临床医学]6-5临床常用免疫学检查7年制.ppt

1,2019/4/3,1,临床常用免疫学检查,临床常用免疫学检查 Immunological tests,吴映娥 汕大医学院第一附属医检验科,2,2019/4/3,临床常用免疫学检查,2,临床常用免疫学检查,免疫功能检查 (immunological function) 血清免疫球蛋白检测 血清补体检测 细胞免疫检测(immunoglobulin, complements, cell immune),细胞因子。 肿瘤标志物检测 (tumor markers) 蛋白质类肿瘤标志物 糖脂类肿瘤标志物 酶类肿瘤标志物(proteins, glycolipid, enzymes markers) 自身免疫检测 (auto-antibodies) 类风湿因子测定 抗核抗体检测 组织和细胞抗体检测 (RF ANA other antibodies) 感染免疫检测 (infectious immunology) 细菌感染免疫检测 病毒感染免疫检测 其它(寄生虫感染、性病等）(bacterial , virus and so on ) 其它 循环免疫复合物检测、冷球蛋白检测、丙种反应性蛋白检测,3,2019/4/3,临床常用免疫学检查,3,一、免疫功能检查 (immunological function),血清免疫球蛋白检测(Immunoglobulin test) 血清补体检测 (Complements) 细胞免疫检测 (Cell immune),4,2019/4/3,临床常用免疫学检查,4,血清免疫球蛋白检测,概念：具有抗体活性和抗体样结构的球蛋白，由浆细胞产生，存在于体液，血液，外分泌液和一些细胞膜上。 分类: 根据其功能和理化性质不同，将免疫球蛋白分为五类： IgG、IgA、IgM、 IgD 、 IgE,5,2019/4/3,临床常用免疫学检查,5,IgG最多、占70%80% IgA血清型和分泌型两种 IgM是有效的凝聚和溶解细胞的因子，最早；最先。 IgD功能尚不完全清楚 IgE与变态反应有关(0.002%),血清免疫球蛋白检测,6,检测方法,酶联免疫法（ELISA) 放射免疫（RIA) 荧光标记免疫(IFA) 化学发光法（CLIA) 免疫透射比浊、免疫散射比浊,7,血清免疫球蛋白G（IgG）检测,IgG人体内含量最多，占Ig的70-80 再次免疫应答的主要抗体 对细菌、病毒和寄生虫都有抗体活性 唯一可通过胎盘的Ig,8,检测方法： 免疫比浊法,参考值： 7.016.6 g/L,血清免疫球蛋白G（IgG）检测,9,临 床 意 义,IgG 增高 （病理性） IgG增高是再次免疫应答的标志。见于各种慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、肺结核、链球菌感染以及自身免疫性疾病，如SLE，类风湿关节炎等。 单克隆性增高 仅见一种Ig增高，主要见于免疫增殖性疾病，如IgG分泌型多发性骨髓瘤,10,IgG 增高 （生理性） 胎儿出生前可从母体获得IgG，孕期22-28周与母体血浓度相等，出生后逐渐减少，3、4月胎儿血IgG降至最低，随后胎儿自身逐渐开始合成IgG，血清IgG逐渐增多，到16岁前达到成人水平。,IgG 减低 见于各种先天性和获得性免疫缺陷病、联合免疫缺陷病、肾病综合症、和免疫抑制剂患者以及重症传染病等。,临 床 意 义,11,免疫球蛋白A(IgA)检测,两型：血清型IgA，分泌型IgA（SIgA）。,血清型IgA以单体形式存在,占10%-15%.,分泌型IgA（S IgA）由J链连接 的二聚体和分泌片组成。,12,血清IgA 0.73.5 g/L。 SIgA 唾液0.3 g/L，泪液3080 g/L，初乳5.06 g/L，粪便1.3 g/L,参考值：,检测方法： 免疫比浊法,免疫球蛋白A(IgA)检测,13,临 床 意 义,IgA增高：见于IgA型MM，SLE,类风湿性关节炎，肝硬化，湿疹及皮肌炎等。在中毒性肝损伤时， IgA浓度与炎症程度相关。 IgA降低：见于反复呼吸道感染，非IgA型MM，原发和继发性免疫缺陷病和自身免疫性疾病等。 生理性变化：儿童的IgA水平比成人低，到16岁前达到成人水平。,14,免疫球蛋白M(IgM)检测,IgM是五聚体，分子量最大的Ig 不能通过血管壁，不能通过胎盘 个体发育过程中最早合成的抗体，脐带血IgM增高提示胎儿宫内感染 体液免疫应答中IgM是最早产生的抗体,15,16,检测方法： 免疫比浊法,参考值： 0.5 2.6 g/L 占5%-10%,免疫球蛋白M(IgM)检测,17,临 床 意 义,IgM增高 见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类风湿关节炎、SLE等，由于IgM是初次免疫应答中的Ig,因此单纯IgM增加常提示为病原体引起的原发性感染。 