中国药品检验标准操作规范2010年版残留溶剂.doc

检 验 操 作 程 序文件编号：TP-0815页号：1/8残留溶剂测定标准操作程序版本号：生效日期：文件内容：1、主题内容和适用范围22、引用标准23、简介24、仪器与用器25、供试品溶液和对照品溶液36、系统适应性试验37、操作程序38、计算法49、注意事项410、应用611、更改信息8颁发部门：质量管理部。分发清单： QC办公室、中药室、化学室、稳定性考察室。编写人审核人审核人审核人批准人部门质量部QC质量部QC质量部QC质量部QA质量副总姓名签名日期1 主题内容和适用范围本程序规定了残留溶剂测定的检查方法和注意事项，使其规范化、标准化，并描述了更改信息。本程序适用于药品中残留溶剂的限量检查。2 引用标准中国药典2010年版二部附录 P“残留溶剂测定法”、中国药品检验标准操作规范2010年版P229“残留溶剂测定法”。3 简介药物中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用过，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。药物中常见的残留溶剂及限度参照2010年版中国药典（表1）的规定，除另有规定外，第一、第二、第三类溶剂的残留量应符合其规定；对其他溶剂，应根据生产工艺的特点，制定相应的限度，使其符合产品质量标准的要求。本标准操作程序照气相色谱法（2010版药典附录 E）测定。4 仪器与用具4.1气相色谱仪：带FID检测器，顶空进样器。4.2计算机：安装工作站软件。4.3色谱柱4.3.1毛细管柱除另有规定外，极性相近的同类色谱柱之间可以互相使用。4.3.1.1非极性色谱柱固定液为100%的二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。4.3.1.2极性色谱柱固定液为聚乙二醇（PEG-20M）的毛细管柱。4.3.1.3中级性色谱柱固定液为（35%）二苯基-（65%）二甲基聚硅氧烷，（50%）二苯基-（50%）二甲基聚硅氧烷，（35%）二苯基-（65%）二甲基亚芳基聚硅氧烷，（14%）氰丙基苯基-（86%）二甲基聚硅氧烷，（6%）氰丙基苯基-（94%）二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。4.3.1.4弱极性色谱柱固定液为（5%）二苯基-（95%）二甲基聚硅氧烷，（5%）二苯基-（95%）二甲基亚芳基氧烷共聚物的毛细管柱。4.3.2填充柱以粒径为0.250.18mm的乙二烯苯-乙基乙烯苯型高分子多空小球或其他适宜的填料作为固定相。5 供试品溶液和对照品溶液5.1供试品溶液的制备5.1.1顶空进样 除另有规定外，精密称取供试品0.11g；通常以水为溶剂；对于非水溶性药物，可采用N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或其他适宜溶剂；根据供试品和待测溶剂的溶解度，选择适宜的溶剂且应不干扰待测溶剂的测定。根据品种正文中残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，浓度满足系统定量测定的需要。5.1.2溶液直接进样 精密称取供试品适量，用水或合适的有机溶剂使溶解；根据品种正文中残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，其浓度应满足系统定量测定的需要。5.2对照品溶液的制备 精密称取各品种项下规定检查的有机溶剂适量，采用与制备供试品溶液相同的方法和溶剂制备对照品溶液。若为限度检查，根据残留溶剂的限度规定确定对照品溶液的浓度；若为定量测定，为保证定量结果的准确性，应根据供试品残留溶剂的实际残留量确定对照品溶液的浓度；通常对照品溶液的色谱峰面积与供试品溶液中对应的残留溶剂的色谱峰面积以不超过2倍为宜。必要时，应重新调整供试品溶液和对照品溶液的浓度。