食品安全国家标准食品接触材料及制品N-亚硝胺类化合物迁移量的测定（征求意见稿）VIP

中华人民共和国国家标准中华人民共和国国家标准 GB xxxxxxxx xxxx-xx-xx 发布 xxxx-xx-xx 实施 食品安全国家标准 食品接触材料及制品 N-亚硝胺类化合物的测定 （征求意见稿） GB xxxxxxxx 1 食品安全国家标准 食品接触材料及制品 N-亚硝胺类化合物的测定 1 范围 本标准规定了食品接触材料及制品N-亚硝胺类化合物释放量和N-亚硝胺可生成物释放量的测定方 法。 本标准适用于奶嘴头N-亚硝胺类化合物迁移量和N-亚硝胺可生成物释放量的测定。 第一法 气相色谱-热能分析仪法 2 原理 试样中N-亚硝胺类化合物首先用人工唾液浸泡，所得迁移液经固相萃取处理、浓缩，然后使用气 相色谱热能分析仪测定，外标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用水为 GB/T 6682 规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯。 3.1.2 0.1 mol/L 氨水溶液（NH4OH）。 3.1.3 0.1 mol/L 盐酸溶液（HCl）。 3.1.4 0.1 mol/L 氢氧化钠溶液（NaOH）。 3.1.5 无水乙醇（C2H5OH）：色谱纯。 3.1.6 碳酸氢钠（NaHCO3）。 3.1.7 氯化钠（NaCl）。 3.1.8 碳酸钾（K2CO3）。 3.1.9 亚硝酸钠（NaNO2）。 3.1.10 无水硫酸钠（Na2SO4）。 3.1.11 1.0 mol/L 盐酸溶液（HCl）。 3.1.12 1.0 mol/L 氢氧化钠溶液（NaOH）。 3.2 试剂配制 人工唾液：称取碳酸氢钠 4.2 g，氯化钠 0.5 g，碳酸钾 0.2 g，亚硝酸钠 0.03 g 于盛有（950 5） mL 水的 1000 mL 烧杯中溶解，用 0.1 mol/L 的盐酸溶液或 0.1 mol/L 氢氧化钠溶液调节 pH 至 9.0 0.1， 再转移至 1000 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。 3.3 标准品 11 种 N-亚硝胺类化合物标准品（具体信息见附录 A）。 3.4 标准溶液配制 GB xxxxxxxx 2 3.4.1 N-亚硝胺类化合物标准储备液：称取适量亚硝胺类化合物标准品，用乙醇制成浓度为1 g/mL的 混合标准储备液冷藏避光保存。 3.4.2 混合标准系列工作液：吸取适量N-亚硝胺类化合物标准储备液，用乙醇逐级稀释配成浓度为0.01 g/mL、0.025 g/mL、0.05 g/mL、0.1 g/mL、0.2 g/mL、0.5 g/mL的混合标准系列工作液，冷藏避 光保存。 3.4.2 内标标准工作液（N-亚硝基二异丙胺）：用乙醇配制成浓度为200 ng/mL的标准工作液，避光保 存。 4 仪器和设备 4.1 气相色谱-热能分析仪（GC-TEA）。 4.2 氮吹仪。 4.3 分析天平：感量0.01 g。 4.4 恒温箱，温度能够控制在（40 2）。 4.5 旋转蒸发仪或K-D浓缩烧瓶和浓缩器。 5 分析步骤 5.1 试样迁移试验 5.1.1 样品的预处理 沿着长轴将奶嘴头切成两半，以获得近似对称的两部分。称取样品（5.5 0.5）g（精确到0.01 g）， 根据需要称重多个一半，使总重量达到最少5 g。如果重量超过6g，沿着长轴将最后一半切成两部分， 获得近似对称的两片，并移除其中一片。将样品片转移至具有（300+30）mL沸水的烧杯中并煮沸10分 钟。