[临床医学]机能实验.doc

机能实验基本知识和基本操作一、常用手术器械及执拿方法的介绍手术剪： 手术镊： 血管钳 （止血钳）爱丽丝钳（Alice钳，组织钳，鼠齿钳）：二、家兔手术的基本操作练习捉拿 称重 麻醉 麻药：乌拉坦 1g/Kg (20%, 5mL/Kg) 给药途径：耳缘静脉注射 麻醉标准：角膜反射消失、肌张力下降、痛反射减弱或消失固定剪毛切口分离气管并进行气管插管辨认并分离颈总动脉、迷走神经、交感神经和减压神经辨认并分离颈外静脉腹腔注射注意事项：1、备皮时不要将皮肤提起来；2、手术要仔细柔和，尽量不要损伤小血管；3、静脉注射麻醉药时注射速度要适当；4、分离神经时首先要辨别三根神经的走向和位置，使用玻璃针进行神经分离。生物信号采集与处理的基本知识坐骨神经-腓肠肌标本的制备v 课程性质： 机能实验学是以生理学、病理生理学、药理学为基础，通过对三学科实验教学优化、融合、重组形成的一门独立的综合性实践课，是机能学教学的重要组成部分和重要的医学基础课程。v 课程内容 机能实验学包括三部分，第一部分，机能学科实验基本知识和技能；第二部分，经典生理学、药理学、病理生理学实验； 第三部分，按系统、方法将正常机能活动、异常病理模型、代表性药物的作用有机结合起来的综合性实验。v 教学目的 通过技能训练和经典实验，培养学生基本的实验操作能力； 通过综合性实验，培养学生运用已学的知识观察、综合、分析和解决实际问题的能力； 通过了解科学研究的一般过程和具体的科研实践，培养学生的科学思想，开拓学生的知识视野，激发学生的创新意识，帮助学生树立严肃认真、实事求是、理论联系实际的优良的科学工作态度和作风。v 学时安排及考核： 总学时为80个学时，本学期32学时，下学期48学时。 该课程的考核方式为：平时成绩占总成绩的30%，实验操作考试占总学时的30%，实验理论笔试占总学时的40%。v 对学习机能实验学课的基本要求 课前认真预习相关内容； 课中正规操作，做好实验记录；对实验中重要现象积极思考，并尽可能的做出合理的解释； 课后认真完成实验报告，并对实验中出现的“异常现象”通过查阅教科书等进行深入研究和讨论； 严格遵守实验室规则。 v 实验室规则 实验期间不得做与实验教学无关的任何事情； 爱护实验设备，节约实验材料，实验过程中损坏的 仪器、器械应如实报告； 保持实验室及周围环境的整洁； 实验结束以后必须将实验器械洗净擦干，如数归还； 教学结束，关好实验室电源、水龙头和门窗。v 机能学实验中常见的四类生物信号： 反映电活动变化的生物电信号； 反映压力变化的信号； 反映张力变化的信号； 反映心输出量变化和血流量变化的信号v 生物信号采集与处理系统的工作流程v BL-420生物信号采集与处理系统的介绍 v 操作流程： 打开计算机和前置放大器 启动BL-420生物机能实验系统 调零和定标 选择实验项目（实验模块）或输入信号（通道/信号类型） 参数调节 标记 停止实验，保存数据和图形实验结束后 对数据进行测量 进行图形剪辑 打印数据或图形三、坐骨神经-腓肠肌标本制备v 杀蛙：破坏蛙的脑和脊髓v 剪除躯干前部及内脏： v 剥皮： v 分离两腿： v 游离坐骨神经： v 制备坐骨神经-小腿标本： v 制备坐骨神经-腓肠肌标本： v 检测标本兴奋性：注意事项： 在整个标本制备过程中，避免用手或金属器械触碰坐骨神经和腓肠肌，也避免用力牵拉。 经常给坐骨神经和腓肠肌滴加任氏液，使标本始终保持湿润。o 刺激强度和频率与骨骼肌收缩反应的关系o 前言o 肌肉收缩是肌细胞兴奋的外在表现。o 前言o 前言o 单收缩：低频刺激，独立收缩o 前言o 复合收缩：高频刺激，叠加收缩n 舒张期复合收缩n 收缩期复合收缩o 前言o 强直收缩：？n 不完全强直收缩n 完全强直收缩o 前言o 实验对象-蟾蜍o 改变刺激强度、频率 肌肉收缩的变化o 理解：1.骨骼肌收缩的“非全或无” “分级性”特征 2.复合收缩与强直收缩形成的条件 o 材料与方法o 动物：蟾蜍 o 药品与试剂：任氏液o 装置和器材：蛙类手术器械；BL-420生物信息采集和分析系统 o 材料与方法o 蛙坐骨神经-腓肠肌标本的制备o 标本的安放与实验装置的连接o 记录收缩曲线n 输入张力信号，启动实验o 观察刺激强度与收缩反应的关系n 从小到大依次给予单个电刺激，找到最适刺激。o 观察复合收缩：n 用最适刺激强度，给予不同时间间隔的两个单刺激，分别观察舒张期和收缩期的复合收缩o 观察强直收缩：n 用最适刺激强度，给予不同频率的串刺激，分别观察不完全强直收缩和完全强直收缩o 材料与方法o 标本制备过程：注意保持标本的兴奋性o 刺激过程：n 注意标本兴奋性的维持n 股骨固定牢；腓肠肌与张力换能器间的连接线有一定的紧张度（最适初长度）n 每次刺激后都要让肌肉休息一定时间o 结果n 单收缩n 舒张期复合收缩 n 收缩期复合收缩 n 不完全强直收缩 n 完全强直收缩 o 讨论o 为什么在一定范围内骨骼肌的收缩张力会随刺激强度的大小而变化？ o 动作电位是肌肉收缩的前奏，为什么动作电位互不融合，而肌肉收缩却随着刺激频率的增加逐渐复合，以至出现完全强直收缩呢？ o 正常机体内肌肉的收缩是哪种形式？有何生理意义？ 神经干动作电位的引导及神经兴奋传导速度的测定【实验目的】1. 引导蟾蜍坐骨神经动作电位，并观察其基本波形（包括双相和单相动作电位）。2. 学习和掌握神经干动作电位传导速度测定的原理和方法。3. 学习和掌握蟾蜍坐骨神经-腓神经标本制备方法。 【实验原理】 动作电位是神经细胞兴奋的客观标志，当神经纤维或神经干受到有效刺激时，必然会产生可传导的动作电位，也称为神经冲动。由于神经干动作电位是许多单根神经纤维动作电位的复合，所以它的特征不同于单根神经纤维的动作电位。本实验采用离体细胞外记录法，记录神经干兴奋时不同位置记录电极之间的电位变化。动作电位可沿神经纤维进行双向传导，其传导速度取决于纤维直径、内阻、有无髓鞘等因素。通过测定动作电位传导的距离和时间，可算出动作电位在神经纤维上的传导速度。【实验材料】 1. 动物 蛙或蟾蜍。 2. 试剂和药品 任氏液3. 装置和器材 计算机、蛙类手术器械、神经屏蔽盒、直尺、圆规、培养皿。【实验方法】1. 神经干动作电位的引导1）制备坐骨神经-腓神经标本 制备方法与制备坐骨神经-腓肠肌标本基本相同，只是当把坐骨神经游离至膝关节后，在腓肠肌一侧继续分离腓神经至足趾，用线结扎，并在结扎线远端剪断。将制备好的坐骨神经-腓神经标本浸入盛有任氏液的培养皿内备用。2）将神经标本置于神经屏蔽盒的电极上。将神经的近中枢端置于刺激电极一侧，外周端置于记录电极侧。3）进入BL-420生物信号采集、处理系统，单击菜单栏中实验项目，在肌肉、神经实验中选择神经干动作电位的引导，观察所引导出的动作电位。4）观察刺激强度对动作电位幅度的影响。实验项目（单击）肌肉、神经实验阈强度与动作电位的关系设置起始刺激强度、刺激增量与时间间隔单击OK观察显示器所显示的随着刺激强度大增大，双向动作电位从无到有、到随着刺激强度的增大而增大、再到刺激强度增大到某一值时，动作电位不再随之增大的变化过程。5）在一对记录电极之间用镊子夹伤神经干，可见双相动作电位的第二相消失，成为单相动作电位。测量动作电位潜伏期（刺激伪迹前沿到动作电位起始的距离），动作电位的幅度和时程。6）将计算机记录的双相、单相动作电位及刺激强度对双相动作电位的影响图经编辑后打印出来。7）增加刺激强度、放大倍数及扫描速度，观察记录神经干单相动作电位波形的变化。2. 神经兴奋传导速度的测定1）制备坐骨神经-腓神经标本。2）将神经标本置于神经屏蔽盒的电极上，方法同上。3）在菜单条的实验项目栏中找出肌肉神经系统实验中的神经干动作电位引导，引导出一个动作电位，测量从刺激开始到动作电位出现的时间，此为T1，测量靠近无关电极的刺激电极到靠近无关电极的记录电极之间的距离，此为S1。改变记录电极的位置再引导一个动作电位，再测量一次，得T2和S2。 (带入公式 V=（S2- S1）/（T2- T1）计算出神经干的兴奋传导速度)3剪辑图形，打印结果、书写实验报告。 【注意事项】1. 神经干应平直地置于电极之上，两端不可与屏蔽盒接触，也不可把神经干两端缠绕于电极之上，两端任其自然悬空。2. 应适时给神经干滴淋任氏液，以保持标本湿润。3. 刺激强度应由小逐级增大，不可过强。4. 在制备坐骨神经-腓神经标本时，尽可能使其长些，最好达10厘米以上。5. 在测量潜伏期时，要适当提高扫描速度，以提高测量精确度。【讨论思考】1. 双相动作电位的两相电位为什么方向相反而大小不等？2. 为什么神经干动作电位能随刺激强度增大而增大？这与“全或无”法则有无矛盾？3. 按公式V=（S2- S1）/（T2- T1）计算的传导速度比按公式V=S/T计算的要精确些，为什么？4. 本实验所测的传导速度能否代表神经干中所有神经纤维的传导速度？为什么？【讨论思考题答案】1. 双相动作电位的两相电位方向相反，是因为它记录的的是两个记录电极之间的电势差，当动作电位传导到第一个记录电极（A）时，A点的电势比另一记录电极（B）的电势低，而示波器规定负电势向上偏转，当动作电位传导到记录电极B时，A点的电势比B点的电势高。所以在示波器上扫描线向下偏转，形成动作电位的第二相。双相动作电位的两相电位大小不等，是因为蟾蜍A类神经纤维的传到速度大约为50m/s，神经纤维动作电位的持续时间约为2ms,两者的乘绩为10cm，表明当神经纤维上某一点从爆发动作电位开始，到其动作电位结束，兴奋已传导到10cm外的一点了。而我们的两记录之间的距离远远小于10cm，所以当B点兴奋时，A点的动作电位尚未完全恢复，所以第二相比第一相的幅度小。2. 