正交设计优选微波法炮制萸黄连的最佳工艺.doc

正交设计优选微波法炮制萸黄连的最佳工艺 作者：陈卫红,蒋孟良,周卓,王竹鑫【摘要】 目的 探讨微波法炮制萸黄连的最佳炮制工艺。方法 采用薄层扫描法测定正交设计所得9个样品中小檗碱的含量,以小檗碱的含量高低来评价炮制方法的优劣。结果 微波法炮制萸黄连的最佳工艺为A2B2C3,即润药90 min,放2 cm厚,用80%微波,加热3 min。结论 用微波法炮制萸黄连简单方便、条件易控制、易操作、易推广,炮制品质量好。 【关键词】 萸黄连；微波法；小檗碱；炮制工艺 Abstract：Objective To investigate the optimum techniques for processing Yuhuanlian with microwave. Methods Nine samples were obtained by orthogonal design. Thin-layer chromatography was used to determine berberine in Yuhuanglian. The content of berberine was taken as the index for the evaluation on the superiority of processing techniques. Results The optimal processing techniques for Yuhuanglian with microwave was suggested as follows：A2B2C3, moistened for 90 minutes, put 2 cm thick, with 80% of the microwave, heating 3 minutes. Conclusion The method is simple, easy to control, easy to use, easy to promote, and the quality of processed products is better. Key words：Yuhuanglian；microwave；berberine；processing techniques 黄连始载于神农本草经,列为上品,历代本草均有记载。黄连为常用中药之一,具有清热燥湿、泻火解毒之功1。黄连的炮制方法很多,常见的有酒炙、姜汁炙、吴茱萸汁炙。用吴茱萸汁炮制黄连的方法又有加吴茱萸汁拌炒、加吴茱萸汁拌烘、加吴茱萸汁煮。随着科学技术的发展、新设备的出现、新技术的应用,又出现了微波法。笔者对炒法、烘法、煮法和微波法4种方法进行了比较研究,结果以微波法最好(另文发表)。本试验在此基础上,以小檗碱含量为指标,优选了微波法炮制萸黄连的最佳工艺条件,现报道如下。1 仪器与试药 双波长薄层扫描分析仪：CS-930型(日本Shimadzu)；电子分析天平：AR1140型0.1 mg奥豪撕国际贸易(上海)有限公司；电热恒温水浴锅：DK-S22型(上海精宏实验设备有限公司)；电热鼓风干燥箱：CS101-2AB型(重庆试验设备厂)；微量进样器：10 L(上海注射器三厂)。黄连购于湖南中医药大学第二附属医院,经蒋孟良教授鉴定为毛茛科植物黄连Coptis Chinensis Franch.的干燥根茎；吴茱萸购于湖南新晃县药材公司,经鉴定为芸香科植物吴茱萸Evodia rutaecarpa (Juss.) Benth.的干燥近成熟果实；盐酸小檗碱对照品购于中国药品生物制品检定所,供含量测定用。其他化学试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 因素水平根据查阅的资料和预试验,影响萸黄连微波炮制的因素主要有微波输出大小、加热时间、润药时间、药物放置厚度等。具体参数见表1。表1 因素水平表（略）2.2 样品的制备 称取吴茱萸20 g,加12倍量水,浸泡60 min,提取40 min,共2次(第2次加水量与煎煮时间均为第1次的80%),滤过,合并滤液,定容至100 mL备用。 称取黄连饮片20 g,共9份,分别加10 mL吴茱萸汁,拌匀,润30、60或90 min后,置格兰氏微波炉中(均放2 cm厚),以65%、80%、95%的微波加热1、3、9 min即得。