真菌毒素快速筛选技术培训教程1.ppt

食品中化学污染物和有害因素 快速筛选技术简介,一 酶联免疫分析技术,主要内容,应用前景,操作步骤,产品及其特点,原理介绍,1 原理介绍,1.1 技术基础,免疫测定 elisa是一种免疫测定。 免疫测定（immunoassay，ia）是应用免疫学技术测定标本的方法。 在检验中主要通过抗原抗体反应检测样品中的抗原性物质。 抗原抗体反应具有特异性和敏感性。,1.2 elisa的原理,elisa的基础 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。 待测物与固相载体表面的抗原或抗体结合。洗涤液体中的其他物质。再加入酶标记的抗原或抗体。 加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。,由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。,1.3 elisa的类型,直接竞争法,样品溶液,酶标抗原,二抗,抗体,1.3 elisa的类型,间接竞争法,样品溶液,抗原,酶标二抗,抗体,2 产品及其特点,2.1 产品概要,应用范围：该产品可以快速定量的检测不同样品中的多种真菌毒素、非法添加物、抗生素等。 突出特点：，适用于大量样品筛选。,消耗品和仪器,消耗品： 一次性使用,mk-3ex型全自动酶标仪,仪器,采用“单键飞梭”旋钮，方便适用和设定 方便、快捷、精准，行业内属世界首创 可选配酶免工作站，酶免分析软件终身提供免费升级。 具有振板功能，速度和时间可调；,2.2 产品汇总,4 应用领域,粮油企业 粮食收购站 工商、质量监督系统 饲料企业 养殖厂 餐饮系统 干货调料企业等,黄曲霉b1试剂盒操作流程,（直接法）,直接法基本原理,1.准备工作,先将保存在4中的试剂盒取出，使试剂盒温度回温到室温，并确保在有效期内使用。 打开试剂盒，取出说明书并认真阅读,2.样品处理, 称取粉碎的样品5g 将5g样品倒入50ml离心管中,70%甲醇水 提取液的配置 取25ml 70%甲醇水倒入50ml离心管中,将盖子拧紧后，振荡器提取10min 振荡结束后，取下，用滤纸过滤即可。 若检测样品为饲料样品，应使用针式滤膜（0.22m有机系）过滤,1）吸取50l 标准品或样品提取液分别加至相 应的微孔（双孔）中，然后各加入50l 稀释后 的酶标抗原，再加入50l 稀释后的抗体，加盖， 在室温温育10-30min（依据检测的毒素不同）。,3.点板程序,2）倒出孔中的液体，每孔加入250l 稀释好的洗涤液，置于酶标板振荡器上振荡30s钟（或者手工振荡），重复操作四次。洗完后用力在吸水纸上拍干。,4、酶标板的洗涤,3）每孔加入150l显色底物，室温避光温育10min。,5、显色,4）每孔加入50l 终止液。,6、终止,7、读数,mk-3ex型 全自动酶标仪,8.软件的安装,使用前先将软件成功安装到计算机上 1）将压缩文件包解压缩 2）双击图标 3）输入序列码：123456,9.软件的使用,双击图标 打开软件，进入主页面 点击新建按钮，建立检测程序，如图 左侧为标准品浓度的设置，依次输入标准品浓度，和平行个数 右侧为样品个数和样品稀释倍数 设置好后点击确定，进入主页面，如下图,上半部分为设置部分，需要按位置点击，点击后标准品显示为 第一个标准品的平行，依次类推。 样品点击后显示为 下半部分为od输入值 输入后入右下图,软件输入前,软件输入后,点击图标 即可出标准曲线,点击图标 即可得到样品检测结果,现有客户,淮安ciq、中国检科院、顺义质检所、大兴质检所、朝阳质检所、四川农科院、四川眉山质检所（蒙牛出事的地方）、内蒙古质检院、希杰饲料（全国10个分公司，南京有一个分公司）、国家粮食局质量中心、湖北粮油检测站、山东粮油检测站（全国大约20个粮油检测单位）、安徽cdc、芜湖cdc等10个左右cdc单位、一些饲料企业、一些牛奶企业,二 胶体金免疫层析技术,主要内容,应用前景,操作步骤,产品及其特点,原理介绍,1 原理介绍,1.1 技术基础,快检卡的技术基础 icheck系列快检卡采用的是胶体金免疫层析快速检测技术 （gold immunochromatography assay gica）,1957年英国化学家制备胶体金 1990年beggs建立胶体金免疫层析,标记蛋白（抗体）,1.2 反应模式,竟争抑制法 此法适用于小分子抗原的检测。目前滥用药物、农药残留、体液中小分子肽的检测等采用此方法。 clover检测真菌毒素、抗生素、瘦肉精等快检卡都是应用的这种反应模式,1.3 反应原理,抗原,二抗,1.4 定量原理,依据显色深浅采用计算机图像处理系统定量,竞争性免疫反应 纳米胶体金技术 检测线控制线的颜色深浅（t/c）与被测毒素浓度之间具有一定的相关性。t线颜色越深，毒素浓度越低。 建立数学模型，通过专用计算软件，直接测定出毒素的浓度值。,为什么要用仪器定量？,定性的消线法 定量的准确性,icheck新成员！,icheck - 全触屏内置软件 自动打印,icheck - 便携式新品,仪器,配套齐全,2.2 icheck快检系统特点, 针对性强：具备项目校正和仪器校正，结果更可靠； 配套性强：提供全套检测仪器设备； 个性化服务：中检维康技术中心为每个企业每个产品提供专有的分析方法； 使用方便：可以用于实验室和现场的检测； 快速筛查：1个小时1个人可以检测30个样品； 操作简单：不需要特殊的培训，前处理仅需十几分钟； 环境友好：不需要有毒的标准品； 数据安全：电子标定卡专用； 结果准确：最低检测限满足食品安全限量标准； 数据完整：测定结果实时显示、可以打印、可以转存计算机中；,2.3 icheck 系列产品汇总,茶叶样品,组织样品,3 操作步骤,（1） 取100-1000g有代表性的样品，将样品粉碎，过20目筛。 （2） 称取5.0g样品，加25ml 甲醇（70%）/水提取3分钟（手摇）（设备混合10分钟）。 （3） 过滤，取滤液1-5ml。,3.1 前处理步骤,（1）取120l 稀释缓冲液、30l样品提取液于微孔中，混匀后取100l加入到快检卡中。 （2）快检卡在37干式恒温器中温育10分钟。 （3）将快检卡插入到快检仪中，测定、读数。,3.2 样品测定步骤,已有的验证材料（符合美国农业部试剂盒标准） 牛奶酸奶m1-农业部、检科院,验证试验,1 黄曲霉毒素添加回收（玉米）,黄曲霉毒素阳性样品（ddgs 7.3ppb）,黄曲霉毒素阳性样品重现性试验,2 呕吐毒素添加回收（玉米）,测定值与添加浓度相关性,液相方法与胶体金免疫层析方法测定结果对比（全价饲料）,3 玉米赤霉烯酮添加回收试验（玉米）,试验样品ddgs用hplc测定值为158.6ppb,3人9次快检卡平均测定值与hplc值之间的差异为-10.4%。,