原发性巨球蛋白血症时， IgM呈单克隆性明显增高 IgM降低 见于IgG型重链病， IgA型MM，先天性免疫缺陷病，使用免疫抑制剂，淋巴系统肿瘤和肾病综合症等。,18,免疫球蛋白E(IgE)检测,IgE是血清中最少的一种Ig，占血清总Ig的0.002%。 是一种亲细胞抗体，介导型变态反应，与变态反应、寄生虫感染和皮肤过敏等有关。,19,检测方法： ELISA 法,参考值： 0.1 0.9 mg/L,免疫球蛋白E(IgE)检测,20,临 床 意 义,IgE增高 见于IgE型MM、肝脏病、结节病、类风湿性关节炎，以及各种过敏性疾病和寄生虫感染等。 IgE降低 见于先天性和获得性丙种球蛋白缺乏症、恶性肿瘤、长期应用免疫抑制剂和共济失调性毛细血管扩展症等。,21,2019/4/3,临床常用免疫学检查,21,M蛋白（Monoclonal protein）,概念：单克隆B淋巴细胞异常增殖产生免疫球蛋白，具有相同结构和电泳迁徙速度，但不具有抗体活性。,22,【参考值】蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法：正常人为阴性。,图14号为多发性骨髓瘤病人的血清蛋白电泳图谱,M蛋白（Monoclonal protein）,23,临床意义,检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于： 多发性骨髓瘤：以IgG型最常见，其次为IgA型，IgD和IgE罕见，也有IgM型的报道。,巨球蛋白血症(macroglobulinemia)：该病血液中存在大量单克隆IgM。 重链病：出现Ig重链 轻链病：出现单克隆游离轻链。 半分子病：系由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片段。 恶性淋巴瘤：血液中可出现M蛋白。 良性M蛋白血症：,24,2019/4/3,临床常用免疫学检查,24,血清补体（complement,C）,组成：补体是一组具有酶源活性的糖蛋白，由传统途径的9种成分c1（c1q 、c1r 、c1s ）c9,旁路途径的3种成分及其衍生物B、D 、 P 、H 、I等因子组成。 作用：参与灭活病原体的免疫反应，也可破坏自身组织或自身细胞造成免疫损伤,25,补体的三条激活途径,26,总补体溶血活性检测(CH50),原理:抗体致敏的绵羊红细胞(抗原抗体复合物)可激活血清中的补体C1,从而引起补体经典途径的连锁反应,导致绵羊红细胞膜上形成多分子的聚合物，绵羊红细胞溶解。在分光光度计上542nm读取吸光度。溶解程度与样品中补体量正相关。 主要反应补体经典途径的综合水平。,27,+,+,C,溶细胞作用：,靶细胞,抗 体,抗原抗体 复合物,C1-C9,靶细胞溶 解,总补体溶血活性检测(CH50),28,2019/4/3,临床常用免疫学检查,28,正常值：试管法 50100 kU/L 临床意义 ： 减低1.先天性 2.合成减少 肝炎 ,营养不良 3.消耗或者丢失过多,自身免疫性疾病，如 SLE、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎。 增高急性炎症、组织损伤、某些肿瘤等。,总补体溶血活性检测(CH50),29,2019/4/3,临床常用免疫学检查,29,补体C3检测 C3在补体系统各成分中含量最多，是传统途径和旁路途径被激活的关键物质。 正常值：0.81.g/L 补体C4检测 C4代表补体传统活化途径，在补体活化、促进吞噬、防止免疫复合物沉着和中和病毒等方面发挥作用 。 正常值：0.200.60g/L,其他补体检测,30,2019/4/3,临床常用免疫学检查,30,参见CH50减低和增高的临床意义 C3增高在急性炎性反应更敏感 C4对判断免疫复合物形成时补体消耗性减低更有意义,临床意义,31,2019/4/3,临床常用免疫学检查,31,细胞免疫检测(Cell immune),T细胞免疫检测 B细胞免疫检测 自然杀伤细胞检测(NK cell) 细胞因子检测(cytokine)（自学了解）,32,T细胞分化抗原,T细胞表面特异的表面抗原，WHO统称其为白细胞分化抗原（cluster differentiation，CD) CD3+代表总T细胞、CD3+/CD4+T辅助细胞、CD3+/CD8+T抑制细胞。 