USP方法与EP方法对比实验.doc

USP与 EP检测方法的对比实验一 实验目的：比较USP与 EP检测方法结果的区别二 实验中需要注意的重要参数：仪器：高效液相色谱仪，紫外分光光度计，TLC，傅里叶红外变换光谱仪，*同种仪器使用同一台试剂：同种规格的试剂应尽量使用同一生产批号或同一批配制的。人员：同一指标必须由同一人完成。三 执行方法及标准：1 定性鉴别：1.1 EP方法：A红外吸收光谱在105oC下干燥样品6小时，用4mg样品录制谱图。将所得谱图与化学参比物谱图。B：在0.4ml溶液S1中加入10ml水，5ml稀盐酸，2ml重铬酸钾溶液。产生橘黄色沉淀。C：在1ml的S1溶液中加入0.2ml的二甲氨基苯甲醛和0.1ml的硫酸，生成粉红色溶液。D：在0.1ml的S1溶液中加入5ml的水和0.2ml0.05mol/l的碘溶液，生成红色溶液。E：取0.5g 样品溶解于10ml水中，摇动，全部样品溶解。溶液外观：溶液S澄清，颜色浅于B6，BY6。1.2 USP方法：A取10ml20mg/ ml的样品溶液加入20ml1当量的盐酸和5ml的重铬酸钾溶液，生成黄色沉淀。B用2ml纯水溶解75mg的硝酸钴和300mg的硫氰酸铵，加入5ml的20mg / ml的样品溶液，再加入3当量的盐酸，生成蓝色沉淀。C取5 ml 5mg/ ml的样品溶液加入数滴碘液，溶液变成深红色。注：溶液S：取1.0g样品，溶解于无二氧化碳水中并稀释至20ml。取少量待测样品到水中，用磁力搅拌器搅拌。溶液S1：取2.5g样品，溶解于无二氧化碳水，并稀释至25ml。取少量待测样品到水中，用磁力搅拌器搅拌。参比液B6溶液的配：黄色溶液：用盐酸溶液（HCl/H2O=25ml/975ml）溶解46g FeCl3并定容至1000ml，滴加相同的盐酸溶液调整FeCl36H2O的浓度为45.0 mg/ml，避光存放。滴定：加10.0ml 上述溶液，15ml水，5ml HCl，4gKI于250ml带塞磨口锥形烧瓶中，塞上瓶塞，加100ml水，避光存放15min。用0.1M Na2S2O3滴定游离的碘，当滴定达终点时，加0.5ml +淀粉溶液做指示剂。1ml 0.1M Na2S2O3 等量于27.03mg FeCl36H2O。红色溶液：用盐酸溶液（HCl/H2O=25ml/975ml）溶解60g CoCl2( cobalt chloride R)并定容至1000ml，滴加相同的盐酸溶液调整CoCl26H2O的浓度为59.5 mg/ml。滴定：加5.0ml 上述溶液，5ml H2O2的稀溶液，10ml 300g/l的NaOH溶液，于250ml带塞磨口锥形烧瓶中，慢慢煮沸10min，冷却，加60ml稀H2SO4，2g KI，塞上瓶塞，轻轻摇动使沉淀物溶解。用0.1M Na2S2O3滴定游离的碘，当滴定达终点时，加0.5ml 淀粉溶液做指示剂，粉红色显示为终点。1ml 0.1M Na2S2O3 等量于23.79 mg CoCl26H2O。蓝色溶液：用盐酸溶液（HCl/H2O=25ml/975ml）溶解63g CuSO4)并定容至1000ml，滴加相同的盐酸溶液调整CuSO45H2O的浓度为62.4 mg/ml。滴定：加10.0ml 上述溶液，50ml水，12ml 稀醋酸，3g KI于250ml带塞磨口锥形烧瓶中，塞上瓶塞，加100ml水，避光存放15min。用0.1M Na2S2O3滴定游离的碘，当滴定达终点时，加0.5ml 淀粉溶液做指示剂。