生物实验常用溶液的配制(整理版).doc

生物实验常用溶液的配制一、DNA电泳相关：1、DNA电泳缓冲液：（1）Tris-乙酸（TAE）缓冲液：TAE较为常用，且价格低，但其缓冲能力较弱。所以TAE电泳需要蠕动泵使两极贮液槽进行液体循环，而且TAE需要经常更新；且要加入EDTA，目的在于鳌合二价离子，抑制DNase，以保护DNA。 TAE使用液：1：40mmol/L Tris-乙酸 1mmol/L EDTA TAE贮存液（每L）：50：242g Tris碱 57.1ml 冰乙酸100ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）（2）Tris-硼酸（TBE）缓冲液： TBE使用液：0.5：0.045mol/L Tris-硼酸 1mmol/L EDTA TBE贮存液（每L）：5： 54g Tris碱 27.5ml 硼酸20ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）（3）Tris-磷酸（TPE）缓冲液： TPE使用液：1：90mmol/L Tris-磷酸 2mmol/L EDTA TPE贮存液（每L）：10：108g Tris碱 15.5ml 85%磷酸40ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）2、1%（线性DNA分子大小为400-6000）琼脂糖凝胶DNA电泳操作过程：制胶：按要求取1g琼脂糖加入1TAE（或0.5TAE）电泳缓冲液100ml，置于三角瓶中，在沸水浴或微波炉中加热至琼脂糖溶解（一般中低火温，3-5min即可）；溶液冷却至60，加入EB至0.5g/ml（2-3ml即可）,充分混匀；迅速倒入备好的胶模中；凝胶完全凝固后，小心移去梳子和封口胶带，将凝胶放入电泳槽中；加入能没过胶面1mm深的电泳缓冲液（TAE）；DNA样品与加样缓冲液（溴酚蓝）混合后，用微量移液吸头加样；盖上电泳槽并通电，使DNA向正极移动（黑极红极），1-5V/cm（80V电压左右）进行电泳（30min左右）；电泳完毕，切断电源，取出凝胶于紫外投射光源下观察并拍照。二、12 SDS-PAGE 的相关溶液1、5加样缓冲液：10% w/v SDS，10 mM DTT或-巯基乙醇，20% v/v甘油，0.2M Tris-HCl pH 6.8，0.05% w/v 溴酚蓝。 （注意：将不含DTT的1SDS凝胶上样缓冲液置于室温下储存，临用前从1mol/L DTT储液中添加到上述缓冲液中。）5Sample Buffer：10% w/v SDS10 mmol/L Dithiothreitol,or beta-mercapto-ethanol 20% v/v Glycerol 0.2 mol/L Tris-HCl pH 6.80.05% w/v Bromophenolblue另：2SDS 上样液缓冲液:100mL溶液中含0.5mol/L Tris-HCl(pH=6.8) 20mL , SDS 4 g ,甘油20 mL , 溴酚蓝0.2 g ,DTT3g;2、1电泳缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 8.8，200 mM 甘氨酸，0.1% w/vSDS。1Running Buffer25mmol/L Tris-HCl pH 8.8200250mmol/L Glycine（电泳级）（pH 8.3）0.1% w/v SDS可以配成5贮存液，在900ml去离子水中溶解15.1gTris碱和94g甘氨酸，然后加入50ml 10%（m/v）电泳级SDS的贮存液，用去离子水补至1000ml即可。3、分离胶配方：H2O 10.5，1.5 M Tris-HCl pH8.8 7.5，20% w/v SDS 0.15，30% 丙烯酰胺 / 0.8% 亚甲双丙烯酰胺(/w/v) 12.0，10% w/v 过硫酸铵 15，TEMED 0.02（单位：mL，总体积25 mL）。 注：过硫酸铵会缓慢分解，故应每周新鲜配制，可用去离子水配制少量10%（m/v）储存液于4保存。Running Gel Solution (mL) ： H2O 10.2 1.5 mol/L Tris-HCl pH8.8 7.5 20% SDS (w/v) 0.15Acrylamide/Bis-acrylamide (30%/0.8% w/v) 12.0 10% ammonium persulfate (w/v) 0.15 TEMED 0.02 4、积层胶配方(4% 丙烯酰胺)：H2O 3.05，0.5 M Tris-HCl pH6.8 1.25，20% w/v SDS 0.025，30% 丙烯酰胺 / 0.8% 亚甲双丙烯酰胺(/w/v) 0.65，10% w/v过硫酸铵 0.025，TEMED 0.005（单位：mL，总体积5 mL）。Stacking Gel Solution (4% Acrylamide) (mL)：H2O 3.075 0.5 mol/L Tris-HCl pH6.8 1.25 20% SDS (w/v) 0.025Acrylamide/Bis-acrylamide (30%/0.8% w/v) 0.67 10% ammonium persulfate (w/v) 0.025 TEMED 0.0055、考马斯亮蓝染色液：0.25 g考马斯亮蓝R250溶解于90 mL甲醇：水（1:1 v/v）和10 mL冰乙酸的混合液中，过滤除去颗粒状物质。（或考马斯亮蓝R-250 0.5g ,乙醇250mL ,乙酸110mL ,水740mL ,混匀;）另：0.2考马斯亮兰R-250染液：甲醇 46.5ml醋酸 7.0ml考马斯亮兰 0.2g蒸馏水 加至100ml6、脱色液：170 mL甲醇,加70 mL冰乙酸，加蒸馏水定容至1000 mL。