课件：No.1~~衣原体的基因检测.ppt

第十章 感染性疾病的分子诊断 陈沙,第三节,衣原体的基因检测,题名：超高倍显微镜与安图生物检验试剂检测衣原体和支原体的分析 作者：黄位强 出处：检验医学与临床 2012年第17期 摘要：目的探讨超高倍镜在检测衣原体和支原体方面应用的准确度。了解健康人群的支原体和衣原体健康携带情况。方法对2011年411月到贺州市中医医院作妇科健康体检的512例妇女进行阴道分泌物超.,题名：支原体衣原体感染在不孕症中的影响 作者：张艳萍 出处：中国医药科学 2012年第14期 摘要：目的探讨支原体和衣原体感染在不孕症中的影响。方法选取2010年1月2012年1月来笔者所在医院就诊的不孕症妇女36例作为观察组;另外选取同期的正常生育妇女36例作为对照组。支原体检验培,题名：浅谈沙眼衣原体感染与母婴传播的关系 作者：韦新文 出处：求医问药：下半月刊 2012 摘要：目的探讨本地区泌尿生殖道感染患者支原体、衣原体感染状况。方法衣原体抗原检测采用单克隆抗体金标法;支原体检测采用液体培养法。结果 1226例标本中检出支原体453例,总阳性率为36.9%,其.,目录,衣原体（chlamydia）的定义 衣原体特点 衣原体结构 衣原体的分类 衣原体的发展,没有肽聚糖，小基因组； 能通过细胞滤器，有独特发育周期、 严格细胞内寄生的原核细胞型微生物,在自然界中传播广泛； 专性细胞内寄生，一般寄生在动物细胞内；,一 、衣原体（chlamydia）的定义,什么是衣原体,二、 衣原体特点,具有DNA和RNA两种核酸，二分裂增殖，有核糖体和黏肽组成的细胞壁； 衣原体基因组的Mr为66010,比除支原体外的任何原核生物都小；,其生活周期分为细胞外期（即有感染性的原体）和细胞内期（即增殖性的始体）两个时期；,原体（elementary body，EB）：有感染性，体积小，卵圆形，电子密度大，直径为0.20.4微米，细胞壁厚，一种不能运动的球状细胞，对外界不良环境抵抗力强。 始体（initial body）亦称网状体(reticulate body，RB)无感染性：球状细胞，形体较大,呈圆形或不规则形，电子密度较小，直径 约为0. 3 0. 5微米，细胞壁薄，壁中结构松散以二分裂进行繁殖，产生小细胞。,三、衣原体结构,中间体 (Intermediate body)：存在的一种过渡形态。,衣原体与细菌的主要区别： 缺乏合成生物能量来源的ATP酶，其能量完全依赖被感染的宿主细胞提供。,衣原体和其他微生物的区别,衣原体与病毒的主要区别： 具有DNA、RNA两种核酸、核糖体和一个近似细胞壁的膜，并以二分裂方式进行增殖，能被抗生素抑制。,四、衣原体分类,沙眼衣原体(C. trachomatis ) 肺炎衣原体(C. pneumoniae) 鹦鹉热衣原体(C. psitta ) 反刍动物衣原体(C.pecorum),一、沙眼衣原体,不仅能引起眼科的感染性疾病，还可以引起泌尿生殖道、呼吸道感染等。其中以沙眼最常见。,而且是致盲的首位因素。人类是其主要的自然宿主。,：CT血清型D基因组长1042519bp，含有894个蛋白编码基因，G+C含量为41.3%，另一个是7493bp的隐蔽性质粒基因。,（一）.沙眼衣原体（CT）基因组结构,：根据CT的核酸组织具有真核样特性和为适应专性细胞内寄生所进行的复杂进化。,（二）诊断方法：,一：传统的实验室检测CT： ：细胞培养法检测衣原体包涵体 （缺点：费时费事，成本高，技术难度高，难以普及）,：血清学实验:如荧光抗体法或酶标抗体法 （缺点：越来越不能满足临床要求）,二：分子诊断方法 1：PCR PCR的特异性主要取决于引物的特异性。 PCR扩增所选靶序列主要有主要外膜蛋白（MOMP）、隐蔽性质粒和16SrRNA基因序列,2：LCR （ligase chain reaction）连接酶链反应。