浅棕色显示为终点。1ml 0.1M Na2S2O3 等量于24.97mg CuSO45H2O。标准溶液B的配制见表1：表1 标准溶液B的配制标准溶液 体积/ml黄色溶液红色溶液蓝色溶液盐酸（10g/l）B(褐色)3.03.02.41.6 参比液B6的配制见表2：表2 参比溶液B6的配制参比液 体积/ml标准液B盐酸（10g/l）B65.095.02 K值：2.1 EP方法：2.1.1 标准：理论K值15的聚维酮，其实际K值为理论值的85%-115%；理论K值或平均理论K值15的聚维酮，其实际K值为理论值或平均理论K值的90.0%-108.0%2.1.2试验方法：取本品1.00（g）按无水物计算精密称定，置50ml烧杯中,加水适量使之溶解,置100ml容量瓶中并加水稀释至刻度,在25恒温水浴中放置1h，用最小流动时间为100S的粘度计检测。测得相对粘度r，按下式计算K值。 K=300Cz+(C +1.5Cz)21/2+1.5Cz-C/(0.15C+0.003C2)式中C为供试品的浓度（g/100ml） 2.2 USP方法：2.2.1标准：理论K值15的聚维酮，其实际K值为理论值的85%-115%；理论K值或平均理论K值15的聚维酮，其实际K值为理论值或平均理论K值的90.0%-108.0%2.2.2 检测方法：称取1g(按无水物计算)样品，用50ml水溶解至100ml容量瓶中，用水稀释至刻度线。在25+0.2oC下用毛细管粘度计测量其粘度。在同样环境下测量水的年度。用下面公式基数按K值：K=300Cr+(C +1.5Cr)21/2+1.5Cr-C/(0.15C+0.003C2)式中：C：100ml溶液中样品无水物质量Z: 样品溶液相对于水的相对粘度。3 醛：3.1 EP方法：3.1.1 标准：表证为乙醛，不超过500ppm3.1.2 试验方法：3.1.2.1 测试液：精密称取1.0g待测样品，用PH=9.0的磷酸盐缓冲液溶解并稀释至100.0ml。塞紧容量瓶，使其处于密封状态，并在60水浴中恒温1h，再冷却至室温，备用。3.1.2.2 参比液：精密称取0.140g三水合三聚乙醛胺，用纯水溶解并稀释至200.0ml。取1.0ml上述溶液置100ml容量瓶中，再用PH=9.0的磷酸盐缓冲液溶解至100.0ml。3.1.2.3 操作步骤：取三个相同的石英比色皿（L=1cm）分别加入0.5ml的测试液，参比液，水（作空白）。然后在每个比色器中加入2.5ml的PH=9.0的磷酸盐缓冲液和0.2ml的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，摇匀，塞紧。将它们放在222下，保持23mim后，以纯水为空白，在波长为340nm的紫外分光光度计上测定每个溶液的吸收度，并记录。然后再在每个比色皿中，加入0.05ml乙醛脱氢酶，摇匀，塞紧，放在222下保持5mim，以纯水为空白，在340nm紫外分光光度计上测定每个溶液的吸收度，记录每个数据。计算公式醛的含量(ppm)：式中： At1:加入乙醛脱氢酶前待测液的吸光度At2:加入乙醛脱氢酶后待测液的吸光度As1:加入乙醛脱氢酶前参比液的吸光度As2:加入乙醛脱氢酶后参比液的吸光度Ab1:加入乙醛脱氢酶前空白液的吸光度Ab2:加入乙醛脱氢酶后空白液的吸光度m:不含水的聚维酮的质量（g）C:参比液中乙醛的浓度，按三聚乙醛胺的重量计算（转换系数：0.72mg/ml）3.2 USP方法：3.2.1 标准：小于0.05%3.2.2 检测方法：3.2.2.1 溶液A：用500ml容量瓶中加入8.3g焦磷酸钾，加入400ml水石其溶解，如必要，以1当量的盐酸调节PH为9.0，用水稀释至刻度线。