苯甲酸、山梨酸及山梨酸钾的测定—气相色谱法.docx

苯甲酸钠、山梨酸及山梨酸钾的测定气相色谱法一、实训内容适用于测定酱油、果子汁等食品的苯甲酸钠、山梨酸及山梨酸钾的含量。通过酸化处理从样品中提取苯甲酸钠、山梨酸及山梨酸钾，气相色谱法测定，绘制标准曲线，计算样品含量。二、实训目的、要求理解气相色谱法的原理，能熟练操作气相色谱仪。能熟练处理样品。三、实训原理样品酸化后，用乙醚提取山梨酸，用氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。四、仪器和用具气相色谱仪：Agilent 7890气象色谱仪，配有氢火焰离子化检测器。五、试剂乙醚：不含过氧化物。石油醚：沸程30600 盐酸。无水硫酸钠。盐酸（1+1）：取100 mL盐酸，加水稀释至200 mL。氯化钠酸性溶液(40 g/L)：向氯化钠溶液(40 g/L)中加少量盐酸（1+1）酸化。山梨酸标准溶液：准确称取山梨酸（0.1g左右）g，置于100 mL容量瓶中，用石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂溶解后并稀释至刻度。此溶液相当于（1m g/mL左右）山梨酸。山梨酸标准使用液：吸取适量的山梨酸标准溶液，以石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂稀释至每毫升相当于0.5150 mg、0.2575mg、0.1288 mg、0.06438 mg、0.03219 mg山梨酸。苯甲酸钠标准溶液：准确称取苯甲酸钠（0.1g左右）g，置于100 mL容量瓶中，用石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂溶解后并稀释至刻度。此溶液相当于（1m g/mL左右）苯甲酸钠。苯甲酸钠标准使用液：吸取适量的苯甲酸钠标准溶液，以石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂稀释至每毫升相当于0.5245 mg、0.2623mg、0.1311 mg、0.06556mg、0.0375 0mg苯甲酸钠。六、操作步骤1. 样品提取（可口可乐、“6个柠檬”）称取（10g左右）g可口可乐和（10g左右）g6个柠檬事先混合均匀的样品，分别置于50mL带塞锥形瓶中，加0.5mL盐酸（1+1）酸化，用15mL、10mL乙醚提取2次，每次振摇1min，将上层乙醚提取液吸入另一个25mL带塞锥形瓶中。合并乙醚提取液，用3mL氯化钠酸性溶液（40g/L）洗涤2次，静止15min，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混匀。准确吸取10mL至带塞锥形瓶中，置40水浴上挥干，加入2mL石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂溶解残渣，备用。2. 色谱参考条件色谱柱：毛细管柱，内径0.25mm，长30m，内装涂以5%苯基-甲基聚硅氧烷固定液的HP柱。气流速度：载气为氮气，压力10psi，分流比30:1，空气流速400mL/min，H2流速30mL/min，尾吹25mL/min。温度：进样口230；检测器230；柱温190。3.测定进样2 L标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中，可测得不同浓度山梨酸、苯甲酸钠的峰高，以浓度为横坐标、相应的峰高值为纵坐标绘制标准曲线。同时进样2 L样品溶液。测得峰高与标准曲线比较定量。七、测定结果（一）标准系列条件：进样口：230柱温：190等度，保持2.3min检测器：230压力：10psi分流比：30:1空气流速400 mL/minH2流速30 mL/min尾吹：25 mL/min1. 空白的测定空白试剂：乙醚：石油醚（1:3）出峰位置在1.735min（空白的谱图）2. 山梨酸、苯甲酸钠标准品的测量山梨酸单标（1.931min）（谱图） 苯甲酸钠单标（2.057min）（谱图） 山梨酸、苯甲酸钠混标（谱图） 3. 山梨酸标准系列山梨酸标准系列的测量（谱图及标准曲线）4. 苯甲酸钠标准系列（谱图及标准曲线）（二）、样品的测定1. 可口可乐样品1.1气象色谱图（谱图）与混标的对照图（红色可口可乐；蓝色混标） 与山梨酸标准品的对照图（红色可口可乐；蓝色山梨酸（谱图）结论：可口可乐中是否含山梨酸，是否含苯甲酸钠？1.2. 可口可乐样品中山梨酸含量的计算可口可乐样品中山梨酸的含量浓度（mg/mL）峰面积利用标准曲线公式（ ）计算得出2mL提取液中山梨酸的浓度X= （ ）称取可口可乐质量为（ ），原提取溶剂为50mL，取10mL浓缩至2mL进行测定，所以计算得出可口可乐中山梨酸的含量为（ ）mg/g。2. “ 6个柠檬”样品2.1气象色谱图（谱图）与混标的对照图（红色-6个柠檬；蓝色-混标） 与山梨酸标准品的对照图（红色-6个柠檬；蓝色-山梨酸（谱图）结论：6个柠檬中是否含山梨酸，是否含苯甲酸钠？2.2.” 6个柠檬”样品中山梨酸含量的计算6个柠檬样品中山梨酸的含量浓度（mg/mL）峰面积利用标准曲线公式y = （ ）计算得出2mL提取液中浓度X= （ ）mg/mL称取6个柠檬质量为（ ），原提取溶剂为25mL，取5mL浓缩至2mL进行测定，所以计算得出6个柠檬中山梨酸的含量为（ ）mg/g。八、计算公式式中X样品中山梨酸或苯甲酸钠的含量，g/kg；m1测定用样品液中山梨酸或苯甲酸钠的质量，g；V1加入石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂的体积，mLV2测定时进样的体积，L；m2样品的质量，g；5测定时吸取乙醚提取液的体积，mL；25样品乙醚提取液的总体积，mL。九、说明及注意事项样品处理时酸化，可使山梨酸钾/苯甲酸钠钠转变为山梨酸/苯甲酸钠。乙醚提取液