植物组织培养实验参考答案.doc

植物组织培养实验复习题1、 名词解释1、大量元素:指含量占生物总重量万分之一以上的元素，包括C、H、O、N、P、S、K、C、Mg等。2、微量元素:含量占生物总重量万分之一以下的元素。3、植物生长调节剂:人工合成的对植物的生长发育有调节作用的化学物质。4、外植体：把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官5、细胞全能性：植物体的每个细胞都含有该植物全部的遗传信息。6、基础培养基：根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求而人工配置的营养基质。7、愈伤组织:人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁细胞。8、褐变:植物组织中多酚氧化酶被激活，使酚类物被氧化成醌类物，可抑制其他酶活性，毒害外植体。9、茎尖脱毒:茎尖分生区的病毒传播速度很慢，利用茎尖组培获得无病毒苗，来达到脱毒的目的。10、不定芽：凡从叶、根或芽节间或是离体培养的愈伤组织上等通常不形成芽的部位生出的芽。11、污染率：污染数除以接种数，再乘以100%。12、诱导率：愈伤数除以未污染数，再乘以100%。13、成活率：成活数除以未污染数，再乘以100%。14、接种：将表面消毒的外植体转接到无菌的培养基上的过程。15、消毒：消灭材料上的病菌（不损伤植物材料）。16、灭菌：利用物理或化学的方法，达到组织培养所学的无菌环境。17、母液：欲配培养液的浓缩液。18、无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要危害病毒在植物内的存在表现为阴性反应的苗木。19、植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体，培养在无菌培养基上和人工控制的环境中，使其生长、分化、增殖，甚至长出新的植株的过程和技术。20快速繁殖：采取培养基配制，材料灭菌，无菌培养，幼苗转移到苗床，成苗转至大田栽种五步走的繁殖培养方式21、继代培养：继代培养是指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上的培养方式。22、生根培养：将长到一定长度的微枝（10mm）转移到生根培养基上培养。23、玻璃化现象：试管苗的茎叶变成透明水渍状，生长畸形，增殖系数明显下降，难以诱导生根，即使诱导生根，其根系质量极差，移栽成活率极低。24、暗培养：25、液体培养：将所需培养物的悬浮液在液体培养基中培养的方法。26、脱分化：一个成熟细胞回复到分生状态或胚性细胞状态的现象。27、分化：由于细胞的分工而导致的细胞结构和功能的改变或发育方式改变的过程。28、热处理脱毒：利用高温下使植物组织中的病毒部分钝化或完全失去活性的方法。29、微尖嫁接技术：把极小（0.2mm）的茎尖作为接穗嫁接到实生砧木上（无菌种子培养获无菌苗，种子实生苗不带毒），然后将嫁接的砧木接种到新的培养基上培养。30、胚抢救：是指对由于营养或生理原因造成的难以播种成苗或在发育早期阶段就败育、退化的胚进行早期分离培养。2、 问答题1、 简述植物生长调节物质在组织培养中的作用？ 并列举常见的种类。 （1）生长素类促进细胞伸长和分裂，促进生根、抑制器官脱落、性别控制、延长休眠、顶端优势、单性结实。如IAA（吲哚乙酸） NAA(萘乙酸)IBA(吲哚-3-丁酸) 2,4D(2,4二氯苯氧乙酸)、NOA(萘氧乙酸) (2）细胞分裂素类 诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。促进细胞分裂与扩大。抑制根的分化。抑制衰老减少叶绿素分解有保鲜效果。如包括6BA(6苄基腺嘌呤)、Kt ( 激动素)、Zt (玉米素)2、 植物组织培养主要应用在哪些方面？植物快速繁殖脱除病毒培育新品种种质资源的保存人工种子的研究次生代谢产物的生产3、 MS培养基的主要成分包括哪些？大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素 4、 简述一般组织培养的操作工序。