3.2.2.2 溶液B：在一小玻璃瓶中加入等同于70单位的冻干乙醛脱氢酶，加入10ml水时期溶解。3.2.2.3 溶液C：向一小玻璃瓶中加入40mg烟酰胺腺嘌呤核苷酸，再加入10ml溶液A使其溶解。3.2.2.4 标准液：在玻璃称量瓶中加入2ml水，再加入100mg新蒸的乙醛，将此溶转移至100ml容量瓶，用几分水清洗称量瓶，转移每次的洗液至容量瓶中，用水稀释 至刻度线。在4oC下放置20小时。取此溶液1ml至100ml容量瓶用水稀释至刻度线。3.2.2.5 样品溶液：在100ml容量瓶用溶液A配制成20mg/ml的聚维酮溶液，在60oC水浴加热1小时，冷却至室温。3.2.2.6 空白液：水3.2.2.7 在三个比色皿中分别加入0.5ml标准液，样品溶液。空白液，在每个比色皿中分别加入2.5ml溶液A和0.1ml溶液C。盖上比色皿的盖子，在20+2oC放置2到3分钟。用水做残壁测量吸光度。在每个比色皿中加入0.05ml溶液B，盖上盖子，在20+2oC放置5分钟。以水做参比测量吸光度。用下面公式计算醛的百分含量Result = 10 (C/W) (AU2- AU1) - (AB2 -AB1)/(AS2 -AS1) -(AB2- AB1)C：标准液中乙醛的浓度(mg/ml)W：聚维酮的质量(g)AU2：加入溶液B后样品溶液的吸光度AU1：加入溶液B前样品溶液的吸光度AB2：加入溶液B后空白液的吸光度AB1：加入溶液B前空白的吸光度AS2：加入溶液B后标准溶液的吸光度AS1：加入溶液B前标准溶液的吸光度4 过氧化物：4.1 EP方法：4.1.2 标准：4.1.3 实验步骤：4.1.3.1 标准曲线的绘制 4.1.3.1.1 仪器校正将样品池与参比池中加入25mL被测物溶液与2mL 13%硫酸的混合液，交换样品与参比两池在分光光度计中的位置，在405nm处参比池的透光度为100%，保持样品池的透光度100%，并记为:C%。4.1.3.1.2 标准溶液的配制与标准曲线的绘制配制H2O2含量分别为6ppm,8ppm,9ppm,10ppm,11ppm,12ppm,14ppm和15ppm的一系列标准溶液,每一浓度取25mL，滴加2mL硫酸化钛试液，静置30分钟。以25mL被测溶液加2mL 13%硫酸作为参比液,分别测定并记录该系列标准样品在405nm处的透光率，T1,T2,T3,TT8%。Y以H2O2的浓度为横坐标,LogA为纵坐标作图,即得到一条标准曲线(应为一条直线)。4.1.3.1.3待测样品的配制和测定4.1.3.1.3.1 待测样品溶液称取样品4.0克，用100毫升纯化水溶解并搅拌30分钟；取25ml样品溶液，加入2ml硫酸氯化钛溶液，静置30分钟后用分光光度计测定该样品在405nm处的吸光度，记为：A%；计算logA,然后在标准曲线方程中计算处样品溶液中的过氧化物的浓度，再除以样品重量，从而计算处样品的真实过氧化物的浓度。 参比液吸取25mL待测样品溶液，加2mL 13%（V/V）稀硫酸溶液,静置30分。4.1.4 结果处理计算出LogA,然后在标准曲线的方程中计算出样品溶液中的过氧化物的浓度,再除以样品重量，从而计算出样品的真实过氧化物的浓度。