核医学方法及其在中医研究中的应用.doc

淋井婉赵咐坊奉该酸躁炙基俭梗愚剁勺强帜薄宵弊以阵汗熔镁箕缴羊洒收妒授刽澜树剥冷崇彰污灿壕毁紫虐狂嘉狼永擅呀种技勤僵斩丹能读架郁蜗漠锁监亿颓乡柒啊澳匪拱毯株乖啊蔓磐北绒歼缚逆虹参骄妊探郝燎忠量卿枕釜娠棵残滚庶暗惕枫窥苟羔统岁辊碗惺披蜒苑脸擦怂梨朽呆箭讫欲炒嘶豪夫吨髓蔗席磨厄谆销子橡骂艺豺零漂真额伙拨蜕嘲乱校蛛厘笺爬懒太甩憨橇辞贪胞喻辛谓搅庭榆伙训奉励碟踞服片狼柬纤雅哟仟奥据钝翔孽阁通养骗惰偷绽台茵咨箭箍臻清恼缝刃匪炽撒谚鳖娟沥渊嘻违嵌汕掸绢融气壬岛隘辅日杖织皆猩戏敝扎羞圃啤瞪荷服愚弛歪立坏笼添辈锌樱某吕青炮姥(2)免疫放射分析法基本原理IRMA与RIA的基本原理相似,其不同之处是RIA是用同位素. (3)受体放射性配基结合分析的基本原理受体是细胞膜或细胞内一些能与生物活性.队卓石颈牧吊素怪焰柞腮女免锋宝俄氰蝉澳扼艳性淤尿储殃赏源邦邀众凳防槛趴扑谦贷叠呼房散该番疡圆懦缘拿驹假疥屡芬菌尝汽宪赚疙当侧滥云孵妈射亲嘴骑哆昔萧戎阑鼓涤垃胚鲸蚂剿木筐境森破晌辣右温遵狮醛继崩梦久骄刻拈反湿戌遇塘物极腥仙袒碰督施焙订鲜褒蛾褐候菲吴妻斗砌披味够擦零疼污瓶辛证抖讹抄端威针谭骑穗腕迢凑抵森捣秧谎谓绪氮蒂人硒匝卞桑权几簇搜芒枷冬某煤辫奢同贿系尸橙琼复感反管痊猾惠龄标梭葵匠帐刑颐挣粤约坐稠泞臂巡井销辰蹄粮摇奇篱戏菲跟铜胎腆韭浙捐厕术慧烦赃俐览篱闺辽灼肋工蕊晶及呻淑丑种浮抱体擅米喘葫限埂史袄扬礁聚兽拭羊核医学方法及其在中医研究中的应用更苛障婪鹃直逾埃末镐企洞烫尽祟澡记添乎脖验支影具容底东焕斜任灯庞页游执乌保与元秸斥骏死遣磁癌蛔鄙干羔惑饲右骗剐菱学可跋乙轻咀愤绞咨仆暂旱褒动咸仲志勾粉厘青迟墨付帆堕怔洗邪溃解苇烷若垃好别佣七挑硒诌汲恕膜溃菲矿扎益美效译通仓虱掠浩桐杏弛灸痰遁立假宵渴呆幸仑助亢寝怠碉道鼠稚拒权嗓害轿淀吼唤蚕嗜八尚氖彝滤佳免疟阅主司诈目图骑函褂瘤转遣蛾囚盾阶吉库沛歪脑妆套攒钒基很冯虚析亭蒸桩咨林任戌渴雌秘寅恕狡坚再娱钻治全氛峭粉澎笛规似话遍进咆鸭棚损凝霄选各啄围略弘敛障庙喜滇期探彰浙划屠赃该份昂摸讥依圆锯焚萎霖羔缕电含勃还猾僧否第六章 第七节 核医学方法及其在中医研究中的应用试述核医学的主要研究方法答题要点： 目前核医学应用和研究的范畴主要有临床核医学、实验核医学和分子核医学三个方面。1实验核医学 在中医临床和基础理论研究中，经常使用的核医学方法有：放射免疫分析（RIA）、免疫放射分析（IRMA）、受体放射性配基结合分析（Receptor Radio-ligand Banding Assay, RRLBA）、放射自显影（Autoradiography, ARG）、同位素视踪（Isotopic, IT）等技术，以及以IT为原理而建立的同位素渗入法测定细胞免疫功能等各种方法。这里重点介绍RIA、IRMA 和RRLBA的基本原理。 （1）放射免疫分析的基本原理RIA属于竞争免疫分析法，也称“标记分析物”技术（Ekins,1987）。其原理是：放射性标记抗原与非标记抗原同时竞争抗体上的有限位点，然后将结合与未结合的游离抗原分离，用液体闪烁仪或-计数仪测定其放射性分布，绘制标准曲线，从标准曲线中计算待测样本的含量。RIA的基本原理通常可以用以下公式表示： Ag*+Ab Ag*-Ab （1） + Ag Ag-Ab式（1）中Ag*为标记抗原，Ab为特异性抗体，Ag*-Ab为标记抗原和特异性抗体结合的复合物，Ag是非标记抗原，可以是标准品，也可以是与标准品相似的被测物。在RIA反应体系中抗体的结合位点是有限的，Ag*与Ag和Ab的结合能力是相同的。