用镊子或钳子将样品片从水中取出，并摇落多余的水，立即转入锥形瓶。 平行制样两份，一份用于N-亚硝胺释放量的检测，另一份用于N-亚硝胺可生成物释放量的检测。 注：样品应该保存在室温的密闭体系中，需避光保存，样品制备需要避免任何污染（包括橡胶手套）。 5.1.2 迁移液的制备 向盛有煮沸处理样品片的锥形瓶中，加入人工唾液，其加入体积按照每克样品片加入4 mL人工唾 液的比例进行计算。盖上磨口玻璃塞，轻轻摇晃以确保每片样品都完全浸没在溶液里，将锥形瓶置于烘 箱（40 2）中，（24 0.5）h之后，将锥形瓶从烘箱中取出，并手动用力摇动5次，打开锥形瓶，用镊 子或钳子取出样品，将样品表面的水摇落到锥形瓶中。 当检测N-亚硝胺释放量时，向锥形瓶中加入浓度为1 mol/L的氢氧化钠溶液（0.6 0.01）mL和内标 标准储备液（0.5 0.01）mL，摇匀。 当检测N-亚硝胺可生成物释放量时，向锥形瓶加入1 mol/L盐酸溶液（2.5 0.1）mL，盖上磨口玻璃 塞，手动用力摇晃5次混匀，将锥形瓶重新置于（40 2）烘箱中，恒温（30 1）min。向锥形瓶中加 入1 mol/L的氢氧化钠溶液（5.0 1）mL，摇动溶液，终止亚硝胺化反应，然后加入内标溶液（0.5 0.01） mL，盖上磨口玻璃塞并摇匀备用。 注：迁移液应该避光保存，如果需保存过夜，需保存在冰箱中。如需较长的时间，需要冷冻在合适的容器中。 5.2 试样溶液的制备 5.2.1 迁移液的萃取 向 5.1.2 所得迁移液中加入二氯甲烷 30 mL，剧烈振荡 1 min，振荡时注意及时放气。静置分层， 收集下层溶液，用旋蒸瓶或者 K-D 浓缩瓶收集。用二氯甲烷 30 mL 重复提取 1 次，合并提取液与洗涤 GB xxxxxxxx 3 液，加入 1.0 mL 乙醇，摇匀备用。 5.2.2 萃取液的浓缩 方法一：直接将装有萃取液的烧瓶置于旋转蒸发仪中进行旋转蒸发浓缩，水浴温度设置不得超过 35 ，待浓缩至5-10 mL后改氮吹，将其浓缩至体积约为1.0 mL。 方法二：将装有萃取液的K-D烧瓶中两个或三个沸石，在K-D烧瓶上接上空气冷凝管，水浴条件下 浓缩至（5 1）mL，初始温度（40 2），随后缓慢升温到（60 2）。冷却后，用二氯甲烷约2 mL 冲洗蒸发烧瓶的内壁，然后利用轻轻的氮气气流吹拂液体表面将其浓缩至体积约为1.0 mL。 5.3 空白溶液的制备 按照5.1和5.2所述步骤处理未与试样接触的人工唾液。 5.4 测定 5.4.1 仪器参考条件 a）色谱柱：DB-WAX，30m*0.32mm*0.50m，或性能类似的分析柱； b）进样口温度：250 ； C）程序升温条件：初始温度 60 ，保持 1 分钟，15 /min 到 82 ，保持 0 分钟，1 /min 到 88 ，保持 0 分钟，15 /min 到 140 ，保持 7 分钟，20 /min 到 250 ，保持 6 分钟； d）流速：1 mL/min； e）进样方式：不分流进样； f）载气：氮气（99.999%）； g）进样体积：2 L； h）接口温度：250； i）热解室温度：500。 5.4.2 制作标准曲线 按照5.4.1所列仪器参考条件，对混合标准系列工作液依次进样测定。以混合标准系列工作液中 N-亚硝胺的浓度为横坐标，以对应的峰面积与内标物峰面积的比为纵坐标，绘制标准曲线。标准工作 溶液的色谱图参见附录B图B.1。 5.4.3 试液测定 将试样溶液和空白溶液依次注入气相色谱-热能分析仪中，得到每种N-亚硝胺的峰面积与内标物 峰面积的比值。 6 结果的表述 6.1 试样溶液中的每种 N-亚硝胺浓度的计算 根据特定 N-亚硝胺的校准曲线，按式(1）计算试样溶液中的该 N-亚硝胺的浓度。 