红细胞计数检验.pptx

第二章/第一节红细胞检查,正常情况下，红细胞生成与破坏保持动态平衡，血液中红细胞数量保持在相对恒定的范围。,血液中红细胞数量可 通过红细胞计数获得,红细胞计数（red blood cell count, RBC）,测定单位体积血液中红细胞的数量 诊断贫血及红细胞增多的指标之一 红细胞计数的方法,显微镜计数法 血液分析仪法,显微镜计数法（重点） 用等渗液稀释血液后，滴入血细胞计数板，计数一定范围内的红细胞，经换算得每升血液中的红细胞数。,检测原理,RBC未排除 白细胞数量影响,10ul末梢血或EDTA抗凝静脉血 加入2ml等渗液中，混匀 混悬液充入改良牛鲍计数板 高倍镜下计数中央大方格的四角及中央五个中方格内的红细胞总数A。 换算？,操作,RBC/L=（A/5)2510106200 =(A/100)1012,Neubauer计数盘,血液分析仪法,采用电阻抗法或激光检测法,方法学评价,质量保证（显微镜法）,技术误差 仪器误差 分布误差,显微镜法红细胞计数误差来源有三个,技术误差,参考值,成年男性：（4.095.74）1012/L 成年女性：（3.685.13）1012/L 新生儿：（5.26.4）1012/L 婴儿： （4.04.3）1012/L 儿童： （4.04.5）1012/L,RBC存在年龄 与性别的差异,临床意义,RBC参考值上限，RBC增多 RBC参考值下限，即贫血,生理性变化,病理性变化,生理性增多,生理性缺氧引起,6个月-2岁婴儿,相对性增多：见于呕吐、高热等引起暂时性血液浓缩。通过补液，血容量恢复正常，红细胞增多即消失。,绝对性增多： 继发性增多，由EPO代偿性或非代偿性增高引起。 原发性增多，红细胞系统异常增殖性疾病。,病理性增多,病理性减少（贫血）,生成减少,破坏过多,血管丢失,贫血：红细胞计数、血红蛋白测定或血细胞比容低于参考值下限。 病因学分类,红细胞生成减少,骨髓造血功能减退或衰竭：再生障碍性贫血。,造血物质缺乏或利用障碍：肾性贫血、缺铁性贫血，巨幼细胞性贫血。,细胞内在缺陷（遗传性缺陷） 膜缺陷、酶缺陷、血红蛋白异常致红细胞寿命缩短。 细胞外在异常（获得性因素） 免疫性因素：输血血型不合、新生儿溶血病等。 非免疫性因素：机械损伤、化学物理因素、寄生虫及脾亢等。,红细胞破坏过多,血液丢失：急、慢性失血性贫血,外伤引发的出血,血红蛋白（hemoglobin，Hb ）,在有核红及网织红内合成 是红细胞胞浆内的呼吸载体蛋白 Hb在成熟红细胞内分布特点（近胞膜处多，中心部少）决定了红细胞的双凹圆盘形状 合成速度受促红细胞生成素（EPO）与雄激素调节,Hb （四聚体）,珠蛋白,血红素,2条链,2条非链,原卟啉,铁原子,血红蛋白组成,血液中血红蛋白的存在形式,存在形式 所占比例 还原血红蛋白（Fe2+ ） 正常成人99% 氧合血红蛋白 碳氧血红蛋白 硫化血红蛋白 高铁血红蛋白（Fe3+ ） 1%,Hb测定即测定血液中各种血红蛋白的总浓度。,血液的物理特性：比重法，折射仪法 Hb的分子组成：全血铁法 Hb与O2可逆性结合：血气分析法 Hb衍生物光谱特点：HiCN，SDS-Hb等,检测原理,HiCN法检测原理,红细胞被溶血剂破坏后，高铁氰化钾可将各种血红蛋白（SHb除外）氧化为高铁血红蛋白（Hi），后者与试剂中的 CN - 结合生成棕红色的氰化高铁血红蛋白（HiCN）。在540nm处测定HiCN的吸光度，直接换算Hb浓度或在标准曲线上查得Hb浓度。,20ul血液加入5ml转化液中，充分溶血转化后，以转化液调零，测定标本（HiCN）在540nm的吸光度A。 计算,操作,直接计算（符合WHO标准的分光光度计） Hb A6445844000251A367.7 以 HiCN参考液绘制标准曲线，利用吸光度 A在标准曲线上查出Hb浓度,方法学评价,缺点：试剂有毒、高WBC造成试剂混浊 、HbCO 转化慢、不能测SHb。,HiCN测定法（参考方法）,优点：操作简单 ，反应速度快，产物稳定，便于质控。,方法学评价,优点：操作简单 ，试剂无毒，结果准确，重复性好 。,缺点：SDS质量差异大；消光系数未定，不能直接计算Hb浓度；不能测定SHb ；SDS破坏白细胞。,SDS-Hb测定法（ HiCN替代方法）,方法学评价,优点：试剂简易无毒、呈色稳定、准确性与精密性较高。,缺点：575nm波长比色，血液分析仪上应用受限，不能转化HbF。,AHD575测定法,方法学评价,优点：准确度、精密度较高。,缺点：试剂有毒、HbCO 转化慢。,HiN3测定法,方法学评价,优点：溶血强，不破坏白细胞，适用于血液分析仪。,缺点：精密度、准确度低。,CATB测定法,质量保证（比色法）,标本：引起血清浊度增加的因素致Hb假性增高。 器材及试剂：定期校准仪器，选用合格的微量采血管和刻度吸管，保证试剂质量。 技术操作：控制技术误差。 废弃物：妥善处理废液。,参考值,成年男性：131172 g/L 成年女性：113 151 g/L 新生儿：180190 g/L 婴儿： 110120 g/L 儿童： 120140 g/L 老年（70岁）：男性 94122 g/L 女性 87112 g/L,Hb存在年龄 与性别的差异,临床意义（同红细胞计数）,判断贫血程度优于红细胞计数 临床应用注意事项 Hb和RBC不一定正确反应全身红细胞总容量的变化。 某些贫血， Hb和RBC减少程度可不一致，同时测定Hb和RBC，对诊断更有意义。,贫血程度的判定,分度 Hb含量 症状 轻度： 91g/L正常值下限 症状轻微