相对湿度60%5%的情况下进行加速试验，时间仍为6个月。合剂、流浸膏剂、注射液等含水性介质的制剂可不要求相对湿度。加速试验，建议采用隔水式电热恒温培养箱（2060）。箱内放置具有一定相对湿度饱和盐溶液的干燥器，设备应能控制所需的温度，且设备内各部分温度应该均匀，并适合长期使用。也可采用恒湿恒温箱或其他适宜设备。 对温度特别敏感的中药、天然药物制剂，预计只能在冰箱（48）内保存使用，此类中药制剂的加速试验，可在温度252，相对湿度60%10%的条件下进行，时间为6个月。 合剂、酊剂、浸膏剂及流浸膏剂宜直接采用温度302，相对湿度60%5%的条件进行试验，其他要求与上述相同。对于包装在半透性容器的中药制剂，如塑料袋、塑料瓶装溶液，则应在相对湿度20%2%的条件（可用CH3COOH1.5H2O饱和溶液，25，相对湿度22.5%）进行试验。三、长期试验 长期试验是在接近中药、天然药物的实际贮存条件下进行，其目的是为制订中药、天然药物的有效期提供依据。供试品三批，市售包装，在温度252，相对湿度60%10%的条件下放置12个月。每3个月取样一次，分别于0个月、3个月、6个月、9个月、12个月，按稳定性重点考察项目进行检测。12个月以后，仍需继续考察，分别于18个月、24个月、36个月取样进行检测。将结果与0月比较以确定药品的有效期。由于实测数据的分散性，一般应按95%可信限进行统计分析，得出合理的有效期。如三批统计分析结果差别较小，则取其平均值为有效期限；若差别较大，则取其最短的为有效期。数据表明很稳定的药品，可不作统计分析。 对温度特别敏感的中药、天然药物制剂，长期试验可在温度62的条件下放置12个月，按上述时间要求进行检测，12个月以后，仍需按规定继续考察，制订在低温贮存条件下的有效期。 此外，有些中药、天然药物制剂还应考察使用过程中的稳定性。四、稳定性重点考察项目主要剂型见附表。表中未列入的剂型的考察项目，见兽药典附录剂型项下有关要求。附表 中药、天然药物制剂稳定性重点考察项目剂 型稳定性重点考察项目1. 药材性状、鉴别、含量、浸出物、霉变、虫蛀2.药材提取物性状、鉴别、含量、吸湿性3. 散剂性状、鉴别、含量、外观均匀度、水分、粉末细度4. 颗粒剂性状（吸潮、软化）、鉴别、含量、粒度、水分、粒度、溶化性5. 片剂性状、鉴别、含量、崩解时限6. 胶剂性状、鉴别、含量、水分、溶化性、异物、微生物限度7. 丸剂性状、鉴别、含量、溶散时限、水分8. 胶囊剂性状、鉴别、含量、溶散时限、水分9. 合剂（口服液）性状、鉴别、含量、相对密度、pH值、微生物限度10. 酊剂性状、鉴别、含量、乙醇量、微生物限度11. 流浸膏剂、浸膏剂性状、鉴别、含量、相对密度、乙醇量（流浸膏剂）、微生物限度12. 注射剂性状、鉴别、含量、澄明度、有关物质、pH值、不溶性微粒、无菌13. 灌注剂性状、鉴别、含量、pH值、无菌兽用中药、天然药物质量标准分析方法验证指导原则一、概述兽用中药、天然药物质量标准分析方法验证的目的是为了证明所采用的方法是否适合于相应检测的要求。中药、天然药物在建立质量标准、处方工艺等变更或改变原分析方法时，均需对分析方法进行验证。方法验证过程和结果均应记载在兽药标准起草说明或修订说明中。 需验证的分析项目有：鉴别试验、限量检查、含量测定以及中药、天然药物制剂中其他需控制成分（如残留物、添加剂等）的测定。另外，在中药制剂溶出度、释放度等检查中，其溶出量等检测方法也应作必要验证。验证内容有：准确度、精密度(包括重复性、中间精密度和重现性)、专属性、检测限、定量限、线性、范围、耐用性和系统适用性等。应视具体方法拟订验证的内容。附表中列出的分析项目和相应的验证内容可供参考。二、方法验证的具体内容（一）准确度 准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。准确度应在规定的范围内测试。用于定量测定的分析方法均需做准确度验证。1.测定方法的准确度可用已知纯度的对照品做加样回收测定，即于已知被测成分含量的供试品中再精密加入一定量的已知纯度的被测成分对照品，依法测定。用实测值与供试品中含被测成分量之差，除以加入对照品量计算回收率。回收率%= 式中：A为供试品所含被测成分量； B为加入对照品量； C为实测值。在加样回收试验中，应注意对照品的加入量与供试品中被测成分含有量之和必须在标准曲线线性范围之内；应注意加入对照品的时间（供试品预处理前）；对照品的加入量要适当，过小则引起较大的相对误差，过大则干扰成分相对减少，真实性差。 