神经干动作电位能随刺激强度增大而增大是因为坐骨神经干中有很多根神经纤维，每根神经纤维的兴奋性不同，有的高，有的低。当刺激强度很小时，这一刺激对所有的神经纤维都是阈下刺激，这时没有动作电位引出；随着刺激强度的增加，兴奋性高的纤维兴奋，由于兴奋的纤维数目少，所以动作电位叠加在一起的幅度小；刺激强度进一步增加，兴奋的纤维数目增加，动作电位的幅度随之增大；当刺激强度增达到一定程度时，所有的神经纤维都兴奋，动作电位的幅度达到最大，此后再增大刺激强度，动作电位的幅度不再随之继续增大。这与“全或无”法则不矛盾，因为“全或无”法则是针对单个细胞的动作电位而言的，而神经干的双相动作电位是许多细胞的复合动作电位。3. 按公式V=（S2- S1）/（T2- T1）计算的传导速度比按公式V=S/T计算的要精确些，因为潜伏期T中包括刺激发生的时间，兴奋在神经干上传导的时间和记录到的电信号在导线上传导的时间。而S只是传导的距离，如果用公式V=S/T计算，则V比实际的传导速度慢。如果测两次，在刺激参数不变的情况下T2、 T1具有相同的刺激发生的时间和电信号在导线上传导的时间T2- T1就得到兴奋在S2- S1这一段上的传导所用的时间，所以按公式V=（S2- S1）/（T2- T1）计算的传导速度比按公式V=S/T计算的要精确些。4. 本实验所测的传导速度不能代表神经干中所有神经纤维的传导速度。因为坐骨神经干中有多种根神经纤维，这些神经纤维的传导速度不同，其传导速度取决于神经纤维的直径、内阻、有无髓鞘等因素。本实验所测的传导速度只是代表坐骨神经中数量最多，传导数度最快的A类神经纤维的传到速度。o 期前收缩与代偿间歇o 前言o 心肌兴奋性的周期性变化： 一次兴奋后心肌细胞兴奋性的周期性变化：有效不应期相对不应期超常期。p 心肌细胞的有效不应期特别长，相当于整个缩期和舒张早期。p 在此期内，对任何刺激不产生再次兴奋，因此心脏不会发生完全强直收缩，从而保持收缩和舒张交替进行的节律性活动，完成泵血功能。o 前言o 前言o 期前收缩如果异位起搏点或外加刺激引起的心房或心室的收缩发在下一次窦房节兴奋所产生的收缩之前，这种收缩就叫做期前收缩。o 前言o 代偿间歇期前兴奋也有其有效不应期，故若再次的正常节律性兴奋到达时，心肌正好处于期前兴奋的有效不应期，因而不能产生再次兴奋，直到再下一次正常节律性兴奋到达时方可产生兴奋、收缩。因此，在期前收缩之后到下一次正常收缩之间常有一段较长的舒张期称为代偿间歇。o 目的o 本实验以蟾蜍为实验对象，通过额外刺激引发并观察期前收缩与代偿间歇，加深理解心肌兴奋后兴奋性的周期性变化及其特点。 o 材料与方法o 动物 蟾蜍o 药品与试剂 Ringer氏液。o 装置和器材： 铁支架双凹夹滴管蛙心夹蛙类手术器械蛙板张力换能器计算机及生物信号采集处理系统。o 材料与方法o 手术 n 破坏蟾蜍的脑和脊髓n 暴露心脏n 辨认心房、心室、动脉、静脉窦n 连接实验装置o 结果o 讨论o 心律过慢时，是否会出现代偿间歇，为什么？心律过慢发生期前收缩时，如果正常起搏点的下一次正常节律性兴奋到达时，心肌正好处于期前兴奋的有效不应期，同样不能产生再次兴奋，直到再下一次正常节律性兴奋到达时方可产生兴奋、收缩。这种情况同样会有代偿间歇的产生。o 如果期前收缩发生在舒张晚期，那么正常起搏点的下一次正常节律性兴奋到达时，心肌的兴奋性有可能已经过了期前兴奋的有效不应期，兴奋性已经恢复，这时心脏可以产生再次兴奋收缩，这种情况就不会有代偿间歇的产生。 o 讨论o 讨论o 根据本实验说明心肌兴奋性变化的特点及其生理意义。蟾蜍心脏的有效不应期大约相当于收缩期，如果在收缩期给蟾蜍心脏施加刺激，不会产生期前收缩，说明此时心肌处于有效不应期；在心脏舒张期施加刺激，即可引导出期前收缩，说明这时心肌的兴奋性处于相对不应期或超常期或是已经恢复。o 通过本实验可以验证一次兴奋后心肌细胞兴奋性的周期性变化：有效不应期相对不应期超常期。心肌细胞的有效不应期特别长，相当于整个收缩期和舒张早期。o 蛙心起搏点及自律性观察o 前言o 心肌细胞自律性：o 哺乳动物心脏的特殊传导组织能自动地、按一定节律发生兴奋的能力称为自动节律性，简称自律性。心脏各部分的自动节律性高低不同，其中窦房结的自律性最高（100次/分），房室交界次之（4060次/分），心室浦肯野纤维最低（1540次/分）。o 前言o 起搏点：o 正常起搏点：心脏总是按照当时情况下自律性最高的部位所发出的兴奋来活动的。正常情况下，由于窦房结的自律性最高，是哺乳动物心脏的正常起搏点。由其控制的心律称为窦性心律。o 潜在起搏点：正常情况下，其它部位的自律组织并不表现出它们自身的自律性，只是起着传导兴奋的作用，称为潜在起搏点。o 异位起搏点：在某些异常情况下（窦房结以外的自律组织自律性增高，或窦房结的兴奋因传导阻滞而不能控制某些自律组织），这些自律组织也能发生自律性兴奋控制心脏活动，这些异常起搏部位则称为异位起搏点。