应用这些细胞的单克隆抗体与T细胞表面抗原结合后，再与荧光标记二抗(兔或羊抗鼠IgG)反应，在流式细胞仪中计数CD阳性细胞的百分率。,33,参考值,流式细胞术： CD3+ 61-85 CD3+CD4+ (Th) 28-58 CD3+CD8+ (Ts) 19-48 Th/ Ts 0.9-2.0,34,2019/4/3,临床常用免疫学检查,34,CD4降低病毒感染（CMV,HIV,HBV) CD4/CD8增高自身免疫性疾病、变态反应、排异反应 CD4/CD8减低见于艾滋病(HIV,常0.5)、恶性肿瘤（进行期或复发期）、传单及乙肝急性期。 CD3 CD4 CD8均增高T细胞型淋巴细胞恶性疾病 (T lymphocytes malignant disease),临床意义,35,应用CD19、CD20、 CD21 、 CD22 和CD40等单克隆抗体标记单个核细胞B细胞，通过免疫荧光或流式细胞术进行检测。 CD19 为全部B细胞共有的表面标志，B细胞活化后不消失，是最重要的B细胞标记分子。 CD22 为成熟B细胞的表面标志。,细胞分化抗原,36,检测方法：,流式细胞术 参考值： CD19 11.743.73 %,细胞分化抗原,37,升高B细胞型急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、Burkitt淋巴瘤等 减低无丙种球蛋白血症、长期免疫抑制剂应用后,临床意义,38,自然杀伤细胞(NK cell)检测,NK 细胞是一种多功能细胞群，介导天然免疫，不依赖抗体和补体，能直接杀死靶细胞，在抗肿瘤免疫监视作用中起第一道防线。其分化抗原主要是表达CD3-/CD(16+56)+.其作用： 1.介导天然免疫应答，它不依赖抗体和补体即能杀伤靶细胞，抗感染和免疫调节作用；是在抗肿瘤的免疫监视作用中处于第一道防线。 2.自然杀伤细胞（NK）活性可作为判断机体抗肿瘤和抗病毒感染的指标之一,39,检测方法：,流式细胞术 参考值： CD-/CD(16+56)+ ：13.8%5.9%,自然杀伤细胞(NK cell)检测,40,临床意义,自然杀伤细胞（NK）活性可作为判断机体抗肿瘤和抗病毒感染的指标之一 活性降低：见于血液系统肿瘤、实体肿瘤、免疫缺陷病、艾滋病和某些病毒感染患者； 活性升高：宿主抗移植物反应者。,41,细胞因子（Cytokine,CK）是由免疫原、丝裂原或其他因子刺激细胞所产生的低分子量可溶性蛋白质，为生物信息分子，具有调节固有免疫应答和适应性免疫应答，促进造血以及刺激细胞活化、增殖分化等功能。,必须与相应受体结合发挥作用。,细胞因子的产生细胞,抗原等刺激,产生生物学效应,靶细胞,细胞因子,42,多为小分子（830kD）多肽。 在较低浓度下即具有生物学活性。（高效性） 通过结合细胞表面高亲和力受体发挥生物学效应。 半衰期很短。 以自分泌、旁分泌或内分泌形式发挥作用 具有多效性、重叠性、协同性和拮抗性,细胞因子的共同特点,43,细胞因子可以旁分泌、自分泌或内分泌的方式发挥作用,以自分泌和旁分泌为主。,细胞因子的作用方式,44,（1）多效性 : 一种CK可作用多种靶细胞,产生多种生物学效应,（2）重叠性: 2种或2种以上的CKs可介导相似的功能,（3）拮抗性: 一种CK可抑制另一种CK的功能,（4）协同性 : 一种CK可强化 另一种CK的 功能,IL-6,IL-4,IL-13,B增殖,造血干细胞,肥大细胞,IL-4,B,IL-3 IL-11,IL-4 (-),(+)IFN-,Th,Th1,Th2,IL-4 (+),(-)IFN-,细胞因子的发挥生物效应特点,45,细胞因子的分类,白细胞介素 interleukin，IL 干扰素interferon，IFN 肿瘤坏死因子Tumor necrosis factor，TNF 集落刺激因子 colony stimulating factor，CSF 趋化性细胞因子 chemokine 生长因子growth factor, GF,根据结构和功能，细胞因子分为六大类,46,几种主要的白细胞介素,IL-1:发热, 激活T细胞、巨噬细胞。 IL-6 :发热, 促进T、B细胞增殖分化 。 IL-2:主要由活化Th细胞产生，促进T细胞分化发育。 IL-8:主要由单核-巨噬细胞生成，激活中性粒细胞。 IL-4:主要由活化的T细胞和肥大细胞产生，促进B细胞生长；抑制Th1细胞生长，促进体液免疫应答，促进IgE的合成。 IL-10:由活化的T细胞和巨噬细胞产生，抑制巨噬细胞的活性。 IL-12:由B细胞、单核-巨噬细胞生成，激活NK细胞，促进Th1细胞的生长。 