毛豆上的腈菌唑残留量的气相色谱法测定（.doc

4毛豆上的腈菌唑残留量的气相色谱法测定 基金项目: 漳州市科技计划项目(Z03028)作者简介: 陈丽萍(1972),女,福建龙岩人,农艺师, 主要研究方向:农残分析陈丽萍1 林志平2（1福建省漳州市农业检验监测中心，2漳州市农业检疫监测中心 363000）摘要：采用气相色谱法定量分析腈菌唑在毛豆上的微量残留量，样品经乙腈提取，液液分配，氧化铝柱层析净化后，以GC-ECD测定，DB-1701毛细管柱、氮气为载气，柱温150C 20 C / min 260C（10min），气化室温度数240C，检测器温度300C，外标法定量该方法快速、准确。在 0.05mg/L2.0mg/L范围内线性相关系数r2=0.9998。平均回收率91.1%99.0%，变异系数1.22%2.94%, 最小检测量 110-12 g,最低检出浓度 5.010-4mg/L。关键词：腈菌唑；残留；毛豆；气相色谱法腈菌唑（Myclobutanil）是罗姆哈斯公司1982年开发的一种广谱杀菌剂，又名叶斑清，对毛豆的白粉病，叶斑病，锈病，炭疽病等多种病害有很好的效果1，在漳州地区普遍使用。毛豆又是漳州地区农产品出口的重要品种之一，而日本和欧盟对食品中腈菌唑的残留都有限量指标。虽然夏昕等人曾报导过腈菌唑在小麦中残留量的分析技术2，但迄今为止，腈菌唑在果蔬食品中残留量的分析技术尚未见相关的报导。为了解决好漳州地区毛豆腈菌唑残留量检测技术问题，为此，笔者参考了有关资料35，对毛豆腈菌唑残留量检测技术方法进行了研究，现将结果报导如下。1 实验部分1.1 仪器HP-6890气相色谱仪，电子捕获检测器（ECD），DB-1701( 30m0.25mm0.25um)毛细管色谱柱，高速组织碎机，旋转蒸发器。1.2 试剂中性氧化铝(550C灼烧4.0h后备用，用前130C烘烤1h，加3%脱活)，无水硫酸钠，氯化钠，石油醚(60C-90C，色谱纯)、乙腈，丙酮，正已烷,(均为色谱纯)，腈菌唑标准品99.5%。1.3 色谱条件氮气为载气，柱箱温度150C 20C /min 260C（10min）汽化温度240C，检测器温度300C，恒温1.6mL/min，尾吹总量60mL/min，进样量1.0uL，相对保留时间8.02min。1.4 测定步骤1.4.1标准溶溶液配制准确称取腈菌唑0.0536g，用少量丙酮溶解，再用正已烷稀释定容至100mL，得533mg/L标样，备用。将上标准溶液稀释成0.001mg/L，0.01mg/L，0.05mg/L，0.1mg/L，0.5mg/L，1.0mg/L，2.0mg/L待测。1.4.2提取称取20g新鲜切碎的样品，放入250mL碘量瓶中，加60mL乙腈，均浆，静置10min，用布氏漏斗减压抽滤，滤液倒入100mL量筒中，加入10g20g氯化钠，盖上，用力振荡，静置，分层，取30mL上层清液，浓缩至干，用正已烷定容，待净化。1.4.3净化本实验比较了中性氧化铝和弗罗里硅土两种填料的柱子净化效果。柱层析条件如下：(1) 弗罗里硅土层析柱子：在内径为1.0cm，长为30cm的层析柱中，上下两端加无水硫酸钠1.5cm，中间加4.0克弗罗里硅土。(2)中性氧化铝柱：在内径为1.0cm，长为30cm的层析柱中，上下两端加无水硫酸钠1.5cm，中间加8.0克中性氧化铝。两种柱子均用石油醚：丙酮(9：1)混合液20mL预淋，再用石油醚：丙酮(6：4)混合液80mL多次淋洗，浓缩近干，用正己烷定容5.0mL，待测。2 结果与讨论2.1 测定方法和条件的确定吸附剂的选择： 在1.0cm 30cm的柱子中分别装入弗罗里硅土，中性氧化铝吸附剂，用同一种淋洗剂淋洗，比较不同的净化效果，结果发现，两种净化效果都不错，弗罗里硅土虽然时间较短，但回收率只有32.3%，中性氧化铝的回收率达到90%以上。淋洗体积的选择：通过绘制淋洗曲线确定最佳淋洗体积(图1)，以10mL/次接收淋洗液，结果发现， 第一个馏分洗脱量占总量的91.3%，第二个馏分占总量的7.4%，第三个馏分占总量的1.1%，第四个馏分占总量的0.4%。前三个馏分总淋洗体积达30mL，淋洗量占总量的99.8%，基本可以完全洗脱分析物，为了保证淋洗充分，本实验采用50mL淋洗液。 图1 腈菌唑淋洗体积的确定2.2 腈菌唑标准曲线测定以腈菌唑标准溶液配成0.05mg/L，0.1mg/L，0.5mg/L，1.0mg/L，2.0mg/L等5种浓度，在色谱条件相同的条件下，进行相同体积的进样。以进样浓度(mg/L)为横坐标，峰面积为纵坐标，作图可得一直线。绘最小二乘法计算，得腈菌唑GC-ECD法测定标准曲线回归方程y=23278.4X+396.0，相关系数平方为r2=0.9998。腈菌唑浓度在0.05mg/L2.0mg/L范围内与峰面积有良好的线性相关性（图2）。图2 腈菌唑GC-ECD法测定峰面积与进样量线性相关性2.3 腈菌唑样本测定按照“1.3的色谱条件，将稀释后的标样和制备好的试样直接进样，采用外标法（峰面积）做标准曲线定量。标准溶液和样品色谱图见图3和图4。腈菌唑在色谱上的保留时间为8min。将样品检测结果换算出浓度标出， 图1 腈菌唑标样GC-ECD图 图2 腈菌唑在毛豆中残留GC-ECD图2.3方法精确度分析称空白样品，分别添加腈菌唑标准品，按上述处理方法，提取，净化和色谱分析，测定回收率，腈菌唑在毛豆上的添加水平在0.0050mg/kg0.5mg/kg范围内平均回收率为91.1%99.0%, 变异系数为1.22%2.94%, 符合农药残留分析标准要求。表1 腈菌唑在毛豆中的添加回收率测定结果变异系数(%)添加水平(mg/kg)添加量(mL) 回收率(%) 1 2 3 平均0.1 0.0050 92.3 85.4 95.6 91.1 2.94 1.0 0.0500 96.4 98.5 102.2 99.0 1.50 10.0 0.5000 100.8 98.2 95.7 98.2 1.22 3 小结从本实验方法结果可以显示：毛豆中腈菌唑残留量的检测，供检样品经乙腈提取，液液分配，氧化铝柱层析净化后，采用GC-ECD测定技术方法，具有方法快速、准确、重复性好等特征，同时还具备高灵敏度的特征，对腈菌唑最小检出量可达1.010-12g，最低检出浓度可达5.010-4mg/kg，即各项技术指标均符合农药残留量分析要求。（小结色谱测定的结论，样品测定的结果，结合前人研究进行讨论）参考文献：1张敏恒.新编农药商品手册22夏昕,吴剑英,等. 腈菌唑在小麦，土壤上残留与降解的动态研究J. 沈阳:沈阳出版社,农药,1996,35(10):29-313包素萍,洪露,等. 腈菌唑的气相色谱分析J. 农药,2000,39(3):21-224农业部农药检定所.农药残留