计算公式C = (C1 /M)*100 式中： C：样品的真实过氧化物的浓度C1：待测样品溶液过氧化物的浓度M：称取样品质量5 甲酸：5.1 EP方法：标准5.1.1 标准：小于0.5%5.1.2 实验验方法：5.1.2.1 测试条件预柱：柱长为0.025m,内径为4mm，固定相为色谱级强酸性离子交换树脂（ 5-10m）；柱子：长度为0.25-0.30m,内径为4-8mm；固定相：强酸性离子交换树脂（5-10m）；流动相：用水稀释0.25ml的高氯酸至1000ml；流速：调节流速，使得甲酸的出峰保留时间大约为11分钟；进样量：50l；检测波长：210nm；柱温：30；重现性：连续6次重复测参比液，最大相对标准差为2.0%。5.1.2.2 样品液准备：精密称取样品2.0g，用纯化水溶解并稀释至100.0ml容量瓶中，并充分摇匀，备用。将强酸性离子交换树脂R的悬浮水溶液转移到内径0.8cm、长20mm的玻璃管中，其间保持酸性离子交换树脂一直浸没在水中。倾倒5ml水，且调节流速至约20d/min，当水平线接近强酸性离子交换树脂的顶层时，将测试储备液倒入柱子上，当倒了2ml时，收集1.5ml，并将其作为测试液。5.1.2.3 参比液制备：精密称取甲酸100mg,用纯化水溶解并稀释至100.0ml，取上述溶液1ml，并用纯化水稀释至100.0ml。5.1.2.4 计算：5.1.2.4.1 校正因子（F）=A1/C1 式中： A1：外标物峰面积C1：外标物的重量，mg5.1.2.4.2 样品中甲酸的含量（外标）甲酸=A2/ (F*C2)*100%式中:A2:样品出峰峰面积，mvsC2：样品的重量，mg6 肼6.1 EP方法：6.1.1 标准：小于1ppm6.1.2 试验方法：6.1.2.1 溶液的的配制待测液：精密称取2.5g无水样品，用25ml纯水溶解至50ml容量瓶中，加0.5mL 50g/L水杨醛的甲醇液，混匀，60水浴加热15mim，冷却，加2.0mL甲苯，摇匀2mim，离心，取上层混合液作为待测液。参比液：精密称取90mg水杨醛吖嗪用甲苯溶解至100mL，取1mL上述溶液用甲苯稀释至100mL。展开剂：甲醇/水（2：1）。6.1.2.2 操作步骤薄板活化：将硅烷化硅胶板F254薄层板在105110活化30分钟，活化后放置干燥器中备用。点样：距底边1.01.5cm划基线，用微量进样器吸取10L待测液进行点样，点样斑点直径控制在23mm，自然风干（除去原点残留的溶剂，以免残留溶剂的展开，造成不良影响）。展开：用展开剂将密封的层析罐饱和15分钟，将点样后的薄层板置层析缸内，（勿与展开剂接触）预饱和10分钟，然后将点样后的薄层板浸入展开剂中约0.5cm（注意勿使展开剂浸到点样斑点），展开，待上行迁移到规定高度（距基线615cm）时取出，置通风处自然风干。检视：在365nm紫外灯下观察、标记。测比移值（Rf）：Rf = 原点至色谱斑点中心的距离/原点至溶剂前沿的距离（水杨醛吖嗪Rf 为0.3）。判断：测试液中水杨醛吖嗪在薄板上显示的任何斑点，不强于参比液（1ppm）的斑点。6.2 USP方法：6.2.1 标准：小于1ppm6.2.2 溶液的配制：标准液：9.38g/ml的水杨醛吖嗪甲苯溶液。样品溶液：转移2.5g样品至50ml离心管，混合溶解，加入500L1：20的水杨醛吖嗪甲醇溶液。摇动，在60水浴下加热15分钟。冷却，加入2.0ml甲苯，插上一个胶管摇动两分钟，离心。