DB13T1116-2009焦糖色中的4-甲基咪唑的测定高效液相色谱法.pdf

ICS 67. 100 D B 1 3 省地方标准 丬丬 1 6 可 X 、夕了 DB13/T 1116-2009 焦 糖 色 中 的 4一 甲 基 咪 唑 的 测 定 高效液相色谱法 D eterm ination of 4-m ethylim idazo aspartam e in caram el H PLC m ethod 2009-05-27发布2009-06-11实施 河北省质量技术监督局 发 布 食品伙伴网/ 食品伙伴网/ DB13/T 1116-2009 月 I J 吕 本 标 准 中 的 附 录 A 为 资 料 性 附 录 。 本 标 准 由 河 北 省 质 量 技 术 监 督 局 提 出 并 归 口 。 本 标 准 起 草 单 位 ： 河 北 省 食 品 质 量 监 督 检 验 研 究 院 、 河 北 省 食 品 安 全 重 点 实 验 室 、 河 北 师 范 大 学 生 命 科 学 学 院 、 河 北 医 科 大 学 基 础 医 学 院 。 本 标 准 主 要 起 草 人 ： 李 挥 、 张 岩 、 李 强 、 刘 敬 泽 、 吕 品 、 刘 辰 魁 、 王 丽 霞 、 康 素 芬 。 食品伙伴网/ 食品伙伴网/ DB13/T 1116-2009 焦 糖 色 中 的 4一 甲 基 咪 唑 的 测 定 高效液相色谱法 1范围 本 标 准 规 定 了 焦 糖 色 中 4一 甲 基 咪 唑 的 测 定 方 法 。 本 标 准 适 用 于 焦 糖 色 中 4一 甲 基 咪 唑 的 测 定 。 本 方 法 的 检 出 限 为 5 m g/kg. 2规范性引用文件 下 列 文 件 中 的 条 款 通 过 本 标 准 的 引 用 而 成 为 本 标 准 的 条 款 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 随 后 所 有 的 修 改 单 （ 不 包 括 勘 误 的 内 容 ） 或 修 订 版 均 不 适 用 于 本 标 准 ， 然 而 ， 鼓 励 根 据 本 标 准 达 成 协 议 的 各 方 研 究 是 否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 适 用 于 本 标 准 。 GB/T 6682分析实验用水规格和试验方法 原理 样 品 中 4一 甲 基 咪 唑 经 高 效 液 相 反 相 C I8柱 分 离 后 ， 根 据 色 谱 峰 的 保 留 时 间 定 性 ， 根 据 峰 面 积 定 量 。 4试剂与材料 除 另 有 规 定 ， 所 有 试 剂 均 为 分 析 纯 ， 水 为 G B /T 6682规 定 的 一 级 水 。 甲 醇 ： 色 谱 纯 。 无 水 乙 醇 。 三 氯 甲 烷 。 三 氯 甲 烷 一 无 水 乙 醇 萃 取 液 （ 80: 20)： 移 取 80 m L的 三 氯 甲 烷 及 20 m L的 无 水 乙 醇 混 合 均 匀 备 I n 乙 Q U 月叶。 4 4 4 4 用 4. 5碳 酸 钠 。 4. 6碳 酸 钠 溶 液 （ 100 g/L )： 准 确 吸 取 碳 酸 钠 100 g于 1 000 mL容 量 瓶 中 ， 用 水 定 容 至 刻 度 。 4. 7庚 烷 磺 酸 钠 。 4.8磷酸二氢钾。 4. 9磷 酸。 4. 10磷 酸 二 氢 钾 缓 冲 液 （ (0.05 m ol/L )： 称 取 磷 酸 二 氢 钾 6. 8 g、 庚 烷 磺 酸 钠 1g于 1 000 m L 容 量 瓶 中 ， 加 水 900 m L ， 用 稀 磷 酸 调 节 pH 至 3. 5， 用 水 定 容 至 1 000 m L o 4.11 4一 甲 基 咪 唑 标 准 品 ： 纯 度 ） 99 % o 4 .1 2 4 -甲 基 咪 唑 标 准 储 备 溶 液 ： 准 确 称 取 0 . 1 0 0 0 g 4 一 甲 基 咪 唑 于 1 0 0 m L 的 容 量 瓶 中 ， 用 流 动 相 溶 解 定 容 至 刻 度 。 