IL-15:由单核-巨噬细胞生成，激活T细胞和NK细胞。,47,干扰素(interferon IFN),最早发现的CK,具有干扰病毒感染和复制的能力。 根据其来源和结构，可将其分为两型： 型：IFN-、-主要由白细胞、成纤维细胞、病毒感染的组织细胞等产生 型： IFN- -主要由T、NK细胞产生,48,主要功能,IFN IFN IFN ,CD118 CD118 CD119,淋巴细胞，单核巨噬细胞 成纤维细胞 活化T细胞，NK细胞,抗病毒作用强，促进MHC I和II类子表达 抗病毒作用强，抗细胞增殖，同上 免疫调节能力强，如激活巨噬细胞，抑制Th2细胞，抗病毒作用弱,名称,受体,主要产生细胞,主要功能,病毒性疾病,肿瘤,49,可以直接诱导肿瘤细胞凋亡的细胞因子。 分类： TNF ：活化的单核巨噬细胞产生 亦称恶液质素 TNF：活化的T细胞产生，亦称淋巴毒素。 两种TNF的分子量为51kD， 结构为同源三聚体，具有相同的结合受体和生物学活性,肿瘤坏死因子超家族 （ tumor necrosis factor, TNF）,50,集落刺激因子 -（colony stimulating factor，CSF）,指能刺激多能造血干细胞和不同发育分化阶段的造血干细胞进行增殖分化，并在半固体培养基中形成相应集落的细胞因子。 按其作用范围分为：粒细胞CSF（G-CSF），巨噬细胞CSF（M-CSF），粒细胞和巨噬细胞CSF（GM-CSF）和多集落刺激因子（multi-CSF，IL-3）等。 广义上，凡是刺激造血细胞的细胞因子都可以统称为CSF，如EPO， SCF、 TPO、IL-11。,治疗肾性贫血,51,趋化性细胞因子（chemokine）,概念：能使细胞发生趋化运动的小分子细胞因子。趋化运动是指细胞向高浓度刺激物方向的定向运动。 功能：招募血液中的单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等进入感染发生的部位。 特点：结构上有较大的同源性 氨基端多含有1个或2个半胱氨酸,52,生长因子（ growth factor,GF ）,对细胞生长起调节作用的细胞因子。 包括TGF-、EGF、VEGF、FGF、NGF等。 TGF-可抑制多种免疫细胞的增殖、分化及效应,但对肿瘤细胞的生长无抑制作用。,53,细胞因子检测的特点,免疫原性较弱 样品含量低 样品具有时效性 生物效应特异性差,54,细胞因子检测的方法,免疫学检测方法抗原性检测 细胞生物学检测方法生物活性检测 分子生物学检测方法基因表达检测,55,二、肿瘤标志物检测,肿瘤标志物（tumor marker、TM）： 在肿瘤发生和发展过程中，由肿瘤细胞所产生或机体在肿瘤细胞刺激下产生的，与肿瘤存在相关的物质，存在于血液、细胞、组织液、体液中。,56,肿瘤的发展与诊断,10-100 g,榛子大小,针头大小,免疫学方法,早期,亚临床阶段,晚期,1 mg,1 g,1kg,1 g,高灵敏度的肿瘤标志物的测定对肿瘤的早期诊断和治疗方案设计是十分重要的手段,世界卫生组织（WHO）指出：若能早期诊断并及时治疗，90%95%的肿瘤是可以治愈的。,临床可检测的肿瘤,肿瘤标记物 (无形的肿瘤),57,恶性肿瘤增长的检测,Tumor mass,1g,10,1mg,106,1g,109,10-100g,1010-11,1kg,1012,肿瘤标记物 (无形的肿瘤),临床可检测的肿瘤,肿瘤增长,Tumor cells,Lead time,世界卫生组织（WHO）指出：若能早期诊断并及时治疗，90%95%的肿瘤是可以治愈的。,58,肿瘤标志物分类,蛋白质类，如AFP、CEA和PSA等。 糖脂类，如CA125、 CA19-9、 CA153和CA-50等 *酶类，如前列腺酸性磷酸酶(PAP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和-L-岩藻糖苷酶(AFU)等。 *激素，如HCG、雌激素受体等 其它 肿瘤标志物，如核酸、多胺等。,59,甲胎蛋白（-fetoprotein，AFP）,在胎儿发育早期,由肝脏和卵黄囊合成，出生后一年内降至正常水平。 细胞恶变后又重新具有分泌AFP的能力。 对诊断肝细胞癌及滋养细胞恶性肿瘤有重要的临床价值。,60,参考值,血清 25g/L,甲胎蛋白（-fetoprotein，AFP）,61,临床意义,原发性肝癌患者血清中AFP的含量明显升高，常300g/L。 病毒性肝炎与肝硬化患者血清中AFP可增高，但常300g/L。 生殖器胚胎性肿瘤、胃癌、胰腺癌患者血清中AFP可升高。 