去甲苯溶液的上清液为样品溶液。6.2.3色谱系统：吸附剂：0.25mm二甲基硅烷化层析硅胶敷用量：10L展开剂：甲醇：水 2：1波长：365nm6.2.4 操作步骤：在固定相上点上规定体积的溶液，以获得直径为2-5mm的斑点。将半放入试验箱，保证斑点在展开剂的上方。关闭试验箱，令展开剂沿着板上爬，直到展开剂爬到板高度的3/4，取出板用铅笔标记展开剂的边缘位置，放置干燥。用365nm的紫外光观察斑点，水杨醛吖嗪斑点的层析迟缓因子为0.3，样品溶液的任何斑点都千与标准液。7.残单：7.1 EP方法:7.1.1标准：小于10ppm7.1.2实验方法：7.1.2.1 测试条件预柱：柱长为0.025m,内径为4mm，固定相为色谱级十八烷基硅烷键合硅胶（5m）；色谱柱：柱长为0.25m,内径为4mm，固定相为色谱级十八烷基硅烷键合硅胶（5m）；流速：调节流速，使得NVP的出峰保留时间大约为10分钟；流动相：乙腈：水=10：90（V:V）； 柱温：40；进样量：50L； 检测波长：235 nm；重现性：参比液(a)连续重复进样测定六次之后，其最大相对标准偏差为2.0%；分辨率：参比液（b）中残单出峰时间与醋酸乙烯酯的出峰时间的间隔色谱峰最小值2.0。7.1.2.2 溶液的制备： 样品液准备：精密称取0.25g无水样品，用流动相溶解并稀释至10.0mL，充分摇匀备用。 参比液制备：(a):精密称取50mg的乙烯基吡咯烷酮，用甲醇溶解并稀释至100mL，用移液管吸取此溶液1.0mL用甲醇稀释至100.0mL，再用移液管吸取上述稀释液5.0mL，用流动相稀释至100.0mL。(b):精密称取10mg乙烯基吡咯烷酮和0.5g醋酸乙烯用甲醇溶解，并稀释至100.0mL，用移液管吸取上述溶液1.0mL，用流动相稀释成100.0mL。7.1.2.3 标准曲线的绘制：精密称取0.01gN-乙烯基吡咯烷酮至100ml容量瓶，用水溶解，并稀释至刻度线，取0.1ml，0.2ml，0.5ml，1ml，5ml，10ml分别稀释至100ml，制成0.1ppm，0.2ppm，0.5ppm，1ppm，5ppm，10ppm的溶液。分别进样50L，以所得峰面积对浓度做图，的到一条直线y=mx其中：y代表峰面积x代表浓度，m为比例系数。7.1.2.4 计算方法：根据样品的峰面积由标准曲线得出样品溶液的残留单体外标浓度。按以下公式计算： 样品的残留单体浓度(ppm)=C2/C1 式中：C1：样品浓度 C2：外标物的浓度7.2 USP方法：7.2.1 标准：小于0.001%7.2.2 实验方法：7.2.2.1测试条件：流动相：甲醇：水=1：4色谱系统：检测器：UV235nm柱：保护柱：4.0mm*25mm封尾L7柱分离柱：4.0mm*25mm；5m封尾L7柱柱温：40oC进样量：50L7.2.2.2 溶液的配制：系统适应性溶液：取10mgN-乙烯基吡咯烷酮和500mg醋酸乙烯酯至100ml容量瓶，拥挤春溶解并稀释至刻度线，取此溶液1ml至100ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度线。标准储存液：5g/ml的N-乙烯基吡咯烷酮甲醇溶液。标准液：用流动相稀释标准储存液至0.255g/ml。样品溶液：25mg/ml的聚维酮流动相溶液。7.2.2.3 录制谱图，并计算相应的N-乙烯基吡咯烷酮的峰面积。