i,si,sint,siiint,sC =A /A-b/ aC （1） 式中： Ci试样溶液中的某种 N-亚硝胺 i 的浓度，单位是毫克每升（mg/L）； i特定个体 N-亚硝胺； int内标； Ai试样溶液 N-亚硝胺 i 的峰面积； Aint试样溶液内标物的峰面积； Ci,s对于样品 s，N-亚硝胺 i 的浓度，单位是微克每升（g/L）； GB xxxxxxxx 4 CiNt,s对于样品 s，内标的浓度，单位是微克每升（g/L）； biN-亚硝胺 i 的校准曲线的截距； aiN-亚硝胺 i 的校准曲线的斜率。 6.2 试样各种 N-亚硝胺释放量的计算 试样中各种 N-亚硝胺的迁移量 i,i,C = ss s V M m （3） M对于样品 s，N-亚硝胺 i 的迁移量，单位 g/kg； Ci,s对于样品 s，N-亚硝胺 i 的浓度，单位是 ng/mL； Vs对于样品 s，迁移液的浓缩体积，单位为 mL，默认为 1 mL； sm对于样品 s 的取样质量，单位为 g。 6.3 样品中 N-亚硝胺总释放量 N-亚硝胺总释放量为各种N-亚硝胺的释放量之和。如果某种N-亚硝胺没有检测信号（即低于检出 限），应记录为“未检出”或“ND”，其值作零处理。 6.4 N-亚硝胺可生成物（以相应的 N-亚硝胺计）计算方法同上。 7 N-亚硝胺的确认 如果人工唾液中测出N-亚硝胺总释放量超过限量，N-亚硝胺应通过以下途径之一加以确认： a) 取一部分剩余的测试溶液置于透明的、能完全透过紫外线的小瓶中，在波长为366 nm的紫外 线下照射3h。由于N-亚硝胺受紫外线照射分解，气相色谱分析时可以发现，所有N-亚硝胺对应的色谱 峰都会消失或者峰面积大幅减少。但是，如果照射后样品峰面积没有明显减少，则初始的峰为假阳性， 不需要再做进一步的确认。 b) 使用至少一种其他极性的色谱柱。 c) 通过质谱定性。 如果发现在遵循上述程序中的至少一个后， 某些峰对应的化合物不是N-亚硝胺， 则应视为假阳性， 并忽略。 8 分析允差 N-亚硝胺总量的分析允差为0.01 mg/kg。 9 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20 %。 10 其他 本方法对11种N-亚硝类化合物的定量限均为0.005 mg/kg。 GB xxxxxxxx 5 第二法 气相色谱-质谱法 11 原理 用人工唾液浸泡试样，所得迁移液经转化（测量亚硝胺可生成物时）液液萃取、浓缩，使用气相 色谱-质谱仪测定，外标法定量。 12 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用水为 GB/T 6682 规定的一级水。 12.1 试剂 同 3.1。 12.2 试剂配制 同 3.2。 12.3 标准品 11 种 N-亚硝胺类化合物混合标准品（具体信息见附录 A）。 12.4 标准溶液配制 同 3.4。 13 仪器和设备 13.1 气相色谱-质谱仪（GC-MS）。 13.2 氮吹仪。 13.3 分析天平：感量0.01 g。 13.4 恒温水浴振荡器。 13.5 旋转蒸发仪或K-D浓缩烧瓶和浓缩器。 14 分析步骤 14.1 试样制备及前处理 14.1.1 样品的预处理 同5.1.1。 14.1.2 迁移液的制备 同 5.1.2。 14.1.3 萃取 N-亚硝胺类化合物 同 5.2.1。 14.1.4 浓缩 同5.2.2。 14.1.5 空白实验 将不放样品的人工唾液按14.1.2到14.1.4步骤操作处理。 