妊娠时AFP可升高，峰值低于400g/L，若异常升高应考虑胎儿神经管缺损畸形。,62,癌胚抗原（carcinoembryonic antigen、CEA）,早期胎儿的胃肠道及某些组织均有合成CEA的能力 胎儿出生后血清 CEA的含量极低 是一种广谱性肿瘤标志物，多种肿瘤表达，脏器特异性低，主要用于辅助肿瘤的诊断、判断预后、监测疗效和肿瘤复发等。,63,参考值,血清 5g/L,癌胚抗原（CEA）,64,临床意义,升高主要见于胰腺癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、胃癌等消化系统肿瘤。 血清CEA连续随访检测，可用于恶性肿瘤治疗后的疗效观察及预后判断。病情好转时，CEA浓度下降，病情加重时可升高。 肠道憩室炎，直肠息肉，结肠炎，肝硬化，肝炎和肺部疾病也有不同程度的升高。 抽烟：20%-40%的人CEA2.5ug/L,少数人5.0ug/L.,65,前列腺特异性抗原（PSA),前列腺分泌的单链糖蛋白 存在于前列腺管道的上皮细胞，前列腺癌时血清水平明显升高 总PSA (t-PSA）中，80结合形式，20游离（ f-PSA) 参考值:t-PSA0.25,66,临床意义,前列腺癌是60-90患者血清t-PSA明显升高 前列腺炎、增生，轻度升高， t-PSA 4.0-10.0g/L t-PSA 4.0-10.0g/L ， f-PSA /t-PSA 的比值对诊断更有价值，f-PSA /t-PSA0.1时提示前列腺癌,67,2.糖脂类肿瘤标志物检测,肿瘤细胞内糖基化过程发生变异，从而导致细胞分泌性或细胞膜上的糖蛋白或糖脂中的糖基序列发生改变，形成了一种和正常糖蛋白不同的特殊抗原，可利用单克隆抗体技术检测这些抗原，结果诞生了糖蛋白类抗原。 作为新一代的肿瘤标记物，远较酶和激素类标记物敏感、特异。,68,CA125,糖蛋白性肿瘤相关抗原，存在于上皮性卵巢组织及患者血清中 参考值：3.5万/,69,CA-125在卵巢诊断中的应用,8090的卵巢上皮癌中CA-125可明显升高 子宫内膜癌、透明细胞癌、输卵管癌及未分化卵巢癌患者中CA-125含量也可明显升高 粘液性卵巢癌患者的阳性率则较低 CA-125在卵巢包块良恶性的鉴别上特别有价值，敏感度为78、特异性95、阳性预测价值82、阴性预测价值91 。 CA-125和CEA联合测定，计算两者比值，可提高卵巢癌检出的敏感性和特异性。,70,CA-125其他应用,非卵巢癌类的恶性肿瘤，如胰腺、肝、胃、肠、子宫、和乳腺癌症患者中CA-125的阳性率可分别高达73、70、53、27、22和20。 然而CA-125血清浓度轻微上升还可见于1健康妇女，36的良性卵巢疾患或非肿瘤患者，包括孕期起始3个月、行经期、子宫内膜异位、子宫纤维变性、子宫肌瘤、良性卵巢瘤、急性输卵管炎、急性胰腺炎、肝病、胸腹膜和心包感染等。应注意排除 。,71,CA19-9,为唾液酸化的型乳糖系岩藻五糖，有六个糖基组成 正常在胰腺导管、胆道、胃、肠、子宫内膜和涎腺上皮细胞中均有表达 参考值：3.7万/,72,CA19-9的应用,CA19-9的器官特异性不强 在各种腺癌特别是消化系统的恶性肿瘤如： 7193胰腺癌、67肝胆管癌、4050胃癌、3050肝癌、30直肠癌和15乳腺癌的CA19-9都有升高 在急性胰腺炎、胆汁淤积性胆管炎、胆道结石和肝脏疾患中CA19-9也有可能升高，但很少超过120kU/L，往往是呈“一过性”升高。,73,CA19-9在胰腺癌中的应用,CA19-9在胰腺癌中的阳性率最高，常被认为是针对胰腺癌的一种肿瘤标记物。 早期胰腺癌CA19-9敏感性较低， T1期为60.7、T2期为78.4 检测胰腺癌的治疗效果及术后复发情况,74,CA15-3,分子量约为40 000的糖蛋白 是抗原决定簇、糖和多肽组成的糖蛋白 参考值：2.5万/,75,临床意义 :,CA15-3作为乳腺癌的主要标记物 23的原发性乳腺癌和69转移性乳腺癌可有 CA15-3的升高 乳腺癌的期和期，仅有1020的病人有升高，所以不能用于乳腺癌的早期诊断 主要用于乳腺癌病人的治疗监测和预后判断。 乳腺癌患者血清CA15-3浓度比原来水平升高预示病情进展、肿瘤复发、转移，其浓度升高比临床症状出现或影像学检查的发现时间早。 对晚期病人，当CA15-3100 kU/L 时，肯定有转移，敏感性高于CEA、TPA。,76,80的胰腺癌、71的肺癌、68的乳腺癌、64的卵巢癌、63的直肠癌、28的肝癌中也可见到CA15-3的升高 5.5的正常人、一些良性肝病和良性乳腺病（16）也可见有 CA15-3的升高,临床意义 :,77,CA50,为唾液酸糖脂和唾液酸糖蛋白组成，它对肿瘤的诊断无器官特异性。 