7.2.2.4结果的计算：用下面公式计算N-乙烯基吡咯烷酮的百分含量： N-乙烯基吡咯烷酮的百分含量 =(rU/rS)*(CS/CU) *100 rU 样品溶液中的N-乙烯基吡咯烷酮的峰面积。 rS 标准液中N-乙烯基吡咯烷酮的峰面积。 CS 标准液中N-乙烯基吡咯烷酮的浓 CU 样品溶液中N-乙烯基吡咯烷酮的浓度。 8 2-P:8.1 EP方法8.1.1标准：小于3%8.1.2实验方法：8.1.2.1测试条件：预柱：长0.025m,内径为3mm的封端十八烷基甲硅烷硅胶（5m）；色谱柱：长0.25m,内径为3mm的封端十八烷基甲硅烷硅胶（5m）；流速：调节流速，使得-P的出峰保留时间大约为11分钟；流动相：纯化水，用磷酸调节PH至2.4；进样量：50L；检测波长：205 nm柱温：30重现性：重复六次测定参比液之后，其最大相对标准偏差为2.0%8.1.2.2溶液的配制： 待测液准备：精密称取待测样品100mg，用纯水溶解并稀释至50.0mL。参比液制备：精密称取-P100mg，用纯水溶解并稀释至100.0mL。取上述溶液3.0mL至50.0mL容量瓶，用纯水定容至刻度，摇匀备用。8.1.3 计算：8.1.3.1 校正因子F=A1/C1式中： A1：外标物峰面积C1：外标物的重量，mg8.1.3.2 样品中-P的含量（外标）A2/（F*C2）*100%式中： A2：样品出峰峰面积，mvsC2：样品的重量，mg 8.1.3.3 判断：样品峰面积要小于等于参比液色谱图的主要峰面积的3.0%。9重金属：9.1 EP方法：9.1.1标准：小于10ppm9.1.2实验方法：9.1.2.1 待测液的配制：(1) 将2.0g样品与0.5g MgO混合均匀，并灼烧至均匀的白色或灰白色。如果灼烧30分钟后仍然有色，可以待降温后用玻璃棒搅拌后再次灼烧。(2) 将灼烧残渣于800下烘1小时。(3) 收集残余物溶解于5ml盐酸和5ml水的混和溶液中，并将溶液分成两份。(4) 取一份，在其中加入0.1ml酚酞试液，再加入浓氨水，直至显示粉红色，冷却后再加入冰醋酸至无色，再加入0.5ml冰醋酸。如需要过滤得到的液体，并洗涤滤纸。(5) 将步骤（4）得到的试液稀释至20ml。(6) 取此溶液12ml备用。9.1.2.2空白液的配制：10ml纯化水加入2ml待测液配制步骤（5）的试液。9.1.2.3 参比液的配制： (1) 将2.0g样品与0.5g MgO混合均匀，加入2ml 10ppm的铅标准溶液，在100105下烘干，并灼烧至均匀的灰白色。(2) 将灼烧残渣于800下烘1小时。(3) 收集残余物溶解于5ml盐酸与5ml水的混和溶液中，并将溶液分成两份。(4) 取一份，在其中加入0.1ml酚酞试液，再加入浓氨水，直至显示粉红色，冷却后再加入冰醋酸至无色，再加入0.5ml冰醋酸。如需要过滤得到的液体，并洗涤滤纸。(5) 将步骤(4)得到的试液稀释至20ml。(6) 取10ml所得溶液，并加入2ml的待测液。6.4 分析：在上述各溶液中分别同时加入2ml PH为3.5的缓冲溶液并摇匀，然后加入1.2ml硫代乙酰胺混合液，并摇匀。2分钟后观察各个比色管中的溶液。9.1.2.4 结果判断：6.6.1 前提条件：若参比液与空白液相比，不显浅棕色；或者监测液与参比液不匹配，那么实验无效。6.6.2 判断：若所有测试溶液的褐色都比参比液的浅，则说明被测物符合要求。与空白液比较，铅标准液应为浅棕色。 