高效液相色谱直接进样法测定水中灭草松、2，4-滴.docx

高效液相色谱直接进样法测定水中灭草松、2，4-滴作者：马颖作者单位：天津泰达自来水公司【摘要】采用直接进样-高效液相色谱-紫外检测器，Waters Alliance 液相色谱系统, Waters Symmetry RP8 3.9150mm,5m色谱柱，以磷酸二氢钾-乙腈为流动相，紫外检测器检测波长230nm。结果表明本方法的灭草松和2，4-滴相对标准偏差在 6.1-7.8%,平均回收率90.0%- 93.3%，最低检测质量分别为0.25ng，0.26ng，若取水样100uL，则最低检测质量浓度分别为：2.5ug/L，2.6ug/L。 【关键词】 高效液相色谱法，紫外检测器，2，4-滴，灭草松。1 引 言 我国自1956年试验使用除草剂以来，除草剂的生产及应用得到了长足发展。而今，除草剂已成为全世界农药产品中新的龙头老大，其销售额遥遥领先于杀虫剂和杀菌剂。据统计，截至2000年7月底，共有404个国内外厂家在中国登记除草剂，单剂品种(有效成分)102个，产品总数达1421个，其中国产产品1078个。灭草松、2，4-滴作为两种酸性除草剂，在我国新颁布的生活饮用水卫生标准（GB5750-2006）中有严格的限定：2，4-滴的标准限值为0.03mg/L，灭草松的标准限值为0.3mg/L。 我国新生活饮用水准检验方法（GB 5750.9-2006）使用气相色谱检测方法，因为需要柱前衍生，使得检测步骤复杂、重现性差。我实验室采用液相色谱法，用Waters Symmetry RP8 3.9150mm,5m分离，Waters 2489紫外检测器进行检测。实验表明，该方法的检测灵敏度高，无需萃取浓缩，即可得到良好的检测效果。2 实验部分2.1 实验仪器Waters Alliance 液相色谱系统，包括Waters 2695分离单元，Waters 2489紫外检测器、Empower色谱信息管理系统、120位自动进样器；色谱柱Waters Symmetry RP8 3.9150mm，5m。2.2 实验试剂2.2.1 灭草松：德国Dr.公司 纯度98%。2.2.2 2,4-滴：美国Accustandard公司 100mg/L。2.2.3 Milli-Q超纯水。2.2.4 磷酸（?20=1.69g/mL）。2.2.5 磷酸二氢钾。2.2.6 乙腈，HPLC级。 试剂配制后，摇匀，使用前用0.45m或0.22m的水相滤膜过滤。2.3 色谱分离条件2.3.1 流动相：A泵：13mM磷酸二氢钾，用磷酸调PH值等于3.4,流速0.75mL/min。 B泵：乙腈，流速0.25mL/min。2.3.2总流速：1.0mL/min。2.3.3柱温：30。2.3.4 紫外检测器；230nm。2.4 样品2.4.1水样采集和保存：样品充满采样瓶，置于4冰箱保存，尽快测定。2.4.2 样品预处理：样品不需要浓缩，直接检测，经0.22um或0.45um的滤膜过滤，进样100uL。2.5校准2.5.1 定量分析中的标准方法；外标法。2.5.2 标准样品A使用次数：每次分析样品时用新标准使用溶液绘制标准曲线。B 标准样品的制备a. 灭草松标准储备溶液：准确称取0.0100g灭草松标准，用甲醇溶解，定容于100mL容量瓶中，此溶液浓度为100mg/L。 b. 2，4-滴标准储备溶液：吸取标准溶液1mL用甲醇定容至10mL，此溶液浓度为10mg/L。c.标准中间溶液：分别移取灭草松标准溶液（2.5.2 B a）100uL及2，4-滴标准储备溶液（2.5.2 B b）1mL至10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，获得混合中间溶液，置于4冰箱保存备用，此溶液浓度为?（灭草松，2，4-滴）=1mg/L。d. 标准使用溶液：移取1mL标准中间溶液（2.5.2 B c）至10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀，获得混合标准使用溶液，此溶液浓度为?（灭草松，2，4-滴）=100ppb2.5.3 工作曲线制备：分别吸取标准使用溶液（2.5.2 B d）250，500，1000，2000，2500L用纯水定容至10mL配制成标准系列。进样量100L，注入色谱仪。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制工作曲线。工作曲线质量浓度相当于水中质量浓度为2.5，5，10，20，25g/L2.6 定量分析取100L水样注入色谱仪，测量峰高或峰面积。通过标准曲线的回归分析计算草甘膦的浓度。 2.7色谱峰考察2.7.1色谱图2.7.2 组份出峰顺序：灭草松，2，4-滴。2.7.3保留时间: 灭草松11.7min，2，4-滴甲萘威为14.3 min。3 结果与讨论 在上述条件下，取系列浓度标准溶液进样，测定峰面积，以峰面积Y为纵坐标，检测物的质量浓度X（mg/L）为横坐标绘制标准曲线,实验数据如下；线性范围回归方程线性相关系数灭草松2.5-25g/LY=772.6049X-396.0683r=0.999052，4-滴2.5-25g/LY=259.5487X-197.5714r=0.99925峰面积与质量浓度的线性关系良好。实验室对样品（加标浓度2.5g/L、5g/L）重复测定7次，灭草松的相对标准偏差为 6.5%、7.8%,2，4-滴的相对标准偏差为 6.1%、7.3%,灭草松的加标回收率为95.5%、90.6%,平均回收率93.0%，2，4-滴的加标回收率为88.2%、93.3%,平均回收率90.8%。进样量100u时L，灭草松和2，4-滴的最低检出浓度分别为：0.625ug/L，0.650ug/L，灭草松和2，4-滴的最低检测质量浓度分别为：2.5ug/L，2.6ug/L。生活饮用水卫生标准GB5749-2006水质指标规定，2，4-滴的标准限值为0.03mg/L，灭草松的标准限值为0.3mg/L。因此无需进行样品浓缩，对饮用水直接检测即可达到生活饮用水的检测要求，与气相色谱方法相比方法简单准确。实验中发现，由于被测物在水中的溶解性小，进行加标回收时，加入标准物质的量不宜过大，否则会