由异位起搏点兴奋所引起的心脏节律性活动称为异位心律。o 前言o 窦房结是哺乳动物的正常起搏点，而两栖类动物的静脉窦自律性最高，其心房肌和心室肌都有一定的自律性，频率低于静脉窦，所以蛙心的正常起搏点是静脉窦。o 目的o 通过结扎法观察蛙心脏各部分自律性的高低和确定蛙心起搏点。 o 材料与方法o 动物: 蟾蜍。o 试剂与药品： Ringer氏液。o 装置和器材: 蛙类手术器械滴管蛙板。o 手术及观察项目o 破坏蟾蜍脑和脊髓。 o 暴露心脏o 观察蟾蜍心脏的自律性，静脉窦、心房、心室的跳动顺序并计数单位时间（每分钟）内的跳动次数。 o 沿静脉窦与心房交界的半月线进行第一次结扎，观察静脉窦、心房、心室活动，分别记录三者在每分钟内的跳动次数。o 沿心房和心室交界之间的房室沟进行第二次结扎，观察静脉窦、心房、心室活动，分别记录三者在每分钟内的跳动次数。o 讨论o 正常情况下，为什么静脉窦是蟾蜍心脏的起搏点？它对潜在起搏点如何控制？因为根据实验观察，静脉窦的自律性是蟾蜍心脏组织中最高的，所以它是蟾蜍心脏的起搏点。它是通过抢先占领和超速压抑的机制控制潜在起搏点的o 讨论o 每次结扎后会出现什么现象，为什么？o 第一次结扎后会出现心房、心室停搏的现象，并且过一段时间心房、心室会恢复跳动，并且表现出心房的自律性。第二次结扎后会出现心室停搏的现象，过一段时间心室也会恢复跳动，并且表现出心室肌的自律性。o 这是因为静脉窦对潜在起搏点（心房肌、心室肌）有超速压抑的作用。一旦静脉窦的驱动中断，蟾蜍心脏潜在起搏点需要一定时间才能从被压抑的状态中恢复过来，出现自身的自动兴奋 o 红细胞渗透脆性观察o 前言o 红细胞膜是半透膜，允许一些脂溶性物质，如O2，CO2，水分子自由通透。o 正常红细胞置于不同浓度NaCl溶液中： 等渗溶液：红细胞形态与大小不变； 渗透压递减的一系列溶液中：红细胞逐渐膨大以至破裂溶解。o 前言o 渗透脆性大，对低渗盐溶液抵抗力最小，最早出现溶血。o 渗透脆性小，对低渗盐溶液有最大抵抗力，最后出现溶血。o 红细胞最小和最大渗透抵抗力分别用开始出现溶血与刚达到完全溶血时其所处的NaCl溶液的浓度来表示。 o 目的o 测试红细胞的渗透脆性-加深理解红细胞的生理特性对于实现其正常功能的重要意义。 o 材料与方法o 动物 健康家兔、雌雄不拘。 o 药品与试剂 0.9NaCl溶液， 蒸馏水 。o 装置和器材： 20ml注射器、10ml试管（4个）、20ml试管（2个）、试管架6个，小试管10支，三角瓶、硅胶刷、滴管、离心机、50ml量桶、吸耳球。 o 材料与方法o 心脏采血n 兔子仰卧，n 用手触摸心前区搏动最明显的地方，n 直接用20ml注射器在胸骨左侧23mm与第三肋间隙处垂直进针n 迅速抽出1520ml血液并放入三角瓶中，n 用硅胶刷轻度快速搅动血液以刺激凝血机制，35分钟后拿出硅胶刷。n 材料与方法n 2红细胞悬液的配制 生理盐水稀释后以20002500r/min离心5分钟，吸去液体成分，再加生理盐水混匀、离心。第三次离心后用滴管轻轻吸去上清夜，得到红细胞。用吸管取2ml的血细胞加生理盐水至100ml，即得到2的红细胞悬液。 o 渗透脆性实验：o 将10支小试管按110顺序编号，并排列在试管架上o 按照表7-1所示，加入不同量的2红细胞悬液和蒸馏水，并迅速用拇指封住管口，轻轻缓慢颠倒12次，混匀，o 在室温下放置4060分钟后观察结果。 o 结果o 【注意事项】 o 吸取溶液时必须仔细观察吸管的刻度，做到准确无误。o 试管中加入红细胞悬液后混匀时，不可用力快速振荡，以免人为造成红细胞破裂。o 观察实验结果时勿将试管从试管架上拿出，应水平端起试管架进行观察。o 溶血与药物溶血反应o 前言o 溶血是指红细胞破裂、溶解的一种现象，某些药物，尤其是注射剂的毒副作用之一是引起红细胞膜破裂、造成溶血反应; o 在新药研发或药品生产中，都需要对注射剂药品进行药物溶血实验测定。 o 目的o 通过观察供试药品是否引起溶血反应来了解药物制剂的安全性。 o 材料与方法o 实验动物 健康家兔，体重2.02.5kg ，雌雄不拘。 o 试剂和药品 蒸馏水、生理盐水、供试药品。o 实验器材 离心机，水浴锅，试管，试管架，离心管，吸管，小烧杯，竹签，注射器。o 表7-2 药品溶血反应观察表o 结果观察o 试管内液体下层呈混浊红色，上层为清淡无色或极淡黄色，表示无溶血； o 试管内液体下层呈混浊红色，上层呈透明红色，表示部分溶血； o 试管内液体完全变成透明红色，管底有红细胞膜沉积，表示完全溶血； o 虽无溶血，但红细胞彼此粘连，摇动后不能分散，表示出现红细胞凝集。o 血型鉴定o 前言o 血型鉴定是将单克隆抗A抗体和抗B抗体与受试者红细胞分别混合，观察有无凝集反应，从而推断出受试者红细胞膜上凝集原的有无及类型，确定受试者的血型。