2016梅毒实验室检测资料.PPT

梅毒的实验室诊断,病原体,为梅毒螺旋体，属于密螺旋体属，苍白密螺旋体苍白亚种(Treponema pallidum subspecies pallidum) 苍白亚种 梅毒 苍白螺旋体 地方亚种 地方性梅毒 极细亚种 雅司病 密螺旋体属 品他螺旋体 品他病,梅毒螺旋体的生物学特性,1、直径 0.100.15m，有814个致密而规则的 小螺旋，两端尖直。 2、原生质圆柱体上紧绕着34根周浆鞭毛，故运 动活跃，运动方式多样。 3、G-，但不易着色。Fantana镀银染色呈棕褐色。 4、在无活细胞的人工培养基中难培养，生长慢。 5、抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感；对青霉 素、四环素、红霉素等抗生素敏感。在干燥条件下不易生存。肥皂水和一般消毒剂以及加温42以上均极易将其杀灭。,梅毒螺旋体,传播途径,性接触是主要的传染途径 未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性 随着病期的延长，传染性越来越小 到感染后2年，通过性接触一般无传染性 母婴传播 在妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗者，虽已无性传播（病期2年），但妊娠时仍可传染给胎儿 病期越长，传染性越小; 输血传染 间接传播：日常用品、接吻、哺乳、医疗器械等途径（接触部位附有梅毒螺旋体） 。,梅毒的分期,梅毒的诊断,梅毒的诊断 早期梅毒（一期、二期和早期隐性梅毒）和晚期梅毒（三期和晚期隐性梅毒） 必须依靠病史、症状及实验检查进行综合分析 梅毒的实验室检查 结果对诊断有决定性意义,常用梅毒实验室检测方法,病原学检测 血清学检测,病原学检查,取材方法 一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液 暗视野显微镜、镀银染色法和直接荧光法 在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。白色发光，螺旋整齐，运动规律（旋转、伸缩或蛇行运动）,病原学检查的临床意义,病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。 螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。 如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。,梅毒血清学检测方法,梅毒血清学检测分类,非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体） 梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,原理（抗心磷脂抗体）： 人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激机体产生类脂质抗体（反应素）。 主要是IgM和IgG混合抗体。 抗体产生时间 感染3周-4周，硬下疳出现1周-2周 一般在感染后57周（或硬下疳出现后23周）产生。 抗体作用 无保护作用，治疗监测。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。,原理和方法,反应原理 抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见 抗原基本成分 心磷脂、卵磷脂和胆固醇 方法包括： 快速血浆反应素环状卡片试验(RPR) 不加热血清反应素(USR) 甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） 性病研究实验室试验(VDRL)等。,四种非特异性试验方法比较,RPR/TRUST检测流程,试验前期准备 RPR仪(水平旋转仪器) 必须滴！ 试剂 50l移液器、吸头 记号笔、废物缸 工作服 一次性手套、口罩、帽子 生物安全柜,梅毒自动旋转仪,测速:100转/MIN （2转）,检测流程（定性）,加样： 吸取50l血清（浆）放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内。 加抗原： 将抗原轻轻摇匀，用试剂盒提供的针头加1滴抗原。 反应： 将卡片置梅毒自动旋转仪8分钟立即在亮光下观察结果。,检测流程（定量）,稀释液准备： 在圈内加入50l生理盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。 加样： 吸取50l血清(浆)与各圈中盐水作系列稀释，并涂布满整个圈内。 重复定性试验后两步。,凝集反应强度分级：,3+4+：圆圈内出现中到大的红色絮状物，液体清亮。 2+：圆圈内出现小到大的红色絮状物，液体较清亮。 1+：圆圈内出现小的红色絮状物，液体浑浊。 ：圆圈内仅见红色集中于中央一点或均匀分散。,RPR定量试验,中等至大的凝块为阳性（圈4和7）有明确但很小的凝块为弱阳性（圈2和3）颗粒均匀分布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈6）为阴性,临床意义,早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月，VDRL试验抗体滴度下降2个稀释度，6个月下降4个稀释度。 一期梅毒1年后转为阴性 二期梅毒2年后转为阴性。 晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性 早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。,假阳性问题,假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性 技术性假阳性 由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。 生物学假阳性 是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性,急性生物学假阳性反应的疾病,风疹 水痘 传染性单核细胞增多症 传染性肝炎 上呼吸道感染 肺炎球菌性肺炎 病毒性肺炎 牛痘疹,慢性生物学假阳性反应的疾病,系统性红斑狼疮 自身免疫性溶血性贫血 盘状红斑狼疮 结节性多动脉炎 类风湿性关节炎 桥本氏甲状腺炎,风湿性心脏病 干燥综合征 毒品瘾者 慢性肾炎 肝硬化 老年 麻风 (是唯一产生慢性生物学假阳性的感染性 疾病),妊娠的假阳性反应,这是一种生理情况下的生物学假阳性 假阳性发生率较低有报告为0.4%，滴度低。,假阳性问题,梅毒假阳性反应的处理 技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可除外。 对急性生物学假阳性反应，应做TPHA（TPPA）等试验进行排除。,前带现象,原理 指二期梅毒患者非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果。 处理 将血清稀释后再进行试验。,血清固定,耐血清性（血清固定） 指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。,梅毒螺旋体抗原血清学试验,试验原理,检测血中特异性抗梅毒螺旋体特异蛋白为抗原的抗体（ IgG 和IgM ）。 特异性IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周后即可测出。,实验方法,梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA) 梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA) 梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISA） 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT) 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） 化学发光免疫分析法（CLIA） 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）,TPPA/TPHA原理,TPPA试验原理与TPHA试验基本相同 TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒 TPHA试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞 特点 梅毒螺旋体(Nichols株)全抗原,操作步骤,1. 试剂准备：试验前将试剂和待检标本恢复到室温。 2. 加稀释液：每份样本做4孔，加标本稀释液加至微量反应板孔内，第1孔100微升，第24孔各25微升。 3. 样本稀释：取血清25微升加至第1孔，混匀后取25微升至第2孔，混匀后取25微升至第3孔，混匀后取25微升至第4孔，混匀后弃去25微升。 4. 加对照液：第3孔加未致敏颗粒25微升，第4孔加致敏颗粒25微升。 5. 混合：将反应板置振荡器振荡30秒。 6.反应：置有盖湿盒，孵育2 h，或放4冰箱过夜观察结果。,结果判断,1.观察加未致敏颗粒的第3孔，不出现凝集为有效试验。 2. 观察凝集反应强度：分级如下。 4+：颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠。 3+： 颗粒光滑覆盖大部分孔底。 2+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环。 1+： 颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显颗粒环。 ：颗粒沉集孔底，中央形成一小点。 一：颗粒紧密沉积孔底中央。,荧光螺旋体抗体吸收试验 （FTA