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Hela细胞传代培养实验目的：掌握动物细胞培养的基本原理和方法。实验用具：每组用具（移液枪一把，一盒枪头，长吸管一包（4-6根），培养瓶1个【48人为一组，看细胞数量来定，传代比例1；2最多1：3】。实验药品：0.25胰酶，DHanks，1640培养基实验原理：HeLa 是Henrietta Lacks的简称，Henrietta Lacks 是一位患有子宫颈癌的美国妇女的名字，在她死后，该细胞走被广泛散发到各研究机构，并无限次地繁殖分裂下去。实验前的准备:培养基的配置：RPMI-1640培养粉 1袋 碳酸氢钠 2.0 g青、链霉素 各100单位毫升加三蒸水 至 1000ml, 过滤除菌。调节pH值至7.2临用前加血清（终浓度 10）消化液的配置：胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用灭菌的Dhanks配置。 配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25 。用滤器过滤除菌Dhanks配方:氯化钠 8.0g氯化钾 0.4g 磷酸氢二钠（Na2 HPO 7H2 O） 0.06g 磷酸二氢钾0.06g NaHCO3 0.35 gEDTA二钠 0.2 g酚红 0.02 g三蒸水定容到1000毫升。PH调整到8.0。血清的准备与添加l 优质血清的标准：透明，淡黄色，无沉淀物，无细菌、支原体、病毒污染。l 血清的灭活（消除补体活性）：56 水浴 ，30 分钟培养用具的准备：所用器具高压灭菌，D-hanks缓冲液。酶液，培养液。实验步骤：1.打开超净台，把实验中所需用具放到超净台上。2.从冰箱中取出0.25胰酶、培养基。可以把胰酶和培养基的瓶盖拧松备用。3.取待传代的细胞，倒掉旧的培养基，移液枪加入胰酶2ml（加入的量以覆盖整个细胞培养面为宜）。轻轻摇动4. 1-2分钟后迅速将消化液倒掉。注意：此步消化时间需要根据每次培养的细胞不同状态灵活掌握，没有固定时间。消化时间长短是实验成败的关键，宁可短消化，不能过消化。否则细胞会变死。在倒置显微镜下观察，当细胞质回缩，胞间间隙加大为消化适宜。5取培养基5 ml加入培养瓶终止消化，轻轻摇动，如果瓶壁依然有细胞未脱落，用长吸管反复轻轻吹打培养瓶壁，制备细胞细胞悬液。吹打的部位均匀，从上到小，从左到右，顺序进行吹打，保证各个部位的培养细胞均能吹打到，成片的细胞已经分散成小的细胞团或者单细胞便停止吹打。吹打时用力不要过猛，尽量不要出现气泡，以免损伤细胞。6至所有细胞从培养瓶壁脱落下来，轻轻摇匀，然后按照1：2或者1；3均分，每个培瓶（50ml）补齐到5 ml培养基，放入CO2培养箱中培养，放入之前瓶盖适当拧松，酒精喷雾消毒瓶盖和瓶身。7待培养基（本身为红色），当pH值降低，培养基呈偏
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