6 系统适用性试验6.1用待测物的色谱峰计算，毛细管色谱柱的理论板数均应大于5000；填充柱法的理论板数一般应大于1000。6.2色谱图中，待测物色谱峰与相邻的色谱峰的分离度应大于1.5。6.3以内标法测定时，对照品溶液连续进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的相对标准误差（RSD）应不大于5%；若以外标法测定，所得待测物峰面积的相对标准误差（RSD）应不大于10%。7 操作程序7.1第一法 毛细管柱顶空进样等温法7.1.1当需要检查的有机溶剂数量不多，并极性差异较小时，可采用此法。色谱条件 柱温应根据待测溶剂及配制供试液的溶剂的沸点决定。为避免溶剂在柱内凝结，提高保留的重现性，柱温不宜太低，通常在40100间适当选定；常以氮气为载气，线速度为35cm/s；以水为溶剂时顶空瓶加热温度为7085，顶空瓶加热时间3060分钟；进样口温度一般为150200；如采用FID检测器，温度为250。7.1.2测定法 取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。由于静态顶空进样时，抽取的是处于气态平衡的顶空气，所以每个顶空瓶只能去取样一次；供试品必须放入2（n）个顶空瓶中，以保证2（n）次进样的要求。7.2第二法 毛细管柱顶空瓶进样系统程序升温法7.2.1当需要检查的有机溶剂数量较多并极性差异大时，可采用此法。色谱条件如为非极性色谱系统，柱温一般先在30维持7分钟，再以8/min的速度升至120，维持15分钟；如为极性色谱系统，柱温一般先在60维持6分钟；再以8/min的升温速率升至100，维持20分钟；以氮气为载气，流速为2.0ml/min；以水为溶剂时顶空瓶平衡温度7085,顶空瓶平衡时间3060分钟；进样口温度为200；如采用FID检测器，温度为250。7.2.2具体到某个药品的残留溶剂检查时，可根据该品种项下的残留溶剂组成调整升温程序。7.2.3测定法 取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。7.3 第三法 溶液直接进样法7.3.1主要适用于企业对生产工艺中特定的残留溶剂的控制，可采用填充柱，亦可采用适宜极性的毛细管柱。7.3.2不应采用酸或碱作为溶剂。7.3.3测定法 取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样23次，每次12l，测定待测峰的峰面积。8 计算法8.1限度检查 除另有规定外，按各品种项下规定的供试溶液测定。以内标法测定时，供试品溶液所得被测溶剂面积与内标峰面积之比不得大于对照品溶液的相应比值。以外标法测定时，供试品溶液所得被测溶剂峰面积不得大于对照品溶液的相应峰面积。以标准加入法测定时，供试品溶液所得被测溶剂峰面积与内标峰面积之比不得大于对照品溶液相应色谱峰面积在扣除供试品溶液峰面积后与内标峰面积的比值。8.2定量测定 一般可按内标法或外标法计算各残留溶剂的量；如存在基质效应，则应采用标准加入法计算残留溶剂的量。9 注意事项9.1顶空条件的选择9.1.1应根据供试品残留溶剂的沸点选择顶空温度。对沸点较高的残留溶剂，通常选择较高的顶空平衡温度；但此时应兼顾供试品的热分解特性，尽量避免供试品产生的挥发性热分解产物对测定的干扰。9.1.2顶空平衡时间一般为3045分钟，以保证供试品溶液的气液两相有足够的时间达到平衡。顶空时间通常不宜过长，如超过60分钟，可能引起顶空瓶的气密性变差，导致定量准确性的降低。9.1.3对于有传输管的顶空进样器，传输管温度应适当，通常比进样针温度高10左右。9.1.4对照品溶液与供试品溶液必须使用相同的顶空条件。9.2定量方法的验证 当采用顶空色谱系统测定时，供试品与对照品处于不完全相同的基质中，故应考虑气液平衡过程中的基质效应。由于标准加入法可以消除供试品溶液基质与对照品溶液基质不同所致的基质效应的影响，故通常采用标准加入法验证定量方法的准确性。当标准加入法与其他定量方法的结果不一致时，应以标准加入法的结果为准。