2.数据要求在规定范围内，取同一浓度的供试品，用6个测定结果进行评价；或设计3个不同浓度，每个浓度分别制备3份供试品溶液进行测定，用9个测定结果进行评价，一般中间浓度加入量与所取供试品含量之比控制在1:1左右。应报告供试品取样量、供试品中含有量、对照品加入量、测定结果和回收率()计算值，以及回收率()的相对标准偏差（RSD）或可信限。（二） 精密度 精密度系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。 用于定量测定的分析方法均应考察方法的精密度。精密度包括重复性、中间精密度和重现性。1.重复性 在相同操作条件下，由一个分析人员在较短的间隔时间内测定所得结果的精密度称为重复性。在规定范围内，取同一浓度的供试品，用6个测定结果进行评价；或设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液进行测定，用9个测定结果进行评价。2.中间精密度 在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度，称为中间精密度。 为考察随机变动因素对精密度的影响，应进行中间精密度试验。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备等。3.重现性在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度，称为重现性。当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。例如，建立兽药典分析方法时应通过不同实验室的复核检验得出重现性结果，复核检验的目的、过程、重现性结果均应记载在起草说明中。应注意重现性试验用的样品本身的质量均匀性和贮存运输中的环境影响因素，以免影响重现性结果。4.数据要求 均应报告标准偏差、相对标准偏差或可信限。（三）专属性1.意义与要求专属性系指在其他成分可能存在下，采用的方法能正确测定出药材、饮片、药材提取物或制剂中被测成分的特性。鉴别、限量检查、含量测定等方法均应考察其专属性。如方法不够专属，应采用其他方法予以补充。2.鉴别试验鉴别应能与可能共存的物质或结构相似化合物区分。不含被测成分的供试品，以及结构相似或组分中的有关化合物，均不得干扰测定。显微鉴别、色谱及光谱鉴别等应附相应的代表性图像或图谱。3.含量测定和限量检查 以不含被测成分的供试品(除去含待测成分药材或不含待测成分的模拟复方)试验说明方法的专属性。色谱法和其他分析方法，应附代表性图谱，并标明主成分在图中的位置，以空白对照（除去含待测成分药材或不含待测成分的模拟复方）试验说明方法的专属性。色谱法中的分离度应符合要求，必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，对色谱峰进行定性检查。（四）检测限 检测限系指供试品中被测物能被检测出的最低量。确定检测限常用的方法如下。1.直观法 用一系列已知浓度的供试品进行分析，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。可用于非仪器分析方法，也可用于仪器分析方法。2.信噪比法 仅适用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知低浓度供试品测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比为31或21时相应浓度或注入仪器的量确定检测限。3.数据要求 应附测试图谱，说明测试过程和检测限结果。（五）定量限 定量限系指供试品中被测成分能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。用于限量检查的定量测定的分析方法均应确定定量限。 常用信噪比法确定定量限。一般以信噪比为101时相应的浓度或注入仪器的量进行确定。（六）线性线性系指在设计的范围内，测试结果与供试品中被测物浓度直接呈正比关系的程度。 应在规定的范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列供试品的方法进行测定，至少制备5个浓度的供试品。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。 