备注：1 硫代乙酰胺试液的配制：取硫代乙酰胺4g，加水使溶解至100ml，置冰箱中保存，临用前取混合液（由1mol/LNaoH溶液15ml，纯化水5ml及甘油20ml组成）5.0ml加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml，置水浴上加热20秒，冷却，立即使用。2 标准铅溶液的配制：精密称取在105干燥至恒重的硝酸铅0.1598g，置1000ml容量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，临用前，精密量取贮备液10ml，置100量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于10ug的pb）。3 PH为3.5的醋酸盐缓冲溶液的配制见其SOP。9.2 USP方法：9.2.1 标准：小于10ppm9.2.2实验方法：由于此方需使用剧毒的氰化物股本实验不做此方法的比较。10 水分：10.1 EP方法：10.1.1标准：小于5.0%10.1.2实验方法：10.1.2.1滴定甲醇中的水分（确定终点）加无水甲醇（分析纯）于反应瓶中，至淹没电极裸露端即可。开动电磁搅拌器，用卡尔费休试剂滴定甲醇中的含水份，滴定主电流表指针偏转40uA处，保持1分钟不变，视为终点。（不记录卡尔费休试剂消耗的体积。）10.1.2.2卡尔费休试剂的标定（测定水当量）用双链球加压使卡尔费休试剂到达滴定管的满刻度，再用微型注射器（100微升）取30uL蒸馏水（标准水），从加料口橡皮塞中注射于反应瓶中，原有的棕色即可变为淡黄色，同时表头指示应从45向左偏转到“0”附近。随即用卡尔费休试剂进行滴定，指针逐步向右偏转，到达45uA后，保持1分钟不变，记录卡尔费休试剂消耗体积。10.1.2.3水当量的计算 ：公式：T WV1 式中，W 标定时注入标准水的重量（毫克） V1 滴定消耗卡尔费休试剂的体积（毫升）10.1.2.4 样品测定将滴定管中卡尔费休试剂加至满刻度。（1）液体样品的测定： 用注射器（其大小应根据样品水分含量多少而选择，消耗的卡尔费休试剂应不超过20ml，下同）取样品，注入反应瓶中然后进行滴定，方法同前。（2）固体样品的测定： 用称量管精密称取0.500克试样（准确至0.0001g）打开加料口橡皮塞迅速将称量管试样倾入反应瓶中，立即盖紧橡皮塞，搅拌溶液使试样溶解，用卡尔费休试剂如前滴定至指针偏转到45uA处，即为终点。10.1.2.5结果计算水分（TV2）G100式中：V2 滴定消耗卡尔费休试剂的体积（毫升）T 卡尔费休试剂的水当量 G 样品的重量（毫克）10.2 USP方法：10.2.1标准 小于5.0%1水当量的的计算：用称量管精确称量30mg水，加入反应瓶中，滴定到终点。用下面公式计算水当量F，F=W/VW：水的质量，mg。V：消耗试剂的体积，ml。2水含量的检测：加入35ml甲醇至反应瓶，滴定到终点，以消耗掉反应瓶中可能存在的水蒸气，讯孙加入样品，滴定至终点。用下面公式计算水的质量：M ，mg M=SFM：水的质量，mgF：水当量S： 消耗实际的体积，ml11 PH值：11.1 EP方法：11.1.1标准：3.0-5.011.1.2测定方法：11.1.2.1按说明书的规定，接通电源预热仪器，调节零点和温度补偿。11.1.2.2校准pH电极11.1.2.3 一点校准：根据样品溶液的pH值选择接近其pH值的标准缓冲液，将电极放入标准缓冲液中，调节定位旋钮至规定的pH值。