2.3 供试液的制备2.3.1 标准品供试液的制备精密称取盐酸小檗碱5.12 mg,置5 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为1.024 mg/mL标准品供试液。2.3.2 样品供试液的制备将以上正交设计9个样品粉碎过20目筛,各取约0.4 g,精密称定,加盐酸-甲醇(1100)60 mL置索氏提取器中,水浴上提取至提取液无色,提取液用50 mL容量瓶定容备用。2.4 含量测定2.4.1 测定波长的选定精密吸取标准品及4个样品各5 L,分别点于同一块硅胶G薄板上,以正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-水(10112)为展开剂,展开,取出,晾干后,置扫描仪上在200500 nm范围内进行光谱扫描,结果最大吸收峰为352 nm,最小吸收峰为412 nm。2.4.2 扫描条件双波长反射法锯齿扫描,S352 nm,R412 nm；SX3,狭缝1.25 mm1.25 mm,扫描速度10 mm/min,外标两点法计算含量。2.4.3 标准曲线的绘制精密吸取标准品供试液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 L,分别点于同一薄层板上,同前展开、扫描测定。以小檗碱含量为自变量,峰面积积分值为因变量,进行回归处理,得回归方程：Y752.529X723.271,r0.997 0。2.4.4 水分测定按中华人民共和国药典方法测定水分2,以生品小檗碱含量8.341%为100%计算正交设计9个样品的损失率。小檗碱损失率(%)(黄连生品小檗碱含量萸黄连微波炮制后正交试验样品的小檗碱含量)/黄连生品小檗碱含量100%3-4。结果见表2。表2 正交试验9个样品水分含量测定结果及小檗碱损失率（略）2.4.5 样品含量测定精密吸取小檗碱标准品2、6 L和9个样品供试液各10 L,分别点于同一块薄层板上,同前展开、扫描测定,用外标两点法计算含量(按干品计算),结果见表3。表3 L9(34)正交试验结果（略）对表3数据进行方差分析,结果见表4；因C因素的离均差平方和小于空项,故将其合并计算误差5。表4 方差分析表（略）2.5 结果分析 由直观分析可知,以小檗碱含量为评价指标,各因素的主次顺序为BAC；由方差分析可知,A、B两因素对小檗碱含量有显著影响,C因素影响不明显,水平之间差异很小,故微波法炮制萸黄连的最佳炮制工艺为A2B2C3,即润药90 min,放2 cm厚,用80%微波,加热3 min。3 讨论 本研究表明,萸黄连的炮制以微波法为佳。该法既可降低部分小檗碱含量,从而降低黄连的过寒之性,又不使黄连中小檗碱含量太低而影响疗效。黄连用吴茱萸炙的炮制目的是抑制苦寒性,长于清气分湿热,散肝胆郁火。黄连清热泻火的苦寒成分为小檗碱,黄连用吴茱萸炙后抑制其苦寒之性,应是小檗碱含量有所降低。但是,用温热的吴茱萸制后的黄连还是寒性的,因此,还需要有苦寒成分小檗碱的存在。黄连用吴茱萸制后,到底要降低多少小檗碱,保留多少小檗碱？有待进一步研究。 正交设计9个样品中小檗碱含量的顺序为：586927431；其中1号小檗碱含量较生品降低最多为57.211%,已降到中华人民共和国药典要求小檗碱的含量限度3.6%以下；5号降低最少,为8.716%。这可能是在加热炒制过程中,部分小檗碱分解生成小檗红碱所致,另黄连中小檗碱与吴茱萸中有机酸、黄酮反应生成难溶性盐,从而使小檗碱煎出减少所致6-7。 本试验用微波法炮制萸黄连的最佳炮制工艺为A2B2C3,在L9(34)正交设计表中可以找到,即为5号,故不需做重复试验。在正交设计9个样品中5号的小檗碱含量最高。【参考文献】 1 雷载权.中药学M.北京：人民卫生出版社,2001.316.2 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)S.北京：化学工业出版社,2000.200.3 赵法新,庞长留,李思三.张海岑研究员炮制吴萸连经验J.中医研究, 1996,9(3)：46.4 叶玉兰,赵萍萍,罗泽澜.黄连及其炮制品中5种生物碱含量测定J.中成药,199