培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和高压灭菌；无菌操作材料的表面灭菌和接种，培养；试管苗的驯化、移栽与初期管理5、 在我们实验室如何配制1L：MS+IAA 30g/L蔗糖+8g/L琼脂（pH 5.8）的培养基？（1）配母液：MSI 20x MSII-MSV 200x 及IAA 贮备 （2） 配培养基： 1、取约750ml蒸馏水，琼脂8g煮沸溶解，加入30g蔗糖 2、取母液MSI 50ml，MSII-V 5ml，IAA于小烧杯，搅拌均匀 3、将2倒入1中，蒸馏水定容至1L ，调PH值(pH=5.8) 4、分装试管封口灭菌存放。6、 简述高压灭菌锅对培养基进行灭菌的操作要点。首先将内层灭菌桶取出，在向外层锅加入与三脚架齐平的水。 放回灭菌桶，并装入灭菌物品。 加盖，并将盖上的排气软管插入内层桶的排气槽内，在以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，螺栓松紧一致，勿漏气。 打开电源加热，待压力上升到0.5MP时打开气阀，排净锅内冷空气后，待压力降到0MPA时关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力而逐渐上升，当锅内压力上升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。 灭菌所需时间到后，切断电源，让锅内温度自然下降，当压力下降到零时，打开排气阀，旋松螺木栓，打开锅盖，取出物品7、 规划一个植物组织培养室，绘制实验室的分区结构示意图，需要购置哪些必须仪器？ 仪器：超净工作台、 高压灭菌器 、 空调机 、 天平 、 显微镜 、 蒸馏水发生器 、酸度计等 8、 如何对菊花茎段进行消毒？流水冲洗10min摘掉叶片，切成合适茎段装入消毒瓶超净工作台处用75%酒精浸泡30S无菌水漂洗1次3min/次封存备用。9、 如何对月季茎段进行消毒？0.1%KMnO4(30min)自来水冲洗在超净工作台处用75%酒精浸泡30S无菌水漂洗1次（3min）0.1%升汞浸泡10min后倒入回收瓶无菌水冲洗3次，3min/次封存备用。10、 以大蒜茎尖脱毒为例，简述无菌接种操作的流程和注意事项。流程：消毒接种工具并冷却体视显微镜下剥茎尖接种至DS培养基注意事项：进无菌室之前，操作人员需着经灭菌的白色工作服，戴口罩。操作人员双手必顺进行灭菌。11、 以石斛播种为例，简述无菌接种操作的流程和注意事项。答：操作流程：超净工作台及工具的准备 接种工具灭菌 用注射器吸取0.2ml石斛种子悬浮液 打开石斛种子培养基 注射进培养基中上部 封口 注意事项：每次使用注射器之前，轻甩注射器，将其中酒精甩出，用完后，需放 入装有酒精的锥形瓶中。 接种时试管最好不要倾斜，以免悬浮液流到试管壁上 接种封口后，轻轻摇动试管，使悬浮液均匀的布满培养基表面。12、 以银杏胚培养为例，简述无菌接种操作的流程和注意事项。答：操作流程：超净工作台及工具的准备 银杏种子消毒 接种工具灭菌 用接种刀从中间切开银杏种子，取出银杏胚 打开培养基，用镊子夹取银杏胚，将其接到培养基上。 封口 注意事项：防止污染：接种全过程要求无菌操作。为减少污染，要求方法简单、 操作迅速 。 银杏胚接种时，切忌接种过深 注意胚的形态学上端，不要接倒了。13、 继代培养有什么作用，以菊花为例，简述其继代培养的操作方法答： 作用：改善培养环境扩大繁殖系数控制突变 操作方法：超净工作台及工具的准备 接种工具灭菌 将菊花茎段从试管中取出，放于接种盘上 用接种刀和镊子，将菊花茎段上的新鲜茎段切下 打开继代培养基 将切下的外植体快速的接入培养基上 封口14、 简述离体培养污染的原因及防止措施。原因：外植体材料消毒不彻底 培养基灭菌不彻底 操作环境不洁净 操作不规范。措施：选择无菌或带菌少的植物材料外植体、培养基、及仪器等严格消毒灭菌无菌室的消毒 规范操作15、 无菌操作时应注意哪些事项？(1) 在接种4h前接种室灭菌；(2) 在接种前15-20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯；(3) 接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；(4) 上工作台后，用酒精棉球擦拭双手及工作台面；(5) 接种工具蘸95%酒精，灼烧；(6) 接种时将试管斜着，使试管口在酒精灯火焰上转动，灼烧数秒钟。