o 临床输血时，可因血型不合而引起红细胞凝集，从而使红细胞的功能丧失，危及病人的生命。o 实验目的o 熟悉ABO血型鉴定的方法，充分认识输血时血型不合所造成的严重后果。 o 材料o 对象 人。o 试剂和药品 抗A抗体，抗B抗体，生理盐水o 装置和器材 采血针，玻片，牙签，75酒精棉球，干棉球，碘酒棉球。o 实验方法o 在玻片的两端分别滴抗A抗体、抗B抗体各一滴，并进行标记。o 用碘酒棉球消毒指端或耳垂,再用酒精棉球消毒后,用采血针刺破皮肤,轻挤少量血液。o 用洁净竹签两端各蘸取少量血液，分别加入两种抗体中，并用牙签轻轻搅动片刻或摇动混匀，静置35分钟以上观察。用消毒干棉球置于伤口，并按压23分钟。o 【结果观察】 o 先用肉眼观察有无红细胞凝集，可参考图进行判断。如果不能作出明确判断，可在显微镜下进行仔细观察。o 讨论o 1为什么同一份血液中的红细胞渗透脆性不一样？o 对同一份血液而言，含有的红细胞所处的时期不同，有新生的红细胞，还有衰老的红细胞，这些细胞的渗透脆性不相同，所以同一份血液中的红细胞渗透脆性也不一样。o 讨论o 2何为红细胞的最大脆性和最小脆性？o 对低渗盐溶液抵抗力最小的红细胞，最早出现溶血，被认为其具有最大渗透脆性。反之，渗透脆性最小的红细胞，对低渗盐溶液有最大抵抗力，最后出现溶血。o 讨论o 3本次试验对你以后的临床工作有什么指导意义？o 在临床工作的过程中，所有的药物尤其是新药开发和静脉用药，一定要考虑药物对细胞膜渗透脆性的影响，防止溶血事件的发生。o 讨论o 4如何鉴定并判断出你的血型？o 讨论o 6经ABO血型鉴定后，若是同型血，是否可直接输血？为什么？o 经ABO血型鉴定后，即使是同型血，也不可以直接输血，须考虑其他血型系统如Rh系统的存在，还应做交叉配血实验。o 尿生成的调节o 前言o 尿的生成包括肾小球的滤过、肾小管和集合管重吸收和分泌三个过程。凡影响上述过程的因素，均可引起尿液生成的量及性质发生改变。o 前言o 影响肾小球滤过作用的因素：（1）滤过面积（2）滤过膜通透性（3）有效滤过压（4）肾血流量也有关。 o 影响肾小管和集合管重吸收及分泌作用（肾血流量）的因素：（1） 肾内自身调节 （2）肾交感神经的作用（3）抗利尿激素 （4）醛固酮 o 前言 有效滤过压=肾小球毛细血管压-（血浆胶体渗透压+肾小囊内压） o 前言o 本实验通过以家兔为对象的急性实验，采用膀胱插管术收集并记录尿流量，从而观察在不同因素或药物的作用下尿量的变化。o 材料与方法o 动物：家兔 。 o 药品与试剂：38生理盐水、20%氨基甲酸乙酯溶液、20%葡萄糖注射液、100单位/毫升肝素生理盐水、1/10,000去甲肾上腺素、垂体后叶素、呋噻咪（速尿）、尿糖定性试纸。 o 装置和器材：兔手术台和手术器械、膀胱插管（注射器改装）、注射器及针头 。 o 材料与方法o 方法 n 称重 n 麻醉： 20%乌拉坦5ml/kg n 固定n 颈部手术：正中切口-暴露颈静脉-静脉插管 n 腹部手术： 下腹部切口-暴露膀胱-分离输尿管-结扎外尿道-膀胱切口-膀胱插管-引流尿液o 材料与方法o 观察项目 n 记录正常尿量 n 自耳缘静脉快速注射38生理盐水10ml/kg，观察尿量的变化。 n 自耳缘静脉注射垂体后叶素2单位(0.2ml)，观察尿量的变化。n 自耳缘静脉注射速尿5mg/kg(1%，0.5ml/kg)，观察尿量的变化。 先收集尿液2滴进行尿糖定性实验作为对照。 n 自耳缘静脉注射1/10,000去甲肾上腺素0.5ml/kg，观察尿量变化。n 自耳缘静脉注射20%葡萄糖溶液2.5ml/kg，观察尿量的变化；再收集尿液2滴作尿糖定性实验。 o 注意事项1在家兔麻醉后，立即适量输液，或在实验前30min对家兔灌胃，给水40-50ml，以增加其基础尿流量。 2实验中需多次静脉注射，应注意保护兔的耳缘静脉。注射时，先从耳梢端开始，逐渐向耳根端移近；或选用小儿头皮针刺入耳缘静脉，用胶布固定，以便于多次注射使用。3手术操作应轻柔，以防损伤性尿闭。实验中不能结扎输尿管。4每项实验之前，均记录尿滴数或5min内总尿量，待尿滴均匀稳定后，再开始下一药物。5各项实验顺序的安排是：在尿量增多的基础上进行减少尿生成的实验，在尿量少的基础上进行促进尿生成的实验。讨论分析尿生成调节实验中，分别静脉注射生理盐水、抗利尿激素、速尿、去甲肾上腺素和葡萄糖后尿量变化的作用机制。 静脉快速注射生理盐水后，尿量增加。 机制：一次快速注射20ml生理盐水，使血容量增加了15%，会引起下列情况：(1)血液被稀释，血浆胶体渗透压下降，肾小球有效滤过压增加，肾小球有效滤过率增加，尿量增加。(2)血容量增加，肾小球血浆流量增加，使尿液滤过增多，也促使尿液增加。 静脉注射抗利尿激素，尿量减少。 