14.2 测定 14.2.1 气相色谱参考条件 GB xxxxxxxx 6 a）色谱柱：HP-INNOWax，30m*0.25mm*0.50m，或性能类似的分析柱； b）进样口温度：260 ； C）程序升温条件：初始温度 40 ，保持 2 分钟，以 20 /min 到 240 ，保持 11 分钟； d）初始流速：60 cm/min，恒线速度模式； e）进样方式：不分流进样； f）载气：氦气，纯度99.999%； g）进样体积：1 L。 14.2.2 质谱参考条件 a）接口温度：250 ； b）离子源温度：230 ； c）四级杆温度：150 ； d）扫描模式：选择离子扫描（SIM），离子参数见表1。 e）溶剂延迟：6 min。 表1 N-亚硝胺选择离子扫描（SIM）参数 扫描起始时间/min 结束时间/min 离子1 离子2 离子3 离子4 离子5 离子6 6 6.8 74 42 43 88 6.8 7.15 102 44 57 7.15 8.1 70 43 130 8.1 9.25 84 57 41 107 106 121 9.25 9.65 114 42 55 100 41 9.65 10.05 56 86 116 10.05 17 169 168 167 17 23 91 65 181 表2 待测物质离子信息表 物质 定量离子 定性离子1 定性离子2 丰度比 N-亚硝基二甲胺 74 42 43 100:75:28 N-亚硝基甲基乙基胺 88 42 43 100:57:44 N-亚硝基二乙胺 102 44 57 100:83:50 N-亚硝基二正丙胺 70 43 130 100:72:26 N-亚硝基二正丁胺 84 57 41 100:79:51 N-亚硝基-N-甲基苯胺 107 106 74:100 N-亚硝基-N-乙基苯胺 121 106 43:100 N-亚硝基哌啶 114 42 55 91:100:57 GB xxxxxxxx 7 N-亚硝基吡咯 100 41 42 100:76:46 N-亚硝基吗啉 56 86 116 100:45:44 N-亚硝基二苯胺 169 168 167 100:65:34 N-亚硝基二苄胺 91 65 181 100:20:14 14.2.3 标准曲线的制作 按照5.4.1所列仪器参考条件，对混合标准系列工作液依次进样测定。以混合标准系列工作液中 N-亚硝胺的浓度为横坐标，以对应的峰面积与内标物峰面积的比为纵坐标，绘制标准曲线。标准工作 溶液的色谱图参见附录B图B.2。 14.2.4 试液测定 将试样溶液和空白溶液依次注入气相色谱-质谱仪中，得到每种N-亚硝胺的峰面积与内标物峰面 积的比值。 14.2.5 定性判断 若样液与标准测定溶液的选择离子色谱图中没在相同保留时间均有色谱峰出现，则根据表2中各 物质对应的特征选择离子的种类及丰度比进行确证。在上述气相色谱-质谱条件下，样液中N-亚硝胺的 保留时间与标准溶液中对应的保留时间的偏差在2.5%，且样品中被测物质的相对离子丰度与浓度相当 标准溶液的相对离子丰度进行比较，相对丰度允许相对偏差不超过表3规定的范围，则可确定样品中 存在对应被测物。 表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 % 50 2050 1020 10 允许的相对偏差 10 15 20 50 15 结果的表述 同6。 16 N-亚硝胺的确认 同7。 17 分析允差 同8。 18 精密度 同9。 19 其他 本方法对11种N-亚硝类化合物的定量限均为0.005 mg/kg。 GB xxxxxxxx 8 附 录 A 11种N-亚硝胺的信息表 序号 名称 英文名称 英文缩写