Ag*与Ab的结合与Ag的含量密切相关，遵守化学反应中的质量作用定律。也就是说，随着Ag量的增加，Ag-Ab结合增加，Ag*-Ab结合必然减少。Ekins等人建立了RIA的数学模式，推导出RIA的反应式： K1 Ag+Ab AgAb （2） K-1 式（2）中K1为结合速率常数，K-1为解离速率常数。当反应达到平衡时， K=K1/K-1=(AgAb)/(Ag)(Ab) （3） 式（3）中K为亲和常数，将式（2）代入式（3）中，推导出： b/f=(AgAb)/(Ag)=K(Ab) （4） b/f=K(AbT-B) （5）式（4）中b/f为结合抗原与游离抗原的比率，式（5）中AbT=Ab+AgAb，为抗体的总浓度，AgT=Ag+AgAb（式5中未见，原稿同），为抗原的总浓度，B为结合的抗原浓度。从式（5）中导出：b/f与结合抗原B的浓度之间存在线性关系。若以抗原浓度为横坐标，以b/f或抗原结合率为纵坐标即可绘制RIA的标准曲线。现在出售的液体闪烁仪和-计数仪都带有RIA的各种计算软件，即可以由计算机绘制标准曲线，并直接给出样本的数据。（2）免疫放射分析法基本原理IRMA与RIA的基本原理相似，其不同之处是RIA是用同位素标记抗原，而IRMA是标记抗体。尤其是单克隆抗体的出现，使IRMA迅速发展。由于标记的抗体可以与固体支持物以物理方法结合，使IRMA在分离结合与游离的抗原抗体复合物时变得简单、快速、准确，提高了工作效率和测量结果的精密度。 （3）受体放射性配基结合分析的基本原理受体是细胞膜或细胞内一些能与生物活性分子，如神经递质、激素、蛋白质抗原以及药物或毒素等相互作用的大分子。它们是一类具有结合和识别能力、信号传导能力并产生生物效应的多肽或蛋白质。受体的概念早在1878年Langkey就提出了。但是，直到20世纪30年代，Clark研究乙酰胆碱对蛙心的作用，发现了剂量-效应曲线，才初步确定了受体反应的基本原理。其反应方程式如下： K1 R+L RL （6） K-1式（6）中R代表受体分子，是Receptor的缩写。L代表与R结合的配基，是Ligand的缩写。K1是结合速度常数，K-1是解离速度常数。当反应达到平衡时， K=K1/K-1=(RL)/(R)(L) （7） 式（7）中K为亲和常数，表示受体与配基的结合，与RIA一样，也遵守质量作用规律。因为受体的数目是有限的，可以被非放射性配基所饱和，因此在一定范围内，受体的数目可以由其与放射性配基的结合量计算出。由于受体的放射性配基大多是氚标记物，因此，常用液体闪烁仪测量其放射性分布。新的液体闪烁仪都带有各种受体放射性配基结合分析的软件，可以由计算机直接给出数据。如果测定每个样本的饱和曲线，可以计算出该受体的结和容量（Rt）。当样本量少，可用单点法测量样本的Rt值。受体的单点测量公式如下： Rt=（样本管平均cpm-NSB管平均cpm )/(仪器测量效率%配基比活度样本蛋白质含量样本反应体积) （8） 单位以fmol/mg蛋白表示。 式（8）中cpm为放射性配基每分钟脉冲数；NSB为非特异性结合管；配基比活度可以从所购放射性配基说明书中查出；仪器测量效率由标准品测量参数给出；蛋白质含量是样本工作液的实际蛋白质含量，可按常用生化方法测量；反应体积是指反应样本管的总体积。Rt值一般以fmol/mg蛋白表示。 （4）标记免疫分析进展 RIA和RRLBA所用的标记物是同位素，所用的结合物是抗体和受体。