环境空气中尼古丁的高效液相色谱测定方法.doc

环境空气中尼古丁的高效液相色谱测定方法摘要：目的建立高效液相色谱(HPLc)测定环境空气中尼古丁的方法。方法样品通过反相C18柱(15046mm)分离，采用磷酸二氢钾乙腈溶液为流动相(流速为lmlmin，采用等度洗脱)，通过紫外检测器检测(波长为260nm)。结果该方法标准曲线的相关系数为099993，工作曲线的相关系数为09995，检出限为40310-3ug/ml，测定下限为31210-2ug/ml，对低、中、高3浓度尼古丁加标回收率为874、885、908，对低、中、高3浓度尼古丁测定的相对标准偏差分别为088、052、11，对低、中、高3浓度尼古丁的解吸率测定分别为923、943、946，以及采样器中样品稳定性实验，表明11d内样品均稳定。结论：该方法灵敏度高，重现性好，操作简便，仪器易普及。关键词：高效液相色谱：环境卒气中尼古丁；检测 目前国内外尼古丁的测定方法有很多种，例如可以采用LCMS、LCMSMS、GCMS的方法但由于这些方法中仪器较昂贵，仪器保有量很低，无法在基层单位推广。由于用高效液相色谱检测尼古丁的方法具有灵敏度高重现性好且仪器易普及的特点。适用于实验室推广使用。因为本方法不仅可以监测环境空气中尼古丁的浓度。还可以测定人体生物样品如尿液、唾液和头发中的尼古丁含量从而可以比较准确地评价人群的暴露水平。为制订科学的控烟措施及评价控烟效果提供技术支持。材料与方法1方法原理环境中气态尼古丁采用被动式采样器采样采样后将4NaHS04-5甘油溶液浸渍的玻璃纤维滤膜经氢氧化钠洗脱和正庚烷萃取在萃取液中加盐酸混匀，用氮吹仪吹至近干，用流动相定容。使用C18反相色谱柱分离紫外检测器检测，检测波长为260nm，以保留时间定性，以峰面积定量。2实验仪器、材料和试剂21实验仪器和材料LC7000高效液相色谱仪。快速混匀器，超声波清洗器、氮吹仪，玻璃纤维滤膜(d=42mm)，被动式采样壳体(由中疾控提供)，10ul和50ul微型注射器，15ml样品瓶23实验试剂尼古丁(标准品)，磷酸二氢钾(分析纯)，磷酸(分析纯)，盐酸(分析纯)，乙腈(色谱纯)，庚烷磺酸钠(色谱纯)，正庚烷(色谱纯)，甘油(分析纯)，氢氧化钠(分析纯)。3样品采集31尼古丁吸收液的配置准确称量2009g NaH-S04和250g甘油，用纯水定容于500ml，配制成4NaHS04-5甘油的尼古丁吸收液。32滤膜制备选择合格滤膜对光检查无针孔或折缝；将玻璃纤维滤膜在马弗炉中450烘烤2h放入干燥器中冷却至室温：从干燥器中取出玻璃纤维滤膜。用尼古丁吸收液浸渍05h后取出置于干燥器中晾干备用。33采样器安装被动式采样器由壳体、挡风层和吸收层组成。壳体包括前盖、压环、托板和底座，挡风层为核孑L滤膜和涤纶纱网吸收层为浸渍尼古丁吸收液的玻璃纤维滤膜。安装好采样器后，放入铝箔袋中。封口。4实验分析步骤41流动相的制备准确称取109g磷酸二氢钾，用超纯水溶解至接近于lL，用磷酸调节pH值为3，定容至lL，准确加入00082g庚烷磺酸钠，混匀，通过045um过滤膜过滤，制得的磷酸二氢钾溶液与乙腈比例为9：l混匀。42色谱条件色谱柱C18柱150mm46mm 5um 柱温为25，SPD检测器，检测波长为260nm流动相流速为1mlmin。43标准溶液制备准确称取101mg(99的尼古丁)于10ml容量瓶中，加入流动相定容，超声3min。配成1.0ug/ul的尼古丁(1)液，取(1)液1ml于10ml容量瓶中，用流动相定容，得0.1ug/ul的尼古丁(2)液。44尼古丁标准曲线的制备分别移取尼古丁(2)液5ul、10ul准确加入1ml流动相，混匀，得05ug/ml、lug/ml。又分别移取尼古丁(1)液2u1、4ul、8ul、16ul准确加入1ml流动相，混匀，得2ug/ml、4ug/ml、8ug/ml、16ug/ml标准系列，得到尼古丁的标准系列分别进样5ul进行分析，各点进样3次，各点对应峰面积取平均值以标准系列质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制峰面积和浓度的标准曲线。45尼古丁工作曲线的制备分别移取尼古丁(2)液5ul、10ul，移取尼古丁(1)液2ul、4ul、8ul、16ul置于制备好的玻璃纤维滤膜上，分别放于10ml比色管中各加入50m1 1.5molL的Na0H和准确加入20ml正庚烷充分混匀后在恒温65超声30min，取出于漩涡混匀器上混匀3min取正庚烷层(18ml)，加l0“l盐酸，65超声混匀3 min，漩涡2min，氮吹近干，用lml流动相定容65水浴超声3min漩涡2min彻底解析出尼古丁。分别进样5ul进行分析各点进样3次，各点对应峰面积取平均值。以标准系列质量浓度为横坐标峰面积为纵坐标，绘制峰面积和浓度的工作曲线。46样品处理将样品取回后取出内装的玻璃纤维滤膜，置于10.0ml比色管中各加入5ml 1.5molLNa0H和准确加入20ml正庚烷充分混匀后在恒温65超声30min取出于漩涡混匀器上，混匀3min，取正庚烷层(18ml)，加lOul盐酸65cc超声混匀3min，漩涡2min，氮吹近干。用1ml流动相定容。65水浴超声3min漩涡2min彻底解析出尼古丁进样5ul测定，根据尼古丁工作曲线的回归方程计算膜上的尼古丁含量。采样放置某办公室4d，取回采样器