数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图。（七）范围 范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果及要求确定。对于有毒的、具特殊功效或药理作用的成分，其范围应大于被限定含量的区间。溶出度或释放度中的溶出量测定，范围应为限度的20。（八）耐用性 耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法用于常规检验提供依据。开始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明。典型的变动因素有：被测溶液的稳定性，样品提取次数、时间等。液相色谱法中典型的变动因素有：流动相的组成比例或pH值，不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱，柱温，流速及检测波长等。气相色谱法变动因素有：不同厂牌或批号的色谱柱、固定相，不同类型的担体，柱温，进样口和检测器温度等。薄层色谱的变动因素有：不同厂牌的薄层板，点样方式及薄层展开时温度及相对湿度的变化等。 经试验，应说明小的变动能否通过设计的系统适用性试验，以确保方法有效。（九）系统适用性试验对一些仪器分析方法，在进行方法验证时，有必要将分析设备、电子仪器与实验操作、测试样品等一起当作完整的系统进行评估。系统适用性便是对整个系统进行评估的指标。系统适用性试验参数的设置需根据被验证方法类型而定。色谱方法对分析设备、电子仪器的依赖程度较高，因此所有色谱方法均应进行该指标验证，并将系统适用性作为分析方法的组成部分。具体验证参数和方法参考中国兽药典有关规定。三、方法再验证在某些情况下，如原药提取工艺改变、制剂处方或工艺改变、分析方法改变等，均有必要对分析方法再次进行全面或部分指标的验证，以保证分析方法可靠，这一过程称为方法再验证。再验证原则：根据改变的程度进行相应的再验证。当原药提取工艺或制剂工艺发生改变时，含量测定方法的专属性就需要再进行验证，以证明含量测定方法中发生的成分变化对主成份的测定无干扰。当制剂的处方组成改变、辅料变更时，可能会影响鉴别的专属性、溶出度和含量测定的准确度，因此需要进行辅料对鉴别、对含量测定影响的方法再验证。当质量标准中某一项目分析方法发生改变时，如采用高效液相色谱法测定含量时，检测波长发生改变，则需要重新提供检测限、专属性、准确度、精密度、线性等相应的方法学研究资料，证明修订后分析方法的合理性、可行性。附表 检验项目和验证内容 项目 内容鉴别限量检查含量测定及 溶出量测定定量限度确性 重复性 中间精密度 重现性 专属性 检测限 定量限 线性 范围 耐用性 系统适用性试验? ? ? + + + ? ? ? + + + + + + ? + + + + +? ? ? + + + ? ? ? + + + + + + ? ? + + + + 已有重现性验证，不需验证中间精密度。 重现性只有在该分析方法将被法定标准采用时做。 如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充。 上表中列举了在不同类型的分析方法验证中被认为是最重要的项目，“?”表示通常不需要验证的项目，“+”表示通常需要验证的项目，如遇特殊情况，仍应根据具体分析对象和情况而定。兽用化学原料药制备和结构确证研究技术指导原则A 兽用化学原料药制备研究技术指导原则一、概述兽用化学原料药的制备是兽药研究和开发的基础，是兽药研发的起始阶段，其主要目的是为兽药研发过程中药理毒理研究、制剂研究、临床研究提供合格的原料药，为质量研究提供详细的信息，为工业化生产提供稳定、可行的生产工艺，为上市兽药的生产提供符合要求的原料药。本指导原则是一个通用的原则，适用于经化学全合成或半合成以及从动、植物中提取的兽用原料药的研制，包括新兽药、进口兽药和已有国家标准的兽药，经微生物发酵得到的兽药也可参考该指导原则的要求。因此本指导原则只是给予兽药研发者原料药制备研究中应关注的基本问题，可根据原料药研发的实际情况，采用其他更有效的方法和手段，但是必须符合兽药研发的规律，能够科学、合理地解释和处理兽药研发中的问题。二、原料药制备研究的一般过程原料药制备研发过程一般包括以下六个阶段：（一）确定目标化合物：通过文献调研、药效学筛选实验或其它有关基础研究工作，确定所需要进行研发的化合物。