VASH-VEGF-CD31通路对肺腺癌血管生成作用的研究开题报告.ppt

,姓名：,开题报告,之,VASH-VEGF-CD31通路对肺腺癌血管生成作用的研究,姓名：张长洪 专业：内科学（呼吸） 导师：张志华 教授 研究方向：肿瘤血管生成 学科点：河北北方学院附属第一医院 开题时间：2014.3,世界的发病情况,2,中国癌症的发病及死亡情况,3,提纲,4,拟解决的问题,可行性分析,创新性,计划进度、预期结果,经费落实情况及使用计划,国内外研究现状及意义,5,血管生成,6,血管生成,7,肿瘤血管生成的调节因子,8,VASH (Vasohibin, 血管新生抑制蛋白),2004年,Watanabe,DNA微阵分析实验,发现,血管内皮生长因子诱导人的脐静脉内皮细胞基因表达谱,VASH-1与 VASH-2，两者52.5%的同源氨基酸序列,方法,诱导剂,分类,VASH-1，位于人染 色体14q24.3，由365 个氨基酸组成，在C末 端有一簇碱性氨基酸， 但此序列中缺乏经典 的内质网分泌信号序 列，也不与内质网标 记蛋白共定位，为非 传统的蛋白主要由血 管内皮细胞分泌。,VASH-2，位于 染色体1q32.3 上，由355个氨 基酸组成。在 内皮细胞上表 达很低，目前 研究显示主要 由坏死边缘区 的单核细胞分 泌。,VASH,VASH-1的作用：通过血管内皮生长因子和纤维细胞生长因子的负反馈作用，抑制血管生成。,VASH-2的作用，实验表明：具有促血管生成的作用，是否与血管内皮生长因子有关，说法不一，具体机制不详。,VASH在肿瘤血管生成中最新的报道,王启志（2012.4） 肝癌中研究表明：VASH-1与血管内皮因子A（Vascular endothelial growth factor A,VEGF-A）、CD34具有相关性，与肝癌侵袭、转移密切相关。 王志娜等（2013.7） 对肝癌组织采用免疫组化的方法，结果表明：VASH-1与缺氧因子 1（hypoxia inducible factor 1 alpha，HIF-1）在病变组织中两者的表达成正相关，HIF-能够诱导VEGF的分泌。,12,VASH在肿瘤血管生成中最新的报道,Yazdani S等（2013.8） 研究表明：肺癌中vasohibin-1/CD31-阳性率代表新生血管在肺癌中的地位，但没有组织病理性的差异性，但血管成熟程度鳞癌低于腺癌，考虑可能是在抗血管生成治疗中，鳞癌副作用较多的原因。 Koyanagi T等（2013.12） 研究表明：肝癌中的VASH-2过表达时，核因子（Nuclear factor kb ，NF-kB）上调。 Koyanagi T等在对卵巢癌研究中限制VASH-2表达，有助于血管的正常化。,13,川芎嗪,川芎嗪（tetramehtylpyrazine，TMP）是从中药川芎中分离出来的一种生物碱，即四甲基吡嗪。随着研究的不断深入，在抗肿瘤方面有新的突破。研究显示：1.在不同的肿瘤部位，抗肿瘤血管生成的机制不同，比如：肺癌-环氧化酶2 （Cyclooxygenase -2，COX-2）、大肠癌-缺氧因子 1（hypoxia inducible factor 1 alpha，HIF-1 ）；2.具有直接杀伤癌细胞的作用。川芎嗪与VASH家族关系有待进一步研究。,14,顺铂,顺铂属细胞周期非特异性药物，具有细胞毒性，可抑制癌细胞的DNA复制过程，并损伤其细胞膜上结构，有较强的广谱抗癌作用。临床用于卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、肺癌、鼻咽癌、食道癌等多种实体肿瘤均能显示疗效。两者联合是否通过作用于VASH具有协同抗肿瘤作用。,15,研究意义,通过对肺癌组织中VASH在血管生成中的 作用，有助于深入了解此肿瘤的发生发展机制。,可作为早期预测血管转移的参考指标，同时也为预防肿瘤提供理论依据。,川芎嗪与顺铂的联合作用于VASH-VEGF-CD31通路，有助于指导临床用药。,NO 1,NO 2,NO 3,研究内容及方案,研究内容：本实验通过使用LLC(Lewis Lung Cell)注射C57BL/6小鼠，建立肺腺移植瘤癌模型，空白对照组与腹腔注射用药组，脱颈处死，取出瘤组织，采用透射电镜、免疫组化、蛋白印迹技术，观察药物作用前后肿瘤细胞形态学的改变，检测VASH-1、HIF-、VEGF、CD31及其VASH-2、NF-kB、VEGF、CD31在肺癌模型中的表达情况。,17,细胞培养，建立肺腺癌移植瘤模型,待肿瘤直径8mm左右，分成空白对照组与腹腔用药组，2周,空白对照组,腹腔注射用药4组,生理盐水组,川芎嗪组,顺铂组,川芎嗪+顺铂组,脱颈处死，取出瘤组织，标本制备,整理数据，统计分析，撰写论文,免疫组化,蛋白印迹,透射电镜,技术路线,检测VASH-VEGF-CD31通路在肺腺癌血管生成中的作用,川芎嗪对以上通路的作用,川芎嗪联合顺铂协同对以上通路的作用,拟解决的问题,VASH在肺癌及其它肿瘤中有报道,实验中心有条件、有技术支持,查阅文献，了解国内外现状,可行性分析,前期发表肿瘤血管生成论文数篇,成功建立肺腺癌移植瘤模型,创新性,VASH家族在肺腺癌各 自调节血管生成的初步研究,川芎嗪对 VASH家族 影响,川芎嗪联合顺铂对 VASH家族的影响,国内关于 VASH家族 在肿瘤血管 中作用报道 相对较少,计划进度与预期进展,计划进度 2013年3月-2013年10月 查找文献。 2013年11月-2014年2月 完成预实验。 2014年3月-2014年7月 完成实验。 2014年8月-2014年10月 整理数据，撰写论文。 预期进展 2013年3月-2013年10月 查阅国内外相关文献，了解国内外最新研究现状。 2013年11月-2014年2月 完成预实验 ，掌握相关技术方法。 2014年3月-2014年7月 完成实验。 2014年8月-2014年10月 整理数据，撰写论文。,23,实验图片,实验图像,26,实验图像,四组小鼠腹腔注射用药后体重变化情况,四组小鼠腹腔注射用药后肿瘤体积变化情况,预期结果,预期发表论文1-2篇 预期理论结果： 1. 阐述VASH-1与VASH-2在肺腺癌中血管生成的可能机制。 2.川芎嗪对VASH血管生成通路的影响，间接对VASH起作用，证明通路的正确性。 3