11.1.2.4 二点校准：选择二种pH值相差3个单位的标准缓冲液进行校正。误差不应超过该仪器性能指标的相应规定，否则应重换标准缓冲液重新校正仪器直至符合要求后再测样品。11.1.2.5待测液的配制：精密称取样品1.0g置小烧杯中，加水19g后用玻璃棒充分搅拌，形成均一溶液（若需过滤，则过滤后取滤液测定）。11.1.2.6待测液的测定：校准pH电极后，将电极冲洗干净后放入待测液中并读数，显示屏上终点数值即为该样品pH值。11.2 USP方法：11.2.1 标准：3.0-7.011.2.2 实验方法：11.2.2.1 按说明书的规定，接通电源预热仪器，调节零点和温度补偿。11.2.2.2校准pH电极11.2.2.3 一点校准：根据样品溶液的pH值选择接近其pH值的标准缓冲液，将电极放入标准缓冲液中，调节定位旋钮至规定的pH值。11.2.2.4 二点校准：选择二种pH值相差3个单位的标准缓冲液进行校正。误差不应超过该仪器性能指标的相应规定，否则应重换标准缓冲液重新校正仪器直至符合要求后再测样品。11.2.2.4 待测液的配制：精密称取样品1.0g置小烧杯中，加水19g后用玻璃棒充分搅拌，形成均一溶液（若需过滤，则过滤后取滤液测定）。11.2.2.5待测液的测定：校准pH电极后，将电极冲洗干净后放入待测液中并读数，显示屏上终点数值即为该样品pH值。12 含氮量：12.1 EP方法：12.1.1 标准：11.5%-12.8%12.1.1.1称样:称0.1g待测样品,置于干燥的50mL凯式烧瓶中。12.1.1.2 消化:在凯氏烧瓶中加入由1g硫酸铜、1g二氧化钛、33g硫酸钾组成的混合物5g，用少量的水将你粘连在瓶壁的物质清洗进瓶底，沿烧瓶瓶壁滴加硫酸7mL，并加入3粒玻璃珠，在烧瓶口放一小漏斗，先用小火缓慢加热，然后逐步加大火力，直到溶液变成透明、浅黄绿色溶液，继续加热45min,冷却。小心加入20ml水。12.1.1.3蒸馏：取40g/l硼酸溶液30mL，置于100mL吸收瓶中，加3滴溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，将定氮仪的冷凝管底端插入液面下，再将凯氏烧瓶中内容物经漏斗转入蒸馏瓶中，用水淋洗烧瓶及漏斗，再加入40%氢氧化钠溶液30mL，并用10ml水淋洗，关橡胶管夹子，用蒸气蒸馏，直到蒸馏液达到80-100mL，停止蒸馏，将冷凝管下端压低，使残留在冷凝管中的馏分流入吸收瓶，用少量水清洗冷凝管尾端，最后移走吸收瓶。12.1.1.4滴定：馏出液用硫酸滴定液（0.025mol/l）滴定至溶液颜色由绿色变为淡灰蓝色，最后变为灰紫色，读取硫酸滴定液消耗的体积，并将滴定的结果用空白试验较正。每1mL硫酸滴定液（0.025 mol/l）相当于0.7004mg的氮。12.1.1.5计算公式：含氮量（%）=（V-V0）*0.014*N/M*100%式中： V：样品所消耗硫酸滴定液的体积,mLV0：空白所消耗硫酸滴定液的体积,mLN：硫酸滴定液的浓度,mol/LM：样品的质量，g12.2 USP方法：12.2.1 标准：11.5%-12.8%12.2.2 实验方法：12.2.2.1 称样:称0.1g待测样品,置于干燥的50mL凯式烧瓶中。12.2.2.2 消化:在凯氏烧瓶中加入由1g硫酸铜、1g二氧化钛、33g硫酸钾组成的混合物5g，用少量的水将你粘连在瓶壁的物质清洗进瓶底，沿烧瓶瓶壁滴加硫酸7mL，摇动凯式烧瓶，用小火