计数培养基适用性检查验证方案.docVIP

计数培养基适用性检查验证方案目 录1. 验证目的：细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。本次验证的目的是确认营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测定。2. 参照标准：2010版中国药典二部附录XI J微生物限度检查法。3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查。4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员:小组人员职务姓 名所在部门职 务组 长质量部经 理组 员质量部组 员质量部检验员4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。4.2.2认真观察并做好验证原始记录。4.2.3对实施验证的结果负责。5. 合格标准：被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。6. 试验材料：6.1. 被验证产品：营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基6.2. 仪器设备：6.2.1. *蒸汽灭菌器6.2.2.*净化工作台 6.2.3. *净化操作台 6.2.4. *霉菌培养箱 (2328)6.2.5. *电热恒温培养箱 (3035)6.2.6. *远红外烘箱6.2.7 *电热鼓风干燥箱6.2.8*微波炉6.3. 验证用培养基 名称生产厂家批号营养琼脂培养基营养肉汤培养基玫瑰红钠琼脂培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂培养基营养琼脂对照培养基玫瑰红钠琼脂对照培养基酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基6.4. 验证用菌株：（第 代）验证菌株培养基培养温度培养时间（小时）大肠埃希菌营养肉汤30351824金黄色葡萄球菌营养肉汤30351824枯草芽孢杆菌营养肉汤30351824白色念珠菌改良马丁培养基23282448黑曲霉菌改良马丁琼脂培养基232857（天）7. 菌液制备 7.1. 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物 至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，培养 1824 小时；接种白色念珠菌的 新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，培养 2448 小时。上 述培养物用 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌数为 50100cfu 的菌悬液。接 种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养 57 天，加入 3 5ml 含 0.05（v/v）聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后， 用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含 0.05（v/v）聚山梨酯 80 的 0.9% 无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含孢子数 50100cfu 的孢子悬液。菌悬液在室温下放置应在 2 小时内使用，若保存在 28可在 24 小时内使 用。黑曲霉孢子悬液可保存在 28，在验证过的贮存期内使用。8.菌液计数：（每种菌液接种2个平皿）大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌分别取1ml接种至营养琼脂培养基中，置3035培养48小时；白色念珠菌、黑曲霉分别取1ml接种至玫瑰红钠琼脂培养基，置2328培养72小时。菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表菌落计数结果（cfuml）试验次数10-5稀释10-6稀释10-7稀释123123123大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉9.适用性检查： 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各 50100cfu， 分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备 2 个平皿， 混匀，凝固，置 3035培养 48 小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉各 50100cfu， 分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备 2 个平皿，混匀，凝固，置 2328培养 72 小时，计数；取白色念珠菌 50100cfu， 注入无菌平皿中，立即倾注酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，平行制备 2 个平皿， 混匀，凝固，置 2328培养 72 小时，计数。同时，用相应的对照培养基由中国药品生物制品检定所研制与分发。替代 被检培养基进行上述试验。9.2. 结果见附表10. 结论附表1：计数培养基适用性检查验证记录试验时间 年 月 日 完成时间 年 月 日验证菌株平皿号供试品组cfuml对照培养基组cfuml回收率%应70%大肠埃希菌(培养3天计数)1-2-平均值金黄色