参考值：2.0万/,78,临床意义,增高见于87%的胰腺癌，80%的胆囊癌，73原发性肝癌等； 动态观察其水平变化对癌肿瘤疗效及预后判断、复发监测有价值； 对监别良性和恶性胸、腹水有价值； 在慢性肝病、胰腺炎、胆管病时，-也升高。,79,肿瘤标志物的合理选用,同一种肿瘤可含多种标志物，而一种标志物可出现在多种肿瘤。选择特异标志物或最佳组合有利于提高肿瘤诊断的阳性率。动态检测有利于良性和恶性肿瘤的鉴别，也有利于复发、转移和预后判断。 肝癌： AFP 胃癌： CA724+CEA+CA199 大肠癌：CA724+CEA 乳腺癌：CA153+CEA+CA199 卵巢癌：CA125+CA724,80,三、自身免疫病检测,正常情况下，机体免疫系统对自身抗原物质不产生免疫应答或只产生极微弱的免疫应答 自身免疫性疾病是指机体免疫功能紊乱时,针对自身组织抗原产生自身抗体或致敏淋巴细胞,并导致组织损伤而引起的疾病.如SLE、RA等。 自身免疫性疾病主要免疫学特征为血清或其它体液中出现高滴度的自身抗体和致敏淋巴细胞,因此通过对自身抗体的检测辅助自身免疫性疾病的诊断.,81,2019/4/3,临床常用免疫学检查,81,自身免疫检测,抗核抗体检测 组织和细胞抗体检测 类风湿因子测定,82,3.1常见自身免疫性疾病的自身抗体检测,自身抗体（autoantibody） 是指抗自身细胞内、细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白，是自身免疫和自身免疫病重要特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自身抗体(谱) 分类: 脏器特异性自身抗体 脏器非特异性自身抗体,83,自身免疫性疾病的重要标志 高滴度存在于自身免疫性疾病患者 与疾病的活动性相关 参与免疫病理性损伤,自身抗体的特性,84,抗核抗体（ANA） 抗可提取性核抗原抗体（ENA） 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） 类风湿因子（RF） 抗角蛋白抗体（AKA） 抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体） 抗心磷脂抗体（ACLA）,实验室常检测的自身抗体,85,常见自身免疫性疾病的标志抗体,86,间接免疫荧光法（IIF） ELISA 免疫印迹法（Western-blot） 酶免疫斑点法,检测自身抗体常用的方法,87,2019/4/3,临床常用免疫学检查,87,88,间接免疫荧光法示意图,89,抗核抗体:以真核细胞（如HEp-2细胞、肝细胞）的各种细胞核成分为靶抗原所检测的自身抗体的总称。,抗核抗体的检测与应用,90,抗核抗体谱,91,细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞周期 均质型 核糖体型 肌蛋白型 中心体型 斑点型 线粒体型 波形纤维蛋白型 纺缍体型 核仁型 高尔基体型 细胞角蛋白型 纺缍丝型 着丝点型 溶酶体型 原肌球蛋白型 中间体型 周边型 颗粒型 纽带蛋白型 PCNA型 核点型(dots),IIF检测ANA荧光染色模型,92,斑点型（nRNP/Sm）,高滴度的抗U1-nRNP为MCTD的特征。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性。,斑点型（SSA/SSB）,抗SSA最常出现于SS及新生儿红斑狼疮 （100%）。抗SSB抗体几乎仅见于女性，可出现于SS和SLE。,93,均质型,抗dsDNA抗体 抗组蛋白抗体(histone) 抗ssDNA抗体 抗核小体抗体(nucleosome),94,周边型,可见于胶原病、PBC(原发性胆汁性肝硬化) 、CAH(先天性肾上腺皮质增生症)等患者,95,核点型（DOTS）,见于SLE、SS、PBC、风湿病,抗着丝点型,PSS局限型标志抗体,96,2019/4/3,临床常用免疫学检查,96,免疫荧光法：阴性 血清滴度1：100为阳性,参考值,97,2019/4/3,临床常用免疫学检查,97,1、ANA阳性最多见于未治疗的SLE，阳性率达80%100%（活动期几乎100%阳性） 2、ANA阳性是结缔组织病的标志，是SLE最佳筛选试验。 