紫甘薯中花青素的提取及含量的测定.doc

紫甘薯中花青素的提取及含量的测定山东农业大学 化学学院 09级材化2班 赵林静东农业大学 化学学院 09级材化2班 李新 要用乙醇酸溶液从紫甘薯中提取花青素。用PH示差法对提取液中花青素含量进行测定。关键字：紫甘薯 花青素 PH示差法1 前言：花青素又称花色素，是一种广泛存在于植物中的水溶性天然色素。属黄酮类化合物，多以糖苷的形式存在，也称花色苷。花色苷是一种以黄酮核为基础的一类糖苷，天然花色苷配糖体的基本结构为3、5、7-三羟基-2-苯基并呋喃。最早且最丰富的花青素的花青素是从后葡萄渣中提取的葡萄皮红，花青素作为一种天然食用色素，安全，无毒，资源丰富，而且具有一定的营养和药用价值，在视屏、化妆、医药等方面有着巨大的应用潜力。有实验证明，花青素是迄今为止所发展的最强效的自由基清除剂。 目前对花青素的定量没有较好的方法，常用的方法是以色价或吸光度表示其相对含量，也有用花青素纯品配置不同浓度梯度制作标准曲线测定色素的含量但由于花青素的标准品很不稳定，限制了这种方法的使用。本实验用PH示差法对紫甘薯中花青素的提取液中花青素的含量进行测定。2 实验目的2.1掌握花青素的提取方法及其PH示差法测量花青素含量的原理2.2熟练掌握分离提纯操作方法步骤。3 实验原理紫甘薯中含有花青素，用乙醇的酸溶液作为提取液在离心机的作用下即可得到粗的花青素提取液。PH示差法的原理为花青素的色调和色度随PH值的不同而发生改变。PH为1.0时，花青素以红色的2-苯基并呋喃的形式存在。结合朗伯比尔定律可得出在两个不同PH值下，花青素溶液的吸光度差值与花青素含量成正比。4 实验仪器及试剂仪器：电子天平；钥匙；精密PH试纸；PH计；表面皿、玻璃棒；烧杯；干燥的带塞子的锥形瓶250ml(4支)；100ml容量瓶（4支）；胶头滴管；500ml试剂瓶（3支）；高速离心机、离心管（6支）；分光光度计；10ml小量筒（3支）；摇床；烧杯3支试剂：粉末状紫甘薯30g(自备)； 分析纯的乙醇试剂 500 ml 氯化钾20g 醋酸钠30g 去离子水1000ml 分析纯的盐酸50ml5 实验步骤5.1乙醇的酸溶液 按85：15的比例将分析纯的乙醇溶液与去离子水混合，再用浓盐酸调节PH至1.0左右。5.2 缓冲溶液的配制pH 1.0 的缓冲液 准确称取7.45g kcl 用蒸馏水定容至500 ml。准确称取8.5ml 分析纯的盐酸用蒸馏水定容至500ml,配成0.2mol/l HCL 溶液。 将KCL溶液与HCL 溶液以 25：:67 的比例混合，用KCL 溶液调PH（0.91.1）pH 4.5的缓冲液 准确称取16.4gNaAc 用蒸馏水定容至500ML，用盐酸调PH（4.44.6）5.3 花青素的提取 1. 准确称取三份约5g 的紫甘薯干粉于三个干燥的带塞子的250ML 锥形瓶中 2.分别向三个锥形瓶中加入100ML乙醇的酸溶液，摇匀。 在摇床上振荡20min。 3.依次将三个锥形瓶中的混合液在高速离心机下离心（10000 r/min ,5min）. 4.取上清液分别转移至三个干净的锥形瓶中。 5.得到粗的花青素的提取液。5.4 PH示差法测定花青素的含量 1.分别移取1号锥形瓶中的10ML试样两份，置于两个100ML容量瓶中。2.分别 用PH1.0，PH4.5 的缓冲液定容至100ML。 3.达平衡后约80分钟，在525nm和700nm波长下分别测定两溶液的吸光值。4.对2,3号锥形瓶中的提取液进行如上操作。6实验记录及数据处一号测定波长PH 525nm700nmPH=1PH=4.5二号测定波长PH 525nm700nmPH=1PH=4.5三号测定波长PH 525nm700nmPH=1PH=4.5A=(A525nm-A700nm)PH1.0-(A525nm-A700nm)PH4.5花青素的含量C(mg/100g)=(A*MW*DF*V)*100/(*L*Wt)A吸光度 -矢车菊花素-3-葡萄糖苷的消光系数，26900 DF稀释因子MW-矢车菊花素-3-葡萄糖苷的449.2 V-最终体积，ml L 光程，1cm7费用计算 50