肺炎克雷伯杆菌的分离鉴定及超广谱β内酰胺酶的检测.doc

肺炎克雷伯杆菌的分离鉴定及超广谱-内酰胺酶的检测 【摘要】 目的 在肺炎克雷伯杆菌进行分离鉴定的基础上，探讨该菌产生超广谱-内酰胺酶的情况，为临床合理用药提供依据。方法 用肠杆菌科细菌生化编码鉴定管对分离后103株肺炎克雷伯杆菌进行鉴定，采用头孢噻肟和头孢噻肟/棒酸、头孢他啶和头孢他啶/棒酸检测超广谱-内酰胺酶。结果 在103株肺炎克雷伯杆菌中，26株检测出超广谱-内酰胺酶，检出率达25.2%。结论 该地区产超广谱-内酰胺酶肺炎克雷伯杆菌分离率较高。【关键词】 肺炎克雷伯杆菌； 超广谱-内酰胺酶 Isolation and identification of Klebsiella pneumoniae from infectious specimens and detection of extended-spectrum -lactamase producing strains【Abstract】 Objective To investigate the production of extended-spectrum -lactamase (ESBL) in Klebsiella pneumoniae. Methods One hundred and three strains of Klebsiella pneumoniae were identified by Enterobacteriaceae biological chemistry kit，ESBL-producing strains were examined by cefotaxime、cefotaxime/clavulanate,cetazidine、cetazidine/clavulanate. Results 26 strains of ESBL production were found, the resistant rate of Klebsiella pneumoniae reached as high as 25.2%.Conclusion The isolation rate of ESBL producing Klebsiella pneumoniae is significantly high.【Key words】 Klebsiella pneumoniae; super-extended-spectrum -lactamase 肺炎克雷伯杆菌是医院内感染和社区感染的重要病原菌1。近年来，肺炎克雷伯杆菌对多种抗生素的耐药性逐步上升，其中超广谱-内酰胺酶(extended-spectrum -lactamase, ESBL)的产生, 是其耐药机制之一。ESBL能水解青霉素类和头孢菌素类抗生素2。因此，笔者对2005年9月2006年6月吉林大学附属中日联谊医院和长春市中医学院附属医院送检的临床标本分离鉴定肺炎克雷伯杆菌，并对其进行超广谱-内酰胺酶检测，为临床用药提供参考。1 材料与方法1.1 菌株来源 2005年9月2006年8月吉林大学附属中日联谊医院和长春市中医学院附属医院分离的肺炎克雷伯杆菌103株，菌株按规定方法保存运送，统一保管。标准菌株：大肠埃希氏菌ATCC25922，肺炎克雷伯氏菌GY2000。1.2 培养基 普通营养琼脂、MH培养基和超广谱-内酰胺酶测定盒均购自杭州天和微生物试剂有限公司。1.3 抗生素 硫酸庆大霉素（购自天津药业焦作有限公司），乳酸环丙沙星（购自湖南科伦制药有限公司），氧氟沙星（购自贵州科伦药业有限公司），青霉素钠、氨苄西林钠（购自华北制药股份有限公司），头孢噻肟钠、头孢哌酮钠、头孢曲松钠（购自上海新先锋药业有限公司），头孢吡肟(购自大连中信药业股份有限公司)，阿奇霉素（购自杭州澳亚生物技术有限公司），乳糖酸红霉素（购自大连美罗大药厂），头孢拉定（购自深圳市制药厂）。1.4 肺炎克雷伯杆菌分离鉴定 常规分离临床标本纯培养，然后进行革兰染色，肠杆菌科细菌生化编码鉴定管（硫化氢，苯丙氨酸，葡萄糖酸盐，蛋白胨水，葡磷胨水，枸橼酸盐，尿素，半固体，赖氨酸，鸟氨酸，氨基酸对照，棉子糖，山梨醇，侧金盏花醇，木胶糖）进行鉴定，根据肠杆菌科细菌生化鉴定编码册，最后鉴定细菌。1.5 抗生素敏感试验 采用平皿二倍稀释法进行药敏试验。1.6 ESBLs检测 按照美国NCCLS2000年药敏试验操作标准推荐的方法进行检测。采用头孢噻肟纸片和头孢噻肟棒酸纸片、头孢他啶和头孢他啶棒酸纸片。单头孢菌素纸片和混有棒酸的头孢菌素纸片抑菌环直径相差5mm以上, 判定为ESBLs 阳性株。2 结果2.1 肺炎克雷伯杆菌抗生素敏感试验结果 从临床感染性标本中分离出肺炎克雷伯杆菌103株，抗生素敏感试验结果见表1。表1 103株肺炎克雷伯杆菌的药敏结果（略）2.2 超广谱-内酰胺酶检出情况 在103株分离鉴定后的肺炎克雷伯杆菌中，26株检测出超广谱-内酰胺酶，检出率达25.2%，见表2。2.3 产ESBLs菌株和非产ESBLs菌株对各种抗生素敏感试验的比较 见表3。表2 ESBLs检出情况（略）表3 产ESBLs菌株与非产ESBLs菌株药敏结果比较（略）3 讨论近年来随各种抗生素在临床上的广泛使用，临床分离的革兰阴性杆菌对抗生素的耐药率逐年增加。细菌质粒介导的超广谱-内酰胺酶是最主要的耐药机制之一。肺炎克雷伯杆菌是超广谱-内酰胺酶的主要携带菌之一，由于产ESBLs 菌的耐药谱广,且多为多重耐药,给临床抗感染治疗带来很大的困难。常规检测肺炎克雷伯杆菌是否产ESBLs具有重要的意义3 。药敏试验结果表明，肺炎克雷伯杆菌对青霉素类，第一代头孢菌素类耐药情况较明显，对第三代头孢菌素类亦有不同程度的耐药，对第四代头孢菌素比较敏感。对喹诺酮类、氨基糖苷类呈现交叉耐药。产ESBLs 菌株不仅对三代头孢菌素和青霉素类有较高的耐药率,对氨基糖苷类、喹诺酮类耐药率达50%以上,高于非产ESBLs 菌株。65.4%的产ESBLs菌对环丙沙星、氧氟沙星、庆大霉素同时耐药,而不产ESBLs 菌仅有29.4%同时对这3种抗生素耐药,这可能与产ESBLs菌携带有多重耐药基因有关(质粒或染色体)。广谱头孢菌素尤其是三代头孢菌素的广泛应用, 对革兰阴性杆菌产生的选择性压力增大, 有可能使-内酰胺酶发生基因点突变, 以适应抗生素的选择性压力4, 导致了超广-内酰胺酶菌谱的发生和发展。超广谱-内酰胺酶能水解所有的青霉素类、三代头孢类以及单环氨曲南类，因此，超广谱-内酰胺酶不仅对青霉素类、第三代头孢菌素和氨曲南耐药，而且对氨基糖苷类、喹诺酮类交叉耐药。由于超广谱-内酰胺酶可以由质粒介导在细菌间转移形成耐药的扩散，这可造成院内交叉感染和耐药菌扩散。因此，应该随时检测超广谱-内酰胺酶，尽量避免滥用抗生素，减少耐药菌株的发生，对临床合理用药提供参考。【参考文献】1 沈爱娣, 邱雪菲.肺炎克雷伯杆菌肺部感染60例的临床和耐药性研究.上海医药，2001，24(9):560-563.2 Jacoby GA， Han P. Detection of extended-spectrum beta-lactamases in clinical isolates of Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli. J Clin Microbiol，1996，34：908-911.3 Sirot D. Extended - spectrum plasmid mediated -lactamases. J Antimicrob Chemother，