3、其它疾病,如原发性胆汁性肝硬化(Primary biliary cirrhosis)、慢性肝病、慢性感染、肿瘤等也可出现阳性,临床意义,98,ANA荧光图形临床意义,2019/4/3,临床常用免疫学检查,98,高滴度均质型-SLE,高滴度核膜型-SLE（活动）,高滴度斑点型-MCTD (混合型结缔组病),高滴度核仁型-SSC,99,抗双链DNA抗体,抗dsDNA抗体与细胞核DNA（外围区）脱氧核糖磷酸框架结合。 抗dsDNA抗体是SLE患者的特征性标志抗体。其抗体滴度与疾病的活动程度有相关性，抗体滴度的动态测定为监控治疗提供了有效的实验室手段。,抗双链DNA抗体,100,间接免疫荧光检测，是目前国内外临床常规检测抗dsDNA抗体最常用的方法。 抗dsDNA抗体诊断SLE的特异性可达95%100%，但其敏感性仅为30%50%，因此抗dsDNA抗体阴性不能排除SLE的诊断。,检测方法及应用,101,抗dsDNA抗体,SLE特异性抗体，与病情活动度相关。,102,抗核小体抗体,核小体（nucleosome）是真核生物细胞核染色质的基本单位 。凋亡细胞是核小体的重要来源，当SLE患者的吞噬细胞对凋亡细胞的清除能力受损或降低，导致核小体在患者体内大量存积，激活B细胞产生抗核小体抗体（Antinucleosome antibody ,AnuA）。,103,检测及应用,AnuA的检测通常采用ELISA检测法。 AnuA具有同抗ds-DNA抗体相同的诊断特异性，可达到95%，在系统性硬化（SSc）病中可有20%50%低浓度阳性率，其他自身免疫性疾病中该抗体均为阴性。 AnuA的表达与SLE病情活动分数相关。,检测及应用,104,可提取核抗原 (Extractable nuclear antigen ,ENA)多肽抗体谱,ENA又称盐水可溶性抗原或磷酸盐可浸出抗原，是指在盐水中或磷酸盐可溶解的核抗原。 ENA多肽抗体谱是针对核内ENA的一类自身抗体，约有10余种，主要为抗核糖核蛋白(RNP)抗体和抗Sm抗体，其它还有抗SS-A抗体、抗SS-B抗体、抗Scl-70抗体、抗JO-1抗体等。 不同的自身免疫病可产生不同的抗ENA抗体。通过检测抗ENA抗体的类型及其组合，可综合诊断自身免疫病的类型。,105,抗ENA抗体谱:可提取核抗原抗体的总称 临床常检测的抗ENA抗体谱主要包括： 抗Sm 抗U1-RNP 抗SSA 抗SSB 抗Jo-1 抗Scl-70 抗rib-P蛋白,抗ENA抗体谱的检测与应用,106,抗可提取性核抗原（ENA）抗体,107,双向免疫扩散（ID） 对流免疫电泳（CIE） 免疫印迹法（Western-blot） ELISA 酶免疫斑点法,ENA检测方法,108,免疫印迹法,SDS-PAGE电泳,转移电泳,酶免疫检测,免疫印迹法,109,110,抗可提取性核抗原（ENA）抗体, 抗Sm抗体：SLE标记性抗体（20%30%） 抗nRNP抗体：MCTD 95%100%（高滴度） 抗SSA抗体：PSS 60%75%，其它CTD 抗SSB抗体： PSS 10%40%，其它CTD 抗Scl-70抗体：SSc 25%75%, 标记性抗体 抗Jo-1抗体：PM/DM 25%，标记性抗体 抗rRNP抗体： SLE特异性抗体（10%30%）,111,抗核抗体在临床上应用,112,抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophil cytoplasmic autoantibodies, ANCA）是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原，与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。,与小血管炎相关的自身抗 体检测与应用,113,荧光染色型,靶抗原,胞浆型(cANCA),蛋白酶3（PR3） 杀菌/通透性增高蛋白（BPI）,核周型(pANCA),髓过氧化物酶（MPO） 组织蛋白酶G（Cath-G） 乳铁蛋白（LF） 白细胞弹性蛋白酶（HLE）,非典型型(aANCA),兼有两种特性,ANCA荧光染色型与靶抗原,114,周边型抗中性粒细胞胞浆抗体(pANCA）,主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩病）,115,胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体 (cANCA),主要见于Wegeners肉芽肿及微小多动脉炎,116,ANCA临床应用,髓过氧化物酶（MPO）与显微镜下多血管炎、坏死性新 月体型肾小球肾炎、过敏性肉芽肿性血管炎 相关,杀菌/通透性增高蛋白（BPI）主要见于肺部炎症性疾病 并与长期慢性绿脓杆菌感染有一定关系,蛋白酶3（PR3）与Wegeners肉芽肿（WG）密切相关。 