高效毛细管电泳法测定利培酮的含量.doc

高效毛细管电泳法测定利培酮的含量李志伟收稿日期作者简介：李志伟（1977-），男，汉族，河北唐县人，主要从事药物分析和分离材料的研究。，霍云霞，刘佳，于奕峰 河北科技大学 化学与制药工程学院 河北 石家庄 050018摘 要：目的 建立利培酮原料中主药的含量测定方法。方法 采用高效毛细管电泳法测定。以50mmol/L，PH=6.5的磷酸盐缓冲液为电泳介质，未涂层石英毛细管（75m78.5cm，有效长度70cm）为分离通道，液体压差进样，（进样高度100mm，进样25s），分离电压为15kV，检测波长280nm，操作温度30。结果 利培酮在0.20mg/ml2.0mg/ml范围内呈线性关系良好，r=0.9995。加样回收率为98.87%，RSD为1.084%（n=5）。结论 该方法快速简便，灵敏度高，重现性好，可用于利培酮原料的含量测定。关键词：毛细管电泳 利培酮 含量测定Determination of Risperidone By High Performance Capillary Zone ElectrophoresisLI Zhi-wei1, HUO Yun-xia, LIU Jia, YU Yi-feng(1.College of Chemical and Pharmaceutical Engineering, Hebei University of Science and Technology, Shijiazhuang 050018, China）ABSTRACT:AIM A method for determination of Risperidone in Raw materials was established. METHODS. A HPCE apparatus equipped with a untreated fused-silica capillary (75m78.5cm, 70cm effective length). Liquid height of injection was 100mm for 25 seconds, and the running voltage was 15kV for the separation. The wavelength of detector was 200nm and the running temperature was 30. RESULTS The linear range of Risperidone was 0.20mgmL-12.0mgmL-1(r=0.9995). The average recovery was 98.87%, relative standard was 1.084%(n=5). CONCLUTION The method is simple, rapid and sensitive with good repeatability, and can be used for content determination of Risperidone.KEY WORDS: HPCE Risperidone content determination利培酮（Risperidone）是一种新型的非经典抗精神病的药物，其结合了血清素（5-HT2）和多巴胺（D2）受体拮抗效应，在急性和慢性精神分裂症的治疗当中起到重要的作用。化学名称为3-2-4-(6-氟-1，2-苯并异恶唑-3-基)-1-呱啶基乙基-2-甲基-6，7，8，9-四氢-4H吡啶并1，2-a嘧啶-4-酮），结构式如图1所示：图1 利培酮结构式Fig.1 Molecular structure of Risperidone目前，利培酮的分析方法主要有反相高效液相色谱法（HPLC）1,2，液相色谱-质谱法3，紫外分光亮度法4,5，电化学法6。相对于上述方法，毛细管电泳是一种经济、快速、高效的分离分析方法，而采用毛细管电泳法测定利培酮的方法尚未见报道。本实验采用高效毛细管电泳法测定其含量，具有快速简便，准确度高等优点。1 仪器及试剂1.1 仪器 CL1020高效毛细管电泳仪，紫外检测器（北京彩陆科学仪器有限公司），AL-204电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司），PHS-3CPH计（上海精密科学仪器有限公司），KQ3200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。1.2 试剂 利培酮原料（自制，批号20080714），利培酮对照品（批号：100570，中国药品生物制品检定所），缓冲液和样品溶液均用0.45m滤膜滤过处理。