研究生毕业论文答辩分析.ppt

导 师：向晓星 副教授 主任医师 研究生：刘国芳,结直肠癌患者外周血CD4+T细胞亚群的表达及临床意义,提纲,选题背景,概述：结直肠癌（colorectal carcinoma,CRC）为最常见恶性肿瘤之一，目前主要治疗手段是采用包括手术在内的综合治疗，研究表明，免疫细胞的相互作用影响结直肠癌患者的临床进展和治疗效果，CD4+T细胞介导的适当的免疫应答在控制恶性肿瘤中发挥重要的作用。 .,选题背景,原始CD4+,Th1,Th2,Th9,Th17,Th22,Treg,IFN-,IL-4,IL-9、IL10,IL-17、IL-21、IL-22,IL-22,TGF- 、IL-10,主要介导细胞免疫和清除胞内病原微生物,主要介导体液免疫和清除胞外病原微生物,参与抗寄生虫感染、哮喘等过敏性疾病和自身免疫性疾病的发病,对抗胞外病原菌的感染，参与自身免疫性疾病和肿瘤的发病,参与炎性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤的发病,主要参与自身免疫耐受的维持和自身免疫性疾病及肿瘤的发病,IL-4+IFN-,IFN-+IL-22,IL-4+TGF-,TGF-+IL-6,IL-6+TNF-a,TGF-,选题背景,作用机制,IL-22可通过活化STAT信号通路，促进恶性肿瘤的生长和转移,Treg细胞可抑制宿主的抗肿瘤免疫应答,在肿瘤微环境中，Th17细胞和Treg细胞可相互转化，抑制Th17细胞产生可促进Treg细胞发育的细胞因子，Th17细胞与Treg细胞的分化可能存在相互抑制,Th17细胞可以通过促进血管生成因子的生成发挥促肿瘤免疫，也可以通过促进CD8+T细胞活性发挥抗肿瘤效应,选题背景,Th22细胞是新发现的一类CD4+T细胞亚群，主要表达IL-22，Th22细胞参与自身免疫性疾病和炎性疾病的发病，最近研究发现，在消化系统、呼吸系统及血液系统等多个系统的常见肿瘤的外周血和肿瘤组织中发现Th22细胞及其相关细胞因子IL-22的存在。,研究发现在多种肿瘤，如肝癌、胃癌、卵巢癌、乳腺癌、肠癌中均发现Th17和Treg细胞及其细胞因子的存在。Th17/Treg失衡与肿瘤免疫是近年来研究的热点。,选题背景,。,Liu等研究小组发现，与健康对照组相比，胃癌患者术前外周血中Th17、Th22细胞水平明显增高，与胃癌TNM分期有关，同时发现Th22细胞水平与胃癌患者总体生存率成反比。,Zhang等研究小组发现Th22细胞在肿瘤组织中的比例显著高于其他组织（包括肿瘤引流淋巴结、自体的非肿瘤组织和癌旁组织），并与肿瘤的分期呈正相关。同时发现Th22细胞表达水平高的患者21个月生存率显著降低。,Maruyama等研究胃癌患者肿瘤微环境中Th17细胞及Treg细胞时发现， Th17细胞及Treg细胞在免疫早期出现积聚，随着肿瘤的进展，Treg细胞数量逐渐增加，而Th17细胞逐渐减少。,Liu,et al.Increased intratumoral IL-22-producing CD4+T cells and Th22 cells correlate with gastric cancer progression and predict poor patient survival. Zhang,et al.Increased Circulating Th22 and Th17 Cells are Associated with Tumor Progression and Patient Survival in Human Gastric Cancer. Maruyama T, et al.Distribution of Th17 cells and FoxP3+ regulatory T cells in tumor-infiltrating lymphocytes,tumor-draining lymph nodes and peripheral blood lymphocytes in patients with gastric cancer,选题背景,结直肠癌患者外周血中是否也存在Th17、Th22、Treg细胞的高表达，及Th17/Treg细胞失衡？,实验目的,初步分析探讨Th1、Th17、Th22和Treg细胞与CRC临床分期的关系及在CRC发病机制中的可能作用,技术路线,实验内容,标本来源： 2013年2月至2013年12月，苏北人民医院收治的结直肠癌患者33例，根据CRC Dukes分期将33例CRC患者分为两组：早期CRC组DukesA期 （n=17）和进展期CRC组DukesB+C+D期 （n=16）;所有患者均未接受手术、放化疗及其他抗肿瘤治疗；经术后病理学诊断为原发性结直肠癌；选择同期健康体检者25例作为对照（对照组），实验组和对照组均排除其他自身免疫性疾病，HIV或梅毒感染。