三、蛋白质纯化的相关溶液1、超声破菌缓冲液：20 mmol/L Tris-HCl pH8.0、0.5 mol/L NaCl、1 mmol/L EDTA、1 mg/mL溶菌酶 2、包涵体洗涤缓冲液：20 mmol/L TrisHCl pH 8.0，0.5 mol/L NaCl，2 mol/L尿素，2 Triton。 3、包涵体溶解缓冲液：20 mmol/L TrisHCl pH 8.0，0.5 mol/L NaCl，8 mol/L尿素，0.2 mmol/L DTT或100 mmol/L -巯基乙醇，2Triton。4、Ni2+亲和层析柱纯化缓冲液：ReagentsBinding BufferWash BufferElute BufferStrip BufferCharge BufferTris-HCl pH7.920 mM20 mM20 mM20 mMImidazole5 mM60 mM1MNaCl0.5 M0.5 M0.5 M0.5 MEDTA100 mMNiSO450 mM结合缓冲液（pH7.8）：20mmol/L 磷酸钠500mmol/L NaCl洗涤缓冲液（pH6.0）：20mmol/L磷酸钠500mmol/LNaCl咪唑洗脱缓冲液（pH6.0）：20mmol/L 磷酸钠500mmol/L NaCl在洗涤缓冲液（pH6.0）中加入适量3mol/L咪唑分别配成10mmol/L、50mmol/L 、100mmol/L和150 mmol/L的咪唑洗脱缓冲液。Triton X-100(10% v/v)酶和缓冲液：DNase(1mg/ml)溶菌酶RNase(1mg/ml)5、2Triton X100溶液： 量取2mlTriton X一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液，加M缓冲液98ml即可。6、50PEG(聚乙二醇Polyethyleneglycol mwl500)：称取0.5克PEG，用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化，加入等量37予热的MEM培养液，混匀，保温在37水浴中待用。7、1SDS(十二烷基硫酸钠Sodium dodecyl sulfate,SDS)： SDS 10g 45乙醇 100ml8、1mol/LTris(三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL)pH7.8： Tris 12.114g 蒸馏水 lOOml先将Tris溶于少量蒸馏水，用HCI调pH至7.8，然后加水至100ml四、PH缓冲液的配制：（1）磷酸缓冲盐溶液（PBS）： 137mmol/L NaCl2.7mmol/L KCl10mmol/L Na2HPO42mmol/L KH2PO4用800ml蒸馏水溶解8g NaCl，0.2g KCl，1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4。用HCl调节溶液的PH值至7.4，加水至1L。分装后在15psi（1.05kg/cm2）高压蒸汽灭菌20min，或过滤除菌，保存于室温。（注：PBS是一种通用试剂，值得指出的是上述列出的配方缺乏双价阳离子，如果需要，PBS可以补加成1mmol/L CaCl2和0.5mmol/L MgCl2） 0.01molLPBS(磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer Saline，PBS)，pH7.2：A：0.2molL磷酸氢二钠液(甲液)： NaH2PO412H2O 35.814g双蒸水 加至500mlB：0.2molL磷酸二氢钠液(乙液): NaH2PO42H2O 15.601g 双蒸水 加至500ml取甲液36ml，乙液14ml和NaCl 8.2克，加双蒸水至1000ml。混匀待完全溶解分装，经高压灭菌后保存于4冰箱备用。 1/15 mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS)：甲液：1/15 mol/L Na2HPO4溶液Na2HPO4 9.465g蒸馏水 加至1000ml乙液：l/15 mol/L KH2PO4溶液KH2P04 9.07g蒸馏水 加至1000m1分装在棕色瓶内，于4冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:pH甲液ml乙液mlpH甲液ml乙液ml4.925.295.595.916.246.476.646.811.02.55.010.020.030.040.050.099.097.595.090.080.070.060.050.06.987.177.387.738.048.348.678.1860.070.080.090.095.097.599.0100.040.030.020.010.05.02.51.00（2）10Tris EDTA(TE): pH 7.4:100mmol/L Tris-Cl(pH7.4)10mmol/L EDTA(pH8.0)pH 7.6:100mmol/L Tris-Cl(pH7.6)10mmol/L EDTA(pH8.0)pH 8.0:100mmol/L Tris-Cl(pH8.0)10mmol/L EDTA(pH8.0)分装后在15psi（1.05kg/cm2）高压蒸汽灭菌20min，保存于室温。（3）Tris-Cl（1mol/L）: 用800ml蒸馏水溶解121.1gTris碱，加浓盐酸调pH 至所需值。 pH HCl 7.4 70ml 7.6 60ml 8.0 42ml 应使溶液冷至室温后，方可最后调定pH 值。加水定容至1L。分装后高压蒸汽灭菌。如果1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃。并使用质量更好的Tris。Tris溶液的pH 值因温度而异，温度每升高1，pH 值大约降低0.03单位，0.05mol/L溶液在5，25和37时的pH 值分别为9.5，8.9和8.6。