仅cANCA诊断WG的特异性大于90%，联合PR3 可超过95%， 活动期几乎100%阳性。,组织蛋白酶G (Cath-G) 白细胞弹性蛋白酶(HLE) 乳铁蛋白(LF),可见于SLE、IBD、PBC、PSC等,117,类风湿因子（rheumatoid factor, RF）为抗变性IgG Fc的自身抗体，主要是IgM型 致病机理： RF与体内变性IgG结合形成免疫复合物，激活补体或被吞噬细胞吞噬，产生炎性介质导致组织炎性损伤，使患者发生骨关节炎及血管炎。,与RA相关自身抗体的检测与应用,118,1. 胶乳颗粒凝集实验 定性、半定量，敏感性和特异性不高，测定IgM-RF 2. 速率散射比浊法（ARRAY、IMAGE） 定量、准确、快速，测定IgM-RF 3. ELISA 定量、准确，可测定不同类型的RF,检测方法,119,RF分型意义,2019/4/3,临床常用免疫学检查,119,120,（1）RF在RA、SLE、PSS等多种自身免疫性疾病患者中均可被检出。,临床应用,121,（2）RF滴度与RA患者临床表现呈正相关， IgM-RF效价80IU/ml并伴有严重关节功能障碍时通常提示患者预后不良。 （3）IgG-RF与RA患者的滑膜炎、血管炎和关节症状密切相关，常伴随IgM-RF同时出现，在正常人及非RA患者中很难检出。 （4）IgA-RF与RA患者关节症状的严重程度及骨质破坏有显著相关性。,临床应用,122,AKA主要见于RA，阳性率36%59%，特异性95%99%，其出现可以先于临床表现；高滴度可预示较严重的RA类型。,抗角蛋白抗体（AKA）,123,常用方法：ELISA 临床意义：RA特异性自身抗体，敏感性65%85%，特异性为94%98%；高浓度抗CCP抗体是RA发生关节侵蚀的危险因子之一，定量检测有助于判断预后。,抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）,124,自身免疫性肝病是与自身免疫密切相关的特殊类型的肝病，其诊断和治疗完全不同于一般的慢性病毒性肝炎 自身免疫性肝炎 (AIH) 原发性胆汁性肝硬化 (PBC) 原发性硬化性胆管炎 (PSC) 重叠综合征,与自身免疫性肝病相关自身抗体的检测与应用,125, 在多种累及肝胆疾患的自身免疫疾病中，自身抗体在发病机制中起重要作用 自身免疫性肝病具有相对特异性自身抗体谱 自身抗体检测对自身免疫性肝病的诊断及鉴别诊断具有重要意义,自身免疫性肝病与自身抗体,126,自身免疫性肝病及其自身抗体谱,疾病类型 相关自身抗体 自身免疫性肝炎（ AIH ） 型AIH ANA/ASMA 型AIH anti-LKM-1 anti-LC-1 型AIH anti-SLA (可溶性肝抗原) 原发性胆汁性肝硬化（ PBC） AMA (M2/M4/M8/M9 ) anti-gp210， sp100 ACA 原发性硬化性胆管炎（PSC） pANCA,自身免疫性肝病及其自身抗体谱,127,抗甲状腺球蛋白抗体(TG Ab) 抗甲状腺过氧化物酶抗体（TPO Ab ） 抗促甲状腺素受体抗体（TSH-R Ab）,与桥本甲状腺炎相关自身抗体的检测与应用,128,重症肌无力（MG）自身抗体谱： 抗骨胳肌抗体（ASA）、抗乙酰胆碱受体(AchR) 抗体 多发性硬化（MS）自身抗体谱： 抗髓鞘碱性蛋白（MBP）抗体、抗脑苷脂抗体、 抗神经结苷脂抗体 急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病（格林巴利综合征）自身抗体谱： 抗髓鞘糖脂抗体、抗髓鞘硫脂抗体,与神经系统自身免疫性相关自身抗体的检测与应用,129,大多数自身免疫患者血清中可测到高效价的自身抗体，特别是有些自身抗体的检测已纳入某些自身免疫性疾病的诊断标准中，自身抗体检测已是临床免疫检测的一项重要的实验室指标。,自身抗体检测的临床应用,130,筛查性试验与确诊性试验项目的合理组合 选择相关的自身抗体检测项目 切忌盲目的全面检测 实验中应同步设置阳性和阴性对照,一、自身抗体检测的一般原则,131,95%99%可排除SLE （） SLE治疗缓解 病情特重（大量IC沉积消耗抗体） （）低滴度 常见于RA等其它自身免疫性疾病 高滴度 可作为诊断SLE的依据 ENA抗体谱检测 （）不能排除 抗dsDNA、Sm、rib抗体 （）可帮助诊断,ANA初筛,实验室方法的选择及结果的确认,132,ANA在自身免疫性疾病中的检出率,133,四、感染免疫检测,一、细菌