其扩增效率与PCR相当，最大特点为可区分基因序列中的单个基因突变。由Landegree于1988年首次应用于镰刀形红细胞贫血的分子诊断。,什么是LCR？,连接酶链反应（ligase chain reaction）：是继PCR后，新出现的一种更加完善的DNA体外扩增和检测技术，在检测点突变等方面具有独特的优点。该技术是利用DNA连接酶构建共价磷酸键，特异地连接双链DNA，经加热变性、退火和连接等步骤后，再多次反复循环，从而使目的DNA得以大量扩增。,LCR主要用途： 1：单碱基突变遗传病的检测 2：病原微生物种和亚种的检测 3：进行多位点同时定向诱变,二、肺炎衣原体,肺炎衣原体（CP）是衣原体属中的一个新种，只有一个血清型，其代表株为TW-183和 AR-39。,因两株衣原体的血清型完全相同，合并称TWAR组衣原体，98kD蛋白为其特异性抗原。,（一）.肺炎衣原体（CP）基因组结构,CWL-029株基因组含1230230bp，含有1073个蛋白编码基因，G+C含量为40.6%，其中636个基因的功能已确定，251个基因和CT等同源，为蛋白编码基因。 有21个多形膜蛋白基因，比沙眼衣原体多12个。多集中于2个染色体区域，有三个则单独存在。,（二）诊断方法：,一：传统的实验室检测CP： 细胞培养法检测 免疫学方法 （缺点：阳性率低，特异性差，临床应用存在局限性）,二：分子诊断方法,1：PCR PCR的特异性主要取决于引物的特异性。 2：FQ-PCR：又称荧光定量PCR,3：免疫杂交PCR 4：竞争性PCR,发展应用,（三）临床意义,寄生人类，也寄生于马和考拉树熊体内； 主要引起青少年急性呼吸道感染，可引起肺炎、支气管炎、咽炎和鼻窦炎等； 临床表现：咽痛、声音嘶哑等； 慢性感染与急性心肌梗死和慢性冠心病有关； 慢性肺炎衣原体感染可能是冠心病的一个重要因素。,肺炎衣原体感染与急性心肌梗死的关系 目的 探讨肺炎衣原体感染与急性心肌梗死之间的关系. 方法 应用固相酶联免疫吸附试验( ELISA)方法定量检测70例急性心肌梗死患者及60例正常对照组血清中肺炎衣原体IgG抗体水平,同时采用乳胶增强免疫比浊法进行C-反应蛋白(CRP)的测定. 结果 急性心肌梗死组肺炎衣原体IgG和CRP阳性率均显著高于正常对照组,IgG平均浓度也明显高于正常对照组,两组比较差异有统计学意义(P0.05). 结论 肺炎衣原体感染可能通过影响动脉粥样硬化斑块的稳定性,激发和加重冠状动脉内炎症反应,可能是构成急性心肌梗死发生发展的一个危险因子. 作 者 贾新巧 (南阳医学高等专科学校第一附属医院心血管内科,河南南阳,473000) ； 刊 名 中国实用医刊 2012 年39卷06期 81-82页 英文期刊名 Chinese Journal of Practical Medicine 关键词 肺炎衣原体 急性心肌梗死 动脉粥样硬化 MeSH 主题词 衣原体肺炎(Chlamydophila pneumoniae) 散射测浊法和比浊法(Nephelometry and Turbidimetry) 动脉粥样硬化(Atherosclerosis) 吸附(Adsorption) 危险(Risk),1：DNA 中 G+C mol% 分析主要用于区分细菌的属和种； 2：因为细菌 DNA 中 G+C 含量的变化范围一般在 25 75 ； 3：放线菌 DNA 中的 G+C 比例范围非常窄 (37 51%) ; 4：一般认为任何两种微生物在 G+C 含量上的差别超过了 10 ，这两种微生物就肯定不是同一个种。因此可利用 G+C mol 来鉴别各种微生物种属间的亲缘关系及其远近程度。,5：值得注意的是，亲缘关系相近的细菌，其 G+C mol 含量相同或者近似，但 G+C mol 相同或近似的细