接完种后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟。(7) 接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；(8) 接种完毕后要清理干净并用酒精擦工作台。16、 与常规苗相比，试管苗具有哪些特点？(1)生长细弱 (2)光合作用差 (3)叶片气孔数目少活性差 (4)根的吸收功能弱 (5)对逆境的适应和抵抗能力差17、 在植物组织培养中，通过哪些途径可以得到完整的植株？(1) 外植体愈伤组织根、芽试管苗 再长芽 (2) 外植体胚状体试管苗 (3) 外植体根、芽试管苗18、 组织培养中常用的灭菌方法？高压蒸汽灭菌过滤灭菌19、 植物脱毒的主要方法有哪些？其主要原理是什么？答：热处理脱毒法，在一定范围内，用高于常温处理可钝化病毒活性并加速植物细胞分裂。微茎尖培养脱毒法，病毒在植物内分布不均匀，越接近顶端分生组织，病毒浓度越稀愈伤组织培养脱毒法，病毒在植物内分布不均匀，病毒在愈伤组织增殖中逐渐降低且在继代培养中产生抗性变异。珠心组织培养脱毒法，病毒通过维管组织传播，而珠心组织和维管束系统无直接联系。微体嫁接离体培养脱毒法，微茎尖带毒机率小并嫁接在无菌的砧木上20、 简述植物脱毒的意义。 答：产量提高 品质提高 抗病性增强21、 植物组织培养技术主要包括哪些环节？各环节的主要工作内容？ 1、培养器皿的清洗2、培养基的配制、分装和高压灭菌3、无菌操作材料的表面灭菌和接种4、将培养物放到培养室培养5、试管苗的驯化、移栽和初期管理。22、 在培养基中加入活性炭有什么作用？1、主要是利用其吸附作用，减少一些有害物质的影响2、使培养基变黑有利于某些植物生根 3、对形态发生和器官形成有良好的效应23、 在我们实验室如何配制1L：MS培养基工作液？ （1） 配制母液一般母液配成比所需浓度高10-100倍的浓缩液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。 （2）配制方法 将母液按顺序摆放 取适量的蒸馏水加入配制容器中 按需要量依次取母液及生长调节物质 加入蔗糖30g/L溶解 定容 调pH值 加琼脂(6-10g/L)完全融化后分装至培养瓶中封口 高压灭菌24、 简述培养基生长素/细胞分裂素比值高低对外植体生长的影响。答：低生长素/高细胞分裂素时，更易促进外植体长茎芽。 生长素与细胞分裂素均衡时，促进外植体同时茎芽和根，或愈伤组织。 高生长素/低细胞分裂素时，更易促进外植体产生根。25、 胚培养的作用有哪些？1)在远缘杂交育种中的应用:克服杂种胚不能正常发育 2)克服珠心胚的干扰,提高育种效率 3)缩短育种周期 4)测定休眠种子的萌发率 5)理论研究中的应用26、 如何进行试管苗的驯化？将长有完整试管苗的培养瓶由培养室转到伴遮荫的自然光下锻炼，并打开瓶盖注入少量自来水使幼苗逐渐降低温度，转向有菌，最后转向与预计栽培条件相似进行培养。27、 如何提高试管苗移栽的成活率？1、选择壮苗 2、加入植物生长调节物质 3、降低无机盐的浓度 4、加入少量活性炭5提供适当的环境条件6移栽过程中让试管苗从无菌向有菌逐渐过渡28、 目前鉴定脱毒苗的方法有哪些？各有何特点？ 答：视觉观察法：看植株的茎叶是否有该病毒所有的可见症状。病株较脱毒苗生长势减弱，有矮化或畸形等症状。 生物鉴定法（指示植物法）：将一些对病毒反应敏感、病状特征显著地植物作为指示植物，利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法。这种方法条件简单，操作方便，为一种经济而有效的鉴定方法。 电子显微镜鉴定法：可以直接观察是否有病毒存在，了解病毒颗粒的大小、形状和结构，又可以鉴定病毒的种类。优点是方法先进，灵敏度高，能在植物粗提取液中定量测定病毒，但需要一定的设备和技术。 抗血清鉴定法：用已知抗血清鉴定病毒的种类。这种方法特异性高，测定速度快，所以抗血清鉴定法成为植物病毒鉴定中最有用的方法之一。 分光光度法：将已知浓度的病毒悬浮液，在260nm下测其光密度，并折算成消光密度，然后查找文献，测出全部核蛋白的浓度。这种方法可以定量病毒，但是需要一定的设备和技术。29、 接种后离体培养物对光、温、湿等环境条件的要求