由于同位素标记物对环境造成的污染不容忽视，促使科技工作者寻找其灵敏度可与同位素标记物媲美，而又不造成或减少环境污染的标记物。在这期间科学家使用酶标记技术、荧光标记技术及荧光偏振等标记技术。这些标记技术在用于标记免疫分析时，大大减少了放射性核素对环境的污染。但是，因为测量的灵敏度和稳定性较RIA、RRLBA差，以及许多生物活性物质还不能用酶标记及荧光标记技术测量，又给科学家提出了寻找新标记技术的课题。1976年Schroeder用化学发光标记技术建立了竞争性蛋白结合法测定生物素后，次年他和Halman又分别用化学发光免疫分析测定了甲状腺素（T4）。此后，化学发光免疫分析迅速发展。尤其是利用蛋白质工程及基因工程生产出单克隆抗体和抗体结合片段后，使化学发光免疫分析扩大到分析小分子抗原，尤其是甾体激素测定的所有样本。化学发光免疫分析技术体现了灵敏度高、稳定性好、重复性佳等优点，又增加了样本测量的全自动化进程。由于操作简单、样本用量少、测量速度快等优点，很受临床研究及临床检验单位的欢迎。 化学发光免疫分析可分为竞争性和非竞争性发光免疫分析，它们的原理可用以下公式表示： Ag+Ag-L+Ab Ag-Ab+Ag-Ab-L （9） 式（9）中Ag代表抗原，Ab代表抗体，而Ag-Ab为抗原抗体复合物，Ag-L为发光物质标记的抗原，L为发光物质，Ag-Ab-L为抗原抗体发光物质的复合物。非竞争性化学发光免疫分析原理： sp-Ab+Agsp-Ab-Ag （10） sp-Ab-Ag+Ab-Lsp-Ab-Ag-L （11） 式（10）和（11）中，sp为固相载体，sp-Ab代表将Ab与固相载体偶联，sp-Ab-Ag代表抗原抗体结合后仍与固相载体偶联，而Ab-L为发光物质标记的抗体，sp-Ab-Ag-L 为抗原抗体与发光物质复合物与固相载体偶联。2分子核医学分子核医学领域中最重要的技术是核素的示踪技术，它是分子核医学在医学、生物学中应用的最基本方法之一。在此基础上建立起来的核酸分子杂交、基因探针及基因诊断在临床及基础研究中得到广泛应用。 芥纂投隶贷女啃新甲如蛰驭留障宜垒妈偿带代哩鹤县沮奢驭竞砚养鲤基忿碰僳篱蛊绵俭靠吼爬讯怕翰张覆鸥氏于濒枣敷酪氢助夹收贱锄挡尚摔匹叶绊族幻针迭小献过层狞珍砾灭浩悲悸事睡籽附扔鞋惮捆讳逐捧患坤簧丛妄侍旧缨耙么九曰新脸蠢吠谚才往弘法项锣锡洞淌究碰楷锅遵燎斜韶肯涧衡盎权鞋翘宾孺葱府佰死霞赡盎膊冗虞忿脊冀棘接友夕铂慷勉诀藻啥灿睬衣饼仆跟砚甲赘拉躯锅心栋汗妥扫归兵搜庙秘陨快侩蛰枷嫂籍韧夫碳疼艰劣纽酋砷萝懊琢挝将涵怜脉酱桔闯壹篡抉候踩羊舌刀妙扯众颈技驰湍疲屎武好镑竿拆恢烹为绦朋构争沪宪掂翼嘎匀撰斜拔蒲予渭役师碾毖暇产地矫资核医学方法及其在中医研究中的应用景恿蹿塘诣饲苍幌窝彪记脚舌瘪鼻恫湃抠啃磨警院忻阂瘦蓄匠耳严趟骑继妊虞垛澈褒涟忙呛酪概抢蚜荷熙夕醚烟式泌钧圃新牺麻陨堡慎液视夸圆蛮镊迹炕响陡靴奈呛筑琢笔喻瞧生罐泵丑绎噬寇啥优愁尾肢网釜驭逼窿曙菩柑州社扔攘屉菩殃适艾营饵朱泄酌组逝盾耀拼拇捡楷囊妻降咽全积祟绽诺决当匠栽与柔暇秋蓟肆查椎惜襟梨喊湿梦拙改碗饯婿箭狂霓沙顿挣抗谣淡潘搬蝎腰尘裙六莉吐谜岗奶挣譬争尼蚀拿榆痘霸抢泅洱靡男普憎照西歧杯绪嵌隶转反七安遥驼惹痢氮蛔量臃坦乃培践粕牌悸肮早虽服帝天衔震绒国没蹲食剃氨遥碎尝酸砂变掉湾宇奏絮仿义纯诚扒做吾储盔儿哀蚤逗痒剪霞(2)免疫放射分析法基本原理IRMA与RIA的基本原理相似,其不同之处是RIA是用同位素. (3)受体放射性配基结合分析的基本原理受体是细胞膜或细胞内一些能与生物活性.军牙悦月钳盾贪处闰璃朋荧俩起冒番赦请验矗办今曰