机制：抗利尿激素的主要作用是提高远曲小管和集合管上皮细胞对水的通透性，从而增加对水的重吸收，使尿液浓缩，尿量减少。静脉注射呋塞米（速尿），尿量增加。 机制：呋塞米可与髓袢升支粗段Na+-K+-2C1-同向转运体可逆性结合，抑制其转运能力，减少NaCl重吸收，从而降低了肾髓质的高渗梯度，从而使肾脏浓缩尿液的能力下降，导致水重吸收减少，尿量增加，产生利尿效果。静脉注射去甲肾上腺素，尿量减少。 机制：去甲肾上腺素能使肾血管收缩，肾血流量减少，从而使肾小球毛细血管血压降低，有效滤过压降低，肾小球滤过率减小，尿的生成减少，尿量减少。静脉注射葡萄糖，尿量增加。 机制：近球小管对葡萄糖的重吸收有一定限度，称为肾糖阈。实验中葡萄糖的注射量使血糖超过肾糖阈，小管液中就会有葡萄糖，进而小管液的溶质浓度增加，渗透压增加，妨碍了肾小管特别是近球小管对水的重吸收，小管液中的Na+浓度被稀释而降低，故Na+的重吸收也减少，氯化钠及水的排出均增加，尿量增加，此称为渗透性利尿，且此时尿液可检测出尿糖阳性。o 心律失常动物模型及抗心律失常药物的作用o 前言o 心律失常（cardiacarrhythmia）指心律起源部位、心搏频率与节律以及冲动传导等任一项异常。o 心律失常与心肌的电生理活动异常有关。o 前言o 制作实验性心律失常模型的方法：n 电刺激引起的心律失常n 结扎冠状动脉引起的心律失常：结扎冠脉一定时间后松扎，可制作缺血再灌注心律失常模型 n 药物诱导的心律失常：常用于诱发心律失常的药物有蛙巴因、乌头碱、氯仿-肾上腺素、氯化钡、氯化钙、强心苷等 o 前言o 氯化钡可增加浦氏纤维Na+内向电流，抑制K+外流，促进舒张期自动去极化，使心肌细胞自律性增高，诱发室性心律失常。o 水合氯醛与氯化钡产生协同作用，诱发大白鼠出现双向性心律失常。o 抗心律失常药物奎尼丁、利多卡因及受体阻滞剂有明显对抗作用，能延缓心律失常的发生或缩短心律失常持续时间。o 抗心律失常药物的分类o 前言o 本实验以大鼠为实验对象，以大鼠的心电图为指标，观察舌下静脉注射氯化钡诱发的心律失常，以及利多卡因对氯化钡诱发的心律失常的治疗作用。 o 材料与方法o 动物：大白鼠，体重200-300g，雌雄不限o 药品与试剂：10%水合氯醛、10%氯化钡溶液、0.5%利多卡因、生理盐水o 装置和器材：计算机、BL420软件、动物用心电图导联线（末端带针）、大白鼠手术台、注射器、镊子、止血钳、棉球、针头（4号、7号）等 o 材料与方法o 称重、麻醉：取大白鼠一只，称重，腹腔注射水合氯醛300mg/kg（10%，0.3 ml/100g体重）麻醉o 固定：仰卧位固定于大白鼠手术台上o 记录正常心电图：四肢皮下插入心电图导联线（右前肢-白色线、左前肢-黄色线、左后肢-红色线、右后肢-黑色线），描记标准肢体导联心电图o 材料与方法o 心律失常模型制备：由大白鼠舌下静脉注射氯化钡4mg/kg（用时将10%氯化钡稀释成0.4%的溶液，0.1 ml/100g体重）。观察心电图，记录心律失常出现的时间o 材料与方法o 心律失常的治疗：n 对照组：心律失常明显时，静脉注射生理盐水0.1ml/100g体重，观察记录心律失常消失的时间。n 治疗组：心律失常明显时，缓慢舌下静脉注射利多卡因5mg/kg（0.5%，0.1 ml/100g体重），观察并描记心律失常消失的时间。比较两鼠心电图的变化，看给药后心律失常持续时间有无缩短。o 注意事项： o 根据经验，麻醉用水合氯醛，有助于心律失常模型的建立o 氯化钡诱发心律失常是双相性心动过速、室性早搏o 给药途径可以是股静脉、颈静脉、舌下静脉或尾静脉，多采用舌下静脉。舌下静脉注射时，速度要快，注射完后用棉球压迫片刻。o 结果o 正常心电图o 氯化钡诱发的心律失常o 利多卡因对心律失常的治疗作用o 讨论o 试分析氯化钡致心律失常的离子机制。n BaCl2 诱发心律失常的机制可能为增加心肌蒲氏纤维Na+内流，提高最大舒张期去极化速率，同时可使心肌细胞Ca2+内流而诱发迟后除极和触发活动而引起心律失常。n 此外，Ba2+是K+通道的开放阻断剂，从而使细胞内的正电位提高，与阈电位的差值减少，导致自律性提高，引发心律失常。 o 讨论o 利多卡因属哪类抗心律失常药物？抗心律失常的离子机制如何？主要临床应用有哪些？n 利多卡因为IB类抗心律失常药n 可降低细胞膜对Na+的通透性，使动作电位0相上升速度和幅度降低n 能减慢蒲氏纤维4相除极速率，改变兴奋阈值而降低自律性n 促使K+外流, 缩短蒲氏纤维动作电位时程和有效不应期，有效对抗BaCl2所致心律失常n 利多卡因主要用于各种室性心律失常，如室性早搏、室性心动过速、心室纤颤，是治疗急性心肌梗死致室性心律失常的首选药，亦用于强心苷中毒引起的室性心律失常。