水为二次水，试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 电泳条件 石英毛细管柱：75m78.5cm（有效长度70cm，未涂层），电泳介质为50mmolL-1，pH=6.5的磷酸盐缓冲液（使用前脱气），液体压差进样，（进样高度100mm，进样25s），分离电压为15kV，检测波长280nm，操作温度30。每次进样前依次用0.1mmolL-1NaOH冲洗柱1min，二次水冲洗3min，缓冲液冲洗3min。2.2 线性关系的考察 精密称取利培酮对照品50mg，用HCl溶液（9mLHCl-1000mLH2O）定容于25ml容量瓶中，摇匀，超声振荡10min作为储备液。分别取适量储备液配制为浓度分别为0.1 mgmL-1、0.2 mgmL-1、0.5 mgmL-1、1.0 mgmL-1、1.5 mgmL-1、2.0mgmL-1的待测液，用0.45m滤膜滤过，摇匀续滤液作为对照品溶液。在上述色谱条件和色谱系统下，依次进样，以利培酮的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，回归方程为：Y=25151.9478+978082.05532X，r=0.9995(n=6)。结果表明利培酮在0.2mg/ml2.0mgmL-1浓度范围内，其密度和峰面积呈良好的线性关系。2.3 精密度试验 取1.0mgmL-1的利培酮储备液，重复进样5次，测定峰面积，RSD值为0.72%。2.4 稳定性试验 精密称取利培酮原料25.00mg于25ml容量瓶中，加入HCl溶液15mL，超声振荡10min，补加HCl溶液至刻度，摇匀，用0.45m滤膜滤过，续滤液作为样品液。取1.0mg/mL的利培酮样品液，分别于0h、2h、4h、8h、24h进样，测定5次，RSD值为0.93%，样品液在24h内稳定。2.5 重现性试验 取同一批利培酮原料，平行测定5次，RSD值为2.63%，表明该方法重现性较好。2.6 回收率测定 精密量取利培酮原料样品5份，分别加入一定量的利培酮对照品，用HCl溶液定容于100mL容量瓶中，测定峰面积。结果见表1。表1 利培酮含量测定回收率检查结果Tab 1 Percent recovery of determination of Risperidone序号样品量g加入量g测得量g回收率%平均回收率%RSD%10.07020.03050.100198.0398.871.08420.07090.02970.099997.6430.06980.03010.1000100.3340.07030.03090.101099.3550.07100.02960.100398.992.7 含量测定 精密称取利培酮原料样品液和对照液一定量，注入电泳仪，测定峰面积。用外标一点法测得利培酮的含量为99.75%。3 讨论3.1 电压的确定 分离电压主要影响的分离电流和分析时间，试验中考察了分离电压分别为10 kV、15 kV、20 kV、25 kV，随着分离电压的增大，分析时间缩短，柱效增大，然而操作电流急剧增加，柱内的焦耳热增加，影响分离效果。为了在保证分离度的条件下，在较短的时间内获得最佳的分离效果，本实验选择了15 kV作为分离电压。3.2 缓冲液PH值的确定 本实验采用了磷酸盐、硼酸-硼砂、四硼酸钠3种缓冲液，发现磷酸盐对利培酮的分离效果较为理想。采用HPCE测定利培酮含量时，磷酸盐缓冲液的pH对分离有较大的影响。试验考察了缓冲液pH分别为2.0、4.0、5.0、6.5、7.0时利培酮的分离情况。随着缓冲液的pH值的升高，电渗流（EOF）增大，出峰时间缩短。当pH为6.5时，利培酮获得较好的分离。但当pH增大到7.0时，利培酮的峰形变差，出现拖尾现象。为了既获得良好的峰型，又能缩短分析时间，本试验选择缓冲液的pH值为6.5。4 结论在现今的药物分析中，HPCE比HPLC具有柱效高、分析速度快、进样体积小，易清洗等优点，而且HPCE更适合于直接分析水溶液的样品，不需消耗大量的高纯有机试剂，节省了费用。本实验采高效毛细管法测定利培酮的含量，具有分离效果好，无需有机溶剂，操作简便快速的优点，能够实现利培酮准确快速的分析检测。参考文献1 杨梦心,温预关,刘学军,等.反相高效液相色谱法测定利培酮片的含量J.药品检测,2003,12（7）:30-312 陈钧,高小玲,蒋新国.高校液相色谱法测定利培酮片含量及有关物质J.中国现代应用药学杂志,2004,21（4）:302-3033 段小涛,陈笑艳,张逸凡,等.液相色谱-串联质谱法测定人血