（二）设计合成路线：根据目标化合物的结构特性，参考国内外相关文献，综合分析，确定一条工艺简单、成本合理、收率相对较高、终产品易于纯化的合成路线。（三）制备目标化合物：通过化学反应、生物发酵或其他方法制备出质量符合要求的目标化合物，为产品进行结构确证、质量控制等药学方面的研究，以及药理毒理研究和临床研究提供合格的样品。（四）结构确证：经过物理或化学的方法，准确无误地确证目标化合物的结构（包含立体结构）（参考原料药结构确证研究的技术指导原则）。（五）工艺优化：综合考虑工艺路线的反应条件、环保情况、产品精制与纯化的可行性、原材料获得的难易程度等对生产工艺进行优化。（六）中试放大研究、工业化生产：通过对中试、工业化生产工艺路线的研究，确定稳定、可行的工艺，为兽药的制剂生产提供符合要求的原料药。三、原料药制备研究的一般内容（一）工艺的选择制备工艺选择的目的是通过对拟合成的目标化合物的文献调研，设计或选择合理的合成路线；对所选择的路线进行初步分析，对该化合物的国内外研究情况、知识产权状况有一个总体的认识；对所采用的工艺有一个初步的评价，也为兽药的评价提供可靠依据，这个阶段是原料药制备工艺研究的必然阶段。对于新的化学实体，根据其结构特征，综合考虑起始原料获得的难易程度、合成步骤的长短、收率的高低以及反应的后处理、反应条件是否符合工业生产、环保要求等因素后，确定合理的合成路线；或者根据国内外对类似结构化合物的文献报道，进行综合分析，确定适宜的合成方法。对于通过微生物发酵获得的原料药或者从动、植物中提取获得的原料药，经对原材料和工艺过程的可控性分析，综合考虑成本、环保情况等，确定一条可以确保产品质量可控、收率较高的工艺路线。对于结构已知的兽药，通过文献调研，对有关该兽药制备的研究情况有一个全面的了解；对所选择的路线从收率、成本、“三废”处理、起始原料是否易得、是否适合工业化生产等方面进行综合分析，选择相对合理的合成路线。若所选择的路线为创新路线，通过对现有的路线进行分析，与文献报道路线进行比较，说明采用该路线的理由；若使用文献报道的路线，也要对文献报道路线进行全面的比较、分析，这样有利于研发者对此路线有较深入的理解和认识。（二）起始原料、试剂的选择原则主要分为起始原料的选择，溶剂、试剂的选择，内控标准等三部分。1.起始原料的选择起始原料应质量稳定、可控，应有来源、标准和供货商的检验报告，必要时应根据合成工艺的要求建立内控标准。对由起始原料引入的杂质、异构体，必要时应进行相关的研究并提供质量控制方法，对具有手性中心的起始原料，应制订作为杂质的对映体异构体或非对映异构体的限度，同时应对该起始原料在制备过程中可能引入的杂质有一定的了解。2. 溶剂、试剂的选择一般来说应选择毒性较低的试剂；有机溶剂的选择一般避免使用一类溶剂，控制使用二类溶剂，同时应对所用试剂、溶剂的毒性进行说明，这样有利于在生产过程中进行控制，也有利于劳动保护。有机溶剂选择的详细内容请参阅化学兽药有机溶剂残留量研究的技术指导原则。3. 内控标准在兽药的制备工艺中，起始原料、试剂可能存在着某些杂质，若在反应过程中无法将其去除或者参与了副反应，对终产品的质量有一定的影响，因此需要制定相应的内控标准对其进行控制。一般要求对产品质量有一定影响的起始原料、试剂制订内控标准，同时还应注意在工艺优化和中试放大过程中起始原料和重要试剂规格的改变对产品质量的影响。一般来说内控标准应重点考虑以下几个方面：（1）对名称、化学结构、理化性质要有清楚的描述；（2）要有具体的来源，包括生产厂家和简单的制备工艺；（3）提供证明其含量的数据，对所含杂质情况（包含有毒溶剂）进行定量或定性的描述；（4）如果需要采用起始原料或试剂进行特殊反应，对其质量应有特别的要求，如：对于必须在干燥条件下进行的反应，需要对起始原料或试剂中的水分含量进行严格的要求和控制；若起始原料为手性化合物，需要对对映异构体或非对映异构体的限度有一定的要求；（5）对于不符合内控标准的起始原料或试剂，应对其精制方法进行研究，这样有利于对工艺和终产品的质量进行控制。通常，在工艺路线稳定的条件下，所采用的起始原料、试剂的质量也应相对稳定。（三）工艺数据的积累在兽药研发过程中，原料药的制备工艺研究是一个不断探索和完善的动态过程，兽药研发者需要对制备工艺不断地进行试验，反复进行优化，以达到获得一个可行、稳定、收率较高、成本合理并适合工业化生产的工艺路线。在这个重复完善的过程中，积累充足的实验数据对判断工艺路线的可行性、稳定性具有重要意义，同时也可以为质量研究提供有关信息。