o 缺氧与耐缺氧o 前言o 乏氧性缺氧：PO2降低o 血液性缺氧：Hb质/量改变（贫血，CO中毒，亚硝酸盐中毒）o 循环性缺氧：血量减少（组织缺血/淤血）o 组织性缺氧： 氧利用障碍（氰化钾，叠氮钠中毒）o 前言o 本实验以小白鼠为实验对象，应用物理及化学方法复制不同类型的缺氧模型，观察各种缺氧情况下动物的活动状态，血液颜色及死亡情况，了解缺氧对呼吸、循环系统的影响。o 材料与方法o 动物 小白鼠，雌雄不拘，体重18-23g。o 药品与试剂 1%苯甲酸钠咖啡因注射液、0.1%复方冬眠灵注射液（每1ml含冬眠灵和非那根各1mg）、苦味酸、甲酸、浓硫酸、5%氢氧化钠、5%亚硝酸钠、1%美兰、0.05%叠氮钠。 o 材料与方法o 乏氧性缺氧 a. 0.1ml/10g剂量腹腔注射冬眠灵 放入一缺氧瓶（瓶中事先加入2粒钠石灰） 10分钟后盖紧瓶塞，放入04冷水，开始计时。 b. 0.1ml/kg剂量腹腔注射咖啡因 放入一缺氧瓶 5分钟后盖紧瓶塞，放入3840热水，开始计时。 o 材料与方法o CO中毒 a. 一氧化碳发生器（甲酸+浓硫酸） 小鼠放入广口瓶至死亡，心脏取血 b. 正常小鼠颈椎脱位法处死，心脏取血 c. 分别滴加等量氢氧化钠观察颜色变化 o 材料与方法o 亚硝酸亚中毒 a.腹腔注入5%亚硝酸钠0.1ml/10g 腹腔注射1%美兰0.2ml/10g。 b. 腹腔注入5%亚硝酸钠0.1ml/10g o 叠氮钠中毒 a.腹腔注射0.05%叠氮钠溶液（0.4ml/10g） o 材料与方法o 观察项目 n （1）观察药物注射后小鼠呼吸，运动情况。n （2）记录各组小鼠存活时间。n （3）观察小鼠口唇，耳廓颜色。n （4）尸检取血，对比血液颜色。o 结 果o 讨论o （1）小鼠注射氯丙嗪 o 冬眠灵抑制中枢神经系统加上寒冷环境，代谢率降低，单位时间耗氧量减少，所以同样量的氧，利用时间较长。o 临床意义：冬眠疗法o （2）小鼠注射咖啡因 o 咖啡因兴奋中枢神经系统加上高温环境，代谢率增加，单位时间耗氧量增加，所以同样量的氧，利用时间较短。o （3）小鼠CO中毒 o CO与Hb亲和力比氧大210倍，故在较低浓度即优先与氧合，使血液携氧能力显著下降。CO通过使红细胞中2,3-DPG降低及与Hb结合后的别构效应使氧离曲线左移，使Hb02释放氧能力下降。o 加入氢氧化钠后血液颜色改变的原因：HbCO性质稳定所以不变化，正常血液中的血红蛋白反应生成MHb，由于MHb中含三价铁离子故呈棕褐色或铁锈色。o （4）小鼠亚硝酸盐中毒+美兰 o 亚硝酸钠有微弱的氧化性可以将血液中的Hb氧化为MHb使血液携氧能力降低，同时可通过变构效应使氧离曲线左移释氧减少。o 美兰有微弱的还原性，可以将MHb还原为Hb使血液恢复携氧能力，故起到解毒的作用。o （5）小鼠注射叠氮钠中毒 o 因为叠氮钠为呼吸链阻断剂，直接阻断了氧的利用，此时无论血液中含氧量有多少细胞也不能利用，是一种最直接的缺氧方式，细胞立即能量障碍，小白鼠相对于其他类型的缺氧存活时间最短。阻断了氧的利用，所以血液中含氧量相对较多，Hb02颜色呈鲜红色。o 急性右心功能衰竭o 前言o 心力衰竭（heart failure）：在各种致病因素作用下，心脏的收缩和（或）舒张功能发生障碍，使心排出量下降（绝对或相对），以致不能满足机体代谢需要的病理生理过程。 o 前言o 心力衰竭的病因（一）心肌损伤1心肌病变：心肌炎、心肌病、心肌梗死等。2心肌代谢障碍：缺血缺氧、贫血、VitB1缺乏症等。（二）心肌负荷过度1、容量负荷过度（volume overload）2、压力负荷过度（pressure overload）（三）心室充盈障碍（四）心律失常o 前言o 本实验以家兔为实验对象，通过注射液体石蜡和快速输入生理盐水同时增加家兔心脏的前后负荷，造成家兔急性右心功能衰竭。o 观察急性右心功能衰竭时血流动力学的主要变化。o 通过对实验的观察分析，加深对心功能衰竭病理生理变化的理解。o 熟悉动物呼吸、血压和中心静脉压的测量及动物尸检的一般观察分法。 o 前言o 中心静脉压（CVP）n 指近右心房的胸腔大静脉或右心房的压力，取决于心脏和血管两方面的功能状态。当心脏的射血功能增强时，中心静脉压下降；反之，则上升；当静脉回流量增加时，中心静脉压上升；反之，则下降。n 用静脉导管由颈外静脉或股静脉插至右心房附近，外端连水检压计，可直接测得中心静脉压，以了解心脏与血管的功能。o 材料与方法o 动物：家兔，雌雄不拘，体重2.5kg左右。 o 药品与试剂：20乌拉坦溶液、1%普鲁卡因、0.3%肝素生理盐水、液体石蜡。 o 装置和器材：兔手术台、注射器（lml、l0ml、50ml），听诊器、BL-420生理信号采集与处理系统、压力换能器、气管插管、中心静脉压测量装置、输液装置、手术器械。 