9.3干扰峰的排除 供试品中的未知杂质或其挥发性热降解物易对残留溶剂的测定产生干扰。干扰作用包括在测定的色谱系统中未知杂质或其挥发性热降解物与待测物的保留值相同（共出峰）；或热降解产物与待测物的结构相同（如甲氧基热裂解产生甲醇）。当测定的有机溶剂残留量超出限度，但未能确定供试品中是否有未知杂质或其挥发性热降解物对测定有干扰作用时，应通过试验排除干扰作用的存在。对第一类干扰作用，通常采用在另一种极性相反的色谱柱系统中对相同样品再进行测定，比较不同色谱系统中测定的结果。如二者结果一致，则可以排除测定中有共出峰的干扰；如二者结果不一致，则表明测定中有共出峰的干扰。对第二类干扰作用，通常要通过测定已知不含该溶剂的对照样品来加以判断。9.4含氮碱性化合物的测定 普通气相色谱的不锈钢管路、进样器的衬管等对有机胺等含氮碱性化合物具有较强的吸附作用，致使其检出灵敏度降低。当采用顶空进行系统测定此类化合物时，应采用惰性的硅钢材料或镍刚材料管路；或采用溶液直接进样法测定。供试品溶液应不呈酸性，以免待测物与酸反应后不易气化。通常采用弱极性的色谱柱或填料经碱处理过的色谱柱分析含氮碱性化合物，如果采用胺分析专用柱进行分析，效果更好。对不宜采用气相色谱法测定的含氮碱性化合物，可采用其他方法如离子色谱法等测定。9.5检测器的选择 对含卤素元素的残留溶剂如氯仿等，采用ECD检测器，易得到高的灵敏度。9.6由于不同的实验室在测定同一药品时可能采用了不同的试验方法，当测定结果处于合格不合格边缘时，以采用内标法及标准加入法为准。10 应用10.1已知样品中残留溶剂的种类10.1.1测定方法的初步选择根据待测药品的结构和溶解性，选择合适的顶空条件和溶剂；根据质量标准或工艺流程确定待检测样品中的残留溶剂种类，在表2、表3中选定合适的色谱柱系统以达到最好的分离，并选择一种与待测残留溶剂无干扰的内标。10.1.2测定方法的考察与优化10.1.2.1用所选溶剂配制对照品溶液并加入内标，并在所选色谱柱系统考察是否能够达到分离要求，内标是否合适。如果不能达到要求，根据情况进行适当的调整，如调整柱温、流速等或选用其他色谱柱系统。10.1.2.2精密称取样品0.2g置20ml顶空瓶中，加溶剂2.0ml溶解，加盖密封作为供试品溶液。在所确定的色谱条件下测定，考察供试品中待测残留溶剂是否达到分离要求，内标出峰处是否有干扰。如果不能达到要求，根据情况进行适当的调整，如调整柱温、流速等或选用其他色谱柱系统。 10.1.2.3最终确定色谱条件和内标。10.1.3测定步骤的选择10.1.3.1供试品残留溶剂测定标准中规定检测的残留溶剂较少时，可选择传统的测定方法，即按照标准中规定检测的残留溶剂种类配制对照品溶液，以最终确定的测定方法分别测定供试品溶液和对照品溶液，计算供试品中残留溶剂的量。10.1.3.2供试品残留溶剂测定标准中规定检测的残留溶剂较多，但实际所含有的残留溶剂种类较少时，可先测定供试品溶液，利用残留溶剂双柱初筛知识库确定供试品中实际所含残留溶剂的种类，配制相应的对照品溶液，以建立的气相色谱方法测定供试品溶液和对照品溶液，计算供试品中残留溶剂的量。10.1.4定量测定10.1.4.1配制足够量的一定浓度的内标溶液备用。精密称取供试品约0.2g置顶空瓶中，加溶剂2.0ml溶解，加盖密封作为供试品溶液。根据供试品溶液的浓度计算出按照中国药典的限度应配制的对照品浓度，并用内标溶液配制。10.1.4.2在相同的顶空条件和色谱条件下测定对照品和供试品并按内标法计算结果。10.1.5结果判定10.1.5.1测定结果小于中国药典规定限度的组分，为残留溶剂项符合规定的组分。10.1.5.2当存在有干扰组分、限度边缘组分、不符合规定的组分时，要改变测定条件做进一步的考察，以排除干扰因素，得到正确结论。10.2供试品中残留溶剂种类的确定10.2.1首先顶空进样甲烷气体，记录甲烷的保留时间作为色谱系统的死时间（t0）。10.2.2内标溶液：称取丁酮适量，用适当的溶剂稀释，作为内标溶液。10.2.3供试品溶液：称取适量供试品，用内标溶液溶解并稀释成0.10.5g/ml的溶液作为供试品溶液。10.2.4