GB12743-2003大豆种子产地检疫规程.pdf

GB 1 2 7 4 3 - 2 0 0 3B li青 本标准代替GB 1 2 7 4 3 -1 9 9 1 大豆种子产地检疫规程 。 GB 1 2 7 4 3 -1 9 9 1 大豆种子产地检疫规程 已执行了十余年， 目前， 大豆上的危险性有害生物种类已经发生了变化， 检验检疫技术也有了发展和提高， 原规程已不适应大豆生产发展的需要， 特对原