o 材料与方法o 手术 n 称重、麻醉、固定、备皮n 切开皮肤、分离皮下组织n 暴露气管n 分离左侧颈总动脉、插管，测血压n 分离右侧颈外静脉、插管，测中心静脉压o 材料与方法o 观察指标n 呼吸（频率、幅度、呼吸音的性质）n 血压n 中心静脉压n 心率、心音强度n 肝-颈静脉回流征o 材料与方法o 右心衰竭模型的复制 n 自左耳缘静脉缓慢（约3-5min）注入37液体石蜡（0.5ml/kg），观察各项指标的变化。 n 稳定后，以每分钟约5ml/kg的速度快速输入生理盐水，也可用50ml的注射器抽取生理盐水从静脉插管推入。 n 每输50ml液体记录一次数值，直至动物死亡为止。 n 输液过程中注意肺部听诊有无湿性啰音。o 材料与方法o 尸检 n 挤压胸壁，观察气管内有无分泌物溢出，并注意其性状。 n 剖开腹腔，观察有无腹水（颜色、量），肝脏的颜色、形状、体积及包膜的张力，肠系膜血管及肠管的改变。n 打开胸腔，观察有无胸水、肺脏的颜色、肺切面的改变，注意有无液体石蜡滴及泡沫样液体溢出。观察有无心包积液，心脏体积，及各心腔的变化。n 最后剪破腔静脉，观察肝脏和心脏的改变。 o 材料与方法o 注意事项 n 静脉壁分离时须小心，谨防撕裂，动脉插管时，应注意不要让管尖扎破血管壁。n 注射液体石蜡时注意剂量及速度，一定要慢。在注射过程中注意血压及CVP的变化，如果血压降低或CVP升高较明显时应立即停止注射。n 测量装置中不能有气泡，若插管中回流入较多血液时，应尽快推出，否则会影响测定结果。n 若输液超过200ml/kg，而CVP没有明显升高时，可再补充注射液体石蜡。o 讨论n 本实验是如何造成心力衰竭的？n 本实验通过注射液体石蜡和快速输入生理盐水同时增加家兔心脏的前后负荷，使家兔在短时间内发生心衰。n 右心衰竭对机体的影响是什么？在本实验中可观察到什么？n 右心衰主要引起体循环淤血，整个体循环的脏器也相应的淤血肿大（肝、脾、肠系膜等），由于流体静压的升高会表现出胸水、腹水、心包积液等表现。n 本实验有无肺水肿的发生？机制是什么？ n 本实验有肺水肿的表现。通常左心衰会出现肺循环淤血，从而出现肺水肿和粉红色泡沫样痰，右心衰表现为体循环淤血，一般不会出现肺水肿的表现，但是本实验中，我们通过耳缘静脉注射液体石蜡阻塞了肺循环增加了肺循环的流体静压，同时石蜡小液滴会破坏呼吸膜增加了其通透性，因而本实验中虽造成的是右心衰但也出现了肺淤血的表现。o 心力衰竭临床表现的病理生理基础 o 肺循环淤血 呼吸困难：1、劳力性呼吸困难 2、端坐呼吸 3、夜间阵发性呼吸困难 肺水肿： 发病机制 1、毛细血管压升高 2、毛细血管通透性加大o 心力衰竭临床表现的病理生理基础 o 体循环淤血 o 心力衰竭临床表现的病理生理基础 q 心输出量不足 o 右心衰竭的临床表现o 体循环淤血为主的综合征o 症状： 食欲不振、 恶心、呕吐、 腹胀、腹痛、 尿少、夜尿、 体重增加o 右心衰竭体征o 颈静脉充盈或怒张o 肝肿大、压痛o 水肿、胸水、腹水o 右心舒张期奔马律 o 右心吹风样收缩期杂音 (胸骨左3 - 4肋间、剑下)o 严重者紫绀o 休克及抗休克药物治疗o 前言o 休克是机体在严重失血失液、感染、创伤等强烈致病因素作用下，有效循环血量急剧减少、组织血液灌流严重不足，以致各重要生命器官和细胞功能代谢障碍及结构损害的全身性病理过程。 o 前言o 根据病因休克可分为:o 失血性休克o 创伤性休克o 烧伤性休克o 感染性休克o 心源性休克o 过敏性休克o 神经源性休克o 前言o 失血超过总血量的20就会发生失血性休克。早期表现为血压的轻度升高，脉压差降低，中心静脉压降低，尿量明显减少；o 此时若不及时进行抢救将进入第二期（失代偿期），主要表现为淤血，血压下降、尿量进一步减少、心功能开始下降，有酸中毒的表现，但及时抢救可能缓解；o 再进一步发展将进入第三期（衰竭期或难治阶段），此时整个微循环呈淤泥状，动脉血乳酸含量进一步升高，微循环缺氧极度严重，并且对各种药物的反应性都变得极其微弱。 o 前言o 本实验通过放血，造成家兔失血性休克，观察休克时各期的指标变化，加深对休克病理生理变化的理解及失血性休克治疗的一些基本原则。o 材料与方法o 动物：体重2.5kg左右健康家兔o 试剂和药品：20乌拉坦溶液、1%普鲁卡因、0.3%肝素生理盐水、生理盐水、0.002%肾上腺素、0.002%去甲肾上腺素、0.1%普萘洛尔、2.5%妥拉唑啉、0.1%多巴胺。o 装置和器材：家兔手术台、注射器（lml、l0ml、50ml）、BL-420生理信号采集与处理系统、血压换能器一套、气管插管、中心静脉压测量装置、输液装置、家兔手术器械。 o 材料与方法实验步骤o 麻醉固定o 颈部手术：分离气管、左颈总A及右颈外Vo 插管：气管插管；左侧颈总A插管；右侧颈外V插管。o 观察指标：血压、心率、呼吸（频率、幅度）、中心静脉压。o 材料与方法o 复制休克模型 o 用内壁沾有少许肝素生理盐水的50m1注射器，自颈外V插管三