大肠杆菌表达宿主的特点

1、1: DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒 载体转化时，可与载体编码的 p-半乳糖苷酶氨基端实现 a-互补。可用于蓝白 斑筛选鉴别重组菌株。基因型：F-, © 80dlacZ M,1広(lacZYAargF)U169, deoR, recAI, endA1, hsdR17(rk-, mk+), phoA, supE44,入，thi-1 , gyrA96, relA12: BL21(DE3)菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体 T7启动子的表达载体(如pET 系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于 入噬菌体DE3区，该区整合于B

2、L21 的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。基因型：F-, ompT, hsdS (rBB-mB ) , gal, dcm (DE3) 3: BL21(DE3) pLysS 菌株该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶 菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平， 但不干扰目的蛋白的表达。该 菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。基因型：F-, ompT hsdS(rBB-mB ) , gal, dcm (DE3, pLysS , Camr 4: JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进 行转染时，由于载体 DNA产生的La

3、cZa多肽和JM09编码的LacZA M15进行a -互补，从而显示B-半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1, endA1, gyrA96 , thi 1, hsdR17, supE44, relA1 , A (lac proAB) /F ' traD36 proAB+ , lacIq, lacZ A M155： TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定 遗传。基因型：F- , mcrAA (mrr-hsd RMS-mcrBC) ,© 80 , lacZ A M15 AlacX 74 , recA1 , ara A 1

4、39A (a-lau)7697 , galU , galK , rps , (Strr) endA1 , nupG 6： HB101 菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44, hsdS20(rB-mB ) , recA13 , ara 14 , proA2 , lacY1 , galK2 , rpsL20 , xyl-5 , mtl-1 , leuB6 , thi-17： M110 或 SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有 Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以 在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧 啶C-5位置

5、上引入甲基。 常用的菌株都会产生dam,dcm,从而受到甲基化的影响部分限制性内切酶对甲基化的 DNA不能切割，如Fbal和Mbol等，一 般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。大多数酶切位点的甲基化不影响切割，而有些会影响，如Xbal, Bell等。 而且甲基化只发生在特定序列，以Xbal为例，只有在位点序列旁出现GA或TC, 该Xbal位才会被甲基化。而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法：(1) 选用上述酶的同功酶，女口 Sau3AI, DNA识别切割位点与Mbol相 同；但不受甲基化影响；(2) 利用甲基化酶缺失的受体细胞进行 DNA的制备，女口 E.eoli JM110 和链霉菌等，

6、前者Dam和Dem甲基化酶已敲出，而后者细胞内本就没有甲基化 酶，从这些细胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。8 E.eoli JM110要排除dam,dcm甲基化的影响，需要用特定的 dam-,dcm-的菌株，女口 JM110如果由JM110或SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒，则不会被 甲基化.各种感受态细胞的区别 用途 特征Xl1-Blue 菌株基因型：en dA1 gyrA96( naIR) thi-1 reeA1 relAI lac gl nV44 F'T n10 proAB+ laelq (lacZ)M15 hsdR17(rK mK+)。特点：具有卡那抗性、四环素抗性

7、和氯霉素抗性。用途：分子克隆和质粒提取。BL21(DE3)菌株基因型：F-ompT gal dem Ion hsdSB(rB- mB-)入(DE3 lael laeUV5T7 gene 1 indl sam7 nin 5)。特点：该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。 T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于 入噬菌体DE3区的laeUV5启动子，该 区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达。BL21(DE3)ply 菌株 基因型：F- ompT gal dem Ion hsdSB(rB- mB-)入(DE3) pLysS(cmR)

8、特点：该菌株带有pLysS,具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达DH5a菌株基因型：F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG 80dlacZ M15 (lacZYAargF)U169, hsdR17(rK-,入-特点：一种常用于质粒克隆的菌株。其80dlacZ M1基因的表达产物与pUC载体编码的伕半乳糖苷酶氨基端实现a互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1 的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质

9、粒DNA的提取。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。JM109菌株基因型：endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ (lacproAB) e14- F traD36 proAB+ lacIq lacZ M15hsdrRK+)rK特点：部分抗性缺陷，适合重复基因表达，可用于M13克隆序列测定和蓝白斑 筛选。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。DH10B菌株基因型：F- mcrA (mrrhsdRMS-mcrBC) 80dlacZ M15X lacX74 endA1 recA1 deoR (ara,leu)7697 araD139 galU gal

10、K n upG rpsL-入The most widely used E. coli strain for BAC cloning is DH10B 。host for pUC and other -complementation vectors; pBR322useful for generating genomic libraries containing methylated cytosine or adenine residues useful for plasmid rescue proceduresELECTROMAX DH10B T1 CELLS说明：DH10B细胞是高转化效率的

11、E. coli，可以完美应用于大多数实验应用。DH10B基因型具有以下特点：? lacZ M1用于重组克隆的蓝/白斑筛选?消除了 mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS限制系统，允许构建更多具有代表性的 基因组文库(1,2)? en dA1突变，可以增加质粒产量和数量?高效率转化大小为150 kb的质粒，用于产生cDNA或基因组文库DH10B?可以表达tonA的基因型，tonA能够提供对T1和T5噬菌体感染的抗性(DH10B? T1R)。DH10B?的基因型：F mcrA A-rmidRMS-mcrBC) © 80lacZ M15 lacX74 recA1 endA1 araD139 A (ara, leu)7697 galU galK入