4一 甲 基 咪 唑 含 量 1. 0 mg/mL， 作 为 贮 备 溶 液 。 4.13 4一 甲 基 咪 唑 标 准 使 用 系 列 溶 液 ： 准 确 吸 取 4一 甲 基 咪 唑 贮 备 溶 液 1. 0 m L, 2.0 m L, 3.0 m L, 4.0 m L. 5.O mL于 50 mL容 量 瓶 中 ， 用 流 动 相 定 容 至 刻 度 ， 浓 度 分 别 为 20卩 g/mL, 40林 g/mL, 60林 g/山 L, 80 .tg/mL. 100 g/mL的 系 列 标 准 溶 液 ， 置 于 冰 箱 冷 藏 保 存 。 5仪器与设备 食品伙伴网/ DB13/T 1116-2009 5. 1高 效 液 相 色 谱 仪 ， 带 紫 外 检 测 器 。 5. 2旋 转 蒸 发 器 。 5. 3电 子 天 平 ： 感 重 0. 1 mg. 0. 001 go 5.4分液漏斗：250 mL o 5 5振 荡 器 。 5. 6微 孔 滤 膜 ： 0.45林 M . 6分析步骤 6. 1样 品 处 理 ： 准 确 称 取 3g样 品 （ 精 确 至 0. 001 g)， 加 巧 m L 水 溶 解 ， 移 入 250 m L 分 液 漏 斗 中 ， 加 100 g/L 碳 酸 钠 溶 液 15 m L ， 加 三 氯 甲 烷 一 无 水 乙 醇 萃 取 液 60 m L ， 剧 烈 振 摇 5 m in。 静 置 分 层 后 ， 将 有 机 相 移 入 另 一 分 液 漏 斗 中 ， 水 相 再 按 同 样 方 法 萃 取 一 次 ， 合 并 有 机 相 ； 用 1 0 0 g /L 碳 酸 钠 溶 液 洗 涤 提 取 液 3 次 ， 每 次 3 0 m L。 然 后 将 有 机 相 通 过 无 水 硫 酸 钠 滤 入 旋 转 蒸 发 瓶 中 ， 50 浓 缩 至 近 干 ， 取 下 ， 以 水 溶 解 残 渣 并 定 容 至 1 0 毗 ， 经 0 .4 5 林 m 微 孔 膜 过 滤 后 供 H P L C 分 析 。 6.2测定 6.2.1 HPLC参考条件 分 析 柱 ： C 18, 4. 6 m m x250 m m 粒 度 5 m o 流 动 相 ： 甲 醇 : 0. 05 mol几 磷 酸 二 氢 钾 缓 冲 液 （ (pH 3. 5， 含 0. 1 庚 烷 磺 酸 钠 ） =5: 950 波长：210nmo 流速：1. 0 m L/m ino 6 .2 .2 标 准 曲 线 ： 分 别 进 标 准 系 列 溶 液 各 1 0 L ， 进 行 H P L C 分 析 ， 然 后 以 峰 面 积 为 纵 坐 标 ， 以 4 一 甲 基 咪 唑 的 含 量 为 横 坐 标 ， 绘 制 标 准 曲 线 。 6.2.3试 样 测 定 ： 吸 取 6. 1处 理 后 的 试 样 溶 液 10 gL 进 行 H P L C 分 析 ， 测 定 其 峰 面 积 ， 从 标 准 曲 线 查 得 测 定 液 中 4一 甲 基 咪 唑 的 含 量 7结果计算 试 样 中 4一 甲 基 咪 唑 的 含 量 按 下 式 计 算 ： X = cxVxl000 ( 1 ) m x 1000 式 中 ： X一 试 样 中 4一 甲 基 咪 唑 的 含 量 ， 单 位 为 毫 克 每 千 克 （ m g/kg) ; c一 由 标 准 曲 线 上 查 得 进 样 液 中 4一 甲 基 咪 唑 的 量 ， 单 位 为 微 克 每 毫 升 （ 林 g/m L ) ; V 一 试 样 稀 释 液 总 体 积 ， 单 位 为 毫 升 （ m L ) ; m 一 试 样 质 量 ， 单 位 为 克 （ g ) ; 计 算 结 果 保 留 两 位 有 效 数 字 。 8精密度 在 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 绝 对 差 值 不 得 超 过 算 术 平 均 值 的 10% 0 食品伙伴网/ DB13/T 1116-2009 附 录 A （ 资 料 性 附 录 ） 4 一 甲