,标本采集：分别取CRC患者（术前）和对照者肝素钠抗凝静脉血,实验内容,流式细胞术检测Th1、Th17、Th22细胞,流式细胞术检测Treg细胞,实验内容,结果判定,CD3+CD8- IL-17-IFN-+T细胞,CD3+CD8-IFN-IL-17+T细胞,CD3+CD8-IFN-IL-17-IL-22+T细胞,Th1,Th17,Th22,Treg,CD4+CD25highCD127lowT细胞,分析结果,采用统计学软件Graphpad prism 5和SPSS 17.0进行统计学分析，计量资料数据均以均数标准差表示， Treg和Th17细胞的相关性分析用Pearson相关分析，两组数据比较选择t检验，p 0.05为差异有统计学意义,p0.01为差异有显著统计学意义。,实验结果,1、CRC患者外周血中Th1细胞/CD4+T淋巴细胞的比例,图1-1 CRC患者及正常对照组外周血Th1细胞/CD4+T细胞比例比较,图1-2 正常对照组、CRC早期组、CRC进展期组Th1细胞表达水平比较,2 、CRC患者外周血中Th17细胞/CD4+T淋巴细胞的比例,实验结果,图1-3 CRC患者及正常对照组外周血Th17细胞/CD4+T细胞比例比较,图1-4 正常对照组、CRC早期组、CRC进展期组Th17细胞表达水平比较,实验结果,3、 CRC患者外周血中Th22细胞/CD4+T淋巴细胞的比例,图1-5 CRC患者及正常对照组外周血Th22细胞/CD4+T细胞比例比较,图1-6 正常对照组、CRC早期组、CRC进展期组Th22细胞表达水平比较,实验结果,4 、CRC患者外周血中CD4+CD25highCD127lowTreg/CD4+T淋巴细胞的比例,图1-7 CRC患者及正常对照组外周血Treg细胞/CD4+T细胞比例比较,图1-8 正常对照组、CRC早期组、CRC进展期组Treg细胞表达水平比较,实验结果,CRC组外周血中Th17/Treg的比值明显高于健康对照组； 早期CRC组外周血中Th17/Treg的比值明显高于健康对照组； 进展期CRC组外周血中Th17/Treg的比值低于早期 CRC组，差异有统计学意义。,5、CRC患者外周血中Th17/Treg的比值,实验结果,6、Th17细胞与Treg细胞的相关性,图2-3 正常对照组（r=0.51，P=0.011）,图2-4 CRC组（r=0.337，P=0.056）,实验结果,注：Q1-1：CD3+CD8- IL-17-IFN-+T细胞 Th1细胞，Q4-1：CD3+CD8-IFN-IL-17+T细胞 Th17细胞，Q1：CD3+CD8-IFN-IL-17-IL-22+T细胞 Th22细胞 图2-1 Th1、Th17、Th22细胞亚群比例流式图,IL-17,Gated on CD3+CD8-,IFN-r IL-22,正常对照组,早期CRC组,进展期CRC组,实验结果,注：P3：CD4+CD25highCD127lowT Treg细胞 图2-2 Treg细胞亚群比例流式图,CD4 PerCP CD25 FITC,CD127 PE-A CD25 FITC,正常对照组,早期CRC组,进展期CRC组,实验结果,表2 各组外周血Th1、Th17、Th22及Treg细胞比例,注：a与对照组比较，p 0.05；b与早期CRC组比较，p 0.05；,结论,第三、健康人中Th17与Treg呈正相关性，而在CRC患者中无相关性。可见Th17/Treg在正常人中处于平衡状态，而在CRC患者中被打破，能否通过纠正Th17/Treg的失衡来抑制恶性肿瘤的生长和转移还有待于进一步的研究证实。这可为CRC的治疗提供一个新的思路。,第二、Treg细胞随着肿瘤进展逐渐增高，而Th17细胞则随着肿瘤进展逐渐降低，最终导致Th17/Treg比值的失衡。,第一、 Th17、 Th22、 Treg在CRC患者外周血中高表达，且与CRC患者 Dukes分期有关。 这说明Th17、 Th22、 Treg参与结直肠癌的发生发展。,攻读学位期间完成的论文,Guofang Liu, Xiaoxing Xiang, Dong Tang et al.S-1 combination therapy versus S-1 monotherapy in advanced gastric cancer:a meta-analysisJ.World Journal of Gastroenterology,2014,20(1):310-318. 刘国芳，向晓星.Th9细胞及其与炎性疾病关系的研究进展J.医学综述，2013,19(6):1009-1011. 刘国芳，向晓星.Th22细胞及IL-22在肿瘤中的作用J.国际肿瘤学杂志，2014,41（2）：93-96. 刘国芳，向晓星.食管静脉曲张破裂出血的急诊治疗进展J.临床肝胆病杂志，2014，30(7):278-282. 刘国芳，向晓星.结直肠