因此，在兽药研发过程中，研发者应积极主动收集有关的工艺研究数据，并尽可能提供充分的原料药制备数据的报告，并对此进行科学的分析，作出合理的结论，充分的数据报告也将有利于药品评价者对原料药制备工艺的评价，需要说明的是，数据的积累贯穿兽药研发的整个过程。工艺数据的报告一般从以下几个方面考虑：对工艺有重要影响的参数、投料量、产品收率及质量检验结果（包括外观、熔点、沸点、比旋度、晶型、结晶水、有关物质、异构体、含量等），并说明样品的批号、生产日期、制备地点。工艺数据报告一般分为临床研究和生产研究两个阶段，可采用表格的形式进行汇总，参考式样见附件。（四）中间体的研究及质量控制在原料药制备研究的过程中，中间体的研究和质量控制是不可缺少的部分，其结果对原料药制备工艺的稳定具有重要意义，也可以为原料药的质量研究提供重要信息，同时也可以为结构确证研究提供的重要依据，对中间体结构进行确证，可以为终产品的结构确证起辅助作用（详见原料药结构确证研究的技术指导原则）。一般来说，由于关键中间体对终产品的质量和安全性有一定的影响，因此对其质量进行控制有较大意义。对于新结构中间体，由于没有文献报道，因此其结构研究对于认知该化合物的特性、判断工艺的可行性和对终产品的结构确证具有重要作用。对关键中间体、新结构中间体质量进行控制，对工艺的稳定性、终产品的质量研究具有重要的意义。对于一般中间体的质量要求可相对简单，对其质量可以进行定量控制。有时，因终产品结构确证研究的需要，有必要对已知结构中间体的结构进行研究。1.已知结构的关键中间体一般情况下应对其理化常数、质量（定性、定量）进行研究，根据结构确证研究的需要，提供相应的结构研究资料。理化常数研究一般应包括：熔点、沸点、比旋度、溶解性等，并与文献报道的有关数据进行比较。质量控制一般包括：性状、异构体（对于具有立体异构的化合物）、有关物质、含量等。结构研究：如果因终产品结构确证的需要，应对其结构进行确证，并应与有关的文献资料进行比较。2. 新结构的中间体一般情况下应对其结构进行确证，并对理化常数、质量控制（定性、定量）进行研究。结构研究：一般来说应进行红外、紫外、核磁共振（碳谱、氢谱，必要时进行二维相关谱研究）和质谱（包括高分辨质谱）等的研究，以确证该中间体的结构。理化常数研究一般包括：熔点、沸点、比旋度、溶解性等。质量研究一般包括：性状、异构体（对于具有立体异构的化合物）、有关物质、含量等。3.已知结构的一般中间体一般情况下应对其理化常数进行研究，并与文献资料进行比较，同时还应对其质量进行研究，并根据结构确证研究的需要，提供相应的结构研究资料。理化常数研究一般包括：熔点、沸点、比旋度、溶解性等。质量研究一般包括：采用TLC、HPLC 、GC 等方法，对其在反应过程中进行定量或定性控制。结构研究：如果由于终产品结构确证研究的需要，应对其结构进行确证，并应与有关的文献资料进行比较。4. 中间体的再精制对于不符合标准的中间体，应对其再精制的方法进行研究。（五）工艺的优化与中试放大在原料药的工艺研究中，工艺的优化与中试放大是原料药制备从实验室阶段过渡到工业化阶段不可缺少的环节，也是该工艺能否工业化的关键，同时对评价工艺路线的可行性、稳定性具有重要的意义。原料药制备工艺优化与中试放大的主要任务是：（1）考核实验室提供的工艺路线在工艺条件、设备、原材料等方面是否有特殊的要求，是否适合工业化生产；（2）确定所用起始原料、试剂或有机溶剂的规格或标准；（3）验证小试工艺是否成熟合理，主要经济指标是否接近生产要求；（4）进一步考核和完善工艺条件，对每一步反应和单元操作均应取得基本稳定的数据；（5）根据中试研究资料制订或修订中间体和成品的质量标准、分析方法；（6）根据原材料、动力消耗和工时等进行初步的技术经济指标核算；（7）提出“三废”的处理方案；（8）提出整个合成路线的工艺流程，各个单元操作的工艺规程。一般来说，中试所采用的原料、试剂的规格应与工业化生产时一致。通过动、植物中提取的有效单体、通过微生物发酵得到的原料药的实验室研究、中试与合成兽药基本相似，仅用提取、分离、纯化等工序代替各步化学反应。在工艺优化和放大过程中，中试规模的工艺在兽药评价中具有非常重要的意义，该阶段是连接实验室研究和工业化生产的重要部分，是评价原料药制备工艺可行性、真实性的关键，是质量研究的基础，兽药研发者应特别重视原料药的中试放大研究，需要说明的是中试规模工艺的设备、流程应与工业化生产一致。原料药的中试的规模问题一直存在争议，主要是因为不同兽药规模的要求应该是不同的。应根据不同兽药（创新兽药、发酵兽