（4）Tris缓冲盐溶液（TBS）：用800ml蒸馏水溶解8g NaCl，0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚红并用HCl调pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L。分装后在15 psi（1.05 kg/cm2）高压下蒸汽灭菌20min，保存于室温。五、常用缓冲液配制：（1）碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液贮备液A：0.2 mol/L碳酸钠（Na2CO3H2O 24.8g配成1000ml）；贮备液B：0.2 mol/L碳酸氢钠（NaHCO3 16.8g配成1000ml）。x ml A液 + y ml B液稀释至200mlpHxypHxy9.24.046.010.027.522.59.37.542.510.130.020.09.49.540.510.233.017.09.513.037.010.338.514.59.616.034.010.438.511.59.719.530.510.540.39.59.822.028.010.642.57.59.925.025.010.745.55.0（2）磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液贮备液A：0.2 mol/L磷酸二氢钠（NaH2PO3H2O 27.6g或NaH2PO32H2O 31.21g配成1000ml）；贮备液B：0.2 mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO32H2O 35.61g或Na2HPO312H2O 71.64g配成1000ml）。x ml A液 + y ml B液稀释至100mlpHxypHxy5.793.56.56.945.055.05.892.08.07.039.061.05.990.010.7.133.067.06.087.712.37.228.072.06.185.015.07.323.077.06.281.518.27.419.081.06.377.522.57.516.084.06.473.526.57.613.087.06.568.531.57.710.089.06.662.537.57.88.591.56.756.643.57.97.093.06.851.049.08.05.394.7（3）Tris-HCl缓冲液贮备液A：0.2 mol/L三羟甲氨基烷（Tris-ydroxy methyLamino methanne,C4H11NO3，24.2g配成1000ml）；贮备液B：0.2 mol/L盐酸（浓HCl 17.1ml配成1000ml）。50ml ml A液 + x ml B液稀释至200mlpHxpHxpHx7.244.28.026.88.88.17.141.48.221.99.05.07.638.48.416.57.832.58.612.2（4）柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液贮备液A：0.1 mol/L柠檬酸（C6H8O7，19.21g配成1000ml）；贮备液B：0.1 mol/L柠檬酸钠（C6H5O7Na32H2O 29.41g配成1000ml）。x ml A液 + y ml B液稀释至100mlpHxypHxy3.046.53.54.823.027.03.243.76.35.020.529.53.440.010.05.218.032.03.637.013.05.416.034.03.835.015.05.613.736.34.033.017.05.811.838.24.231.518.56.09.540.54.428.022.06.27.242.84.625.524.5（5）醋酸-醋酸钠缓冲液贮备液A：0.2 mol/L醋酸（冰醋酸11.55ml稀释至1000ml）；贮备液B：0.2 mol/L醋酸钠（C2H2O2Na 16.4g或C2H2O2Na3H2O 27g配成1000ml）。x ml A液 + y ml B液稀释至1000mlpHxypHxy3.646.33.74.820.030.03.844.06.05.014.835.24.041.09.05.210.539.54.236.813.25.48.841.24.430.519.55.64.845.24.625.524.5六、细胞培养和细胞融合溶液：1、0.25胰蛋白酶-0.02EDTA混合消化液： 胰蛋白酶(Trypsin)粉 0.25g EDTA粉 20.0mg 0.01molL PBS 100ml 先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37水浴中1小时左右(待彻底溶解，液体呈透明为止)，用G5抽滤，分装置4冰箱中保存。2、Hanks液：（1）原液原液甲： NaCl 160g KCl 8g MgSO47H2O 2g MgCI26H2O2g 溶于800ml馏水中。 CaCl2(无水)2.8g 溶于100ml蒸馏水中。 将两种液体混合后，加水至1000ml用滤纸滤过，再加2ml氯仿防腐，置4冰箱备用。原液乙： Na2HPO412H2O 3.04g KH2PO4 1.2g 葡萄糖 20.0g 溶于800ml蒸馏水中，用滤纸过滤，然后加0.5酚红80ml，再加水至1000ml，最后加入2ml氯仿防腐，置4冰箱备用。（2）使用液甲乙两液各1份，双蒸水18份，混匀分装包扎好瓶口，经10磅15分钟高压灭菌后置4冰箱中保存。使用时用5.6NaHCO3调pH值到所需要求。3、LB培养基（Luria-Bertani培养基）：每升培养基含有：细菌培养用胰化蛋白胨（bacto-trytone） 10g细菌培养用酵母提取物（bacto-yeast extract） 5g氯化钠（NaCl） 10g在950ml重蒸水中分别加入上述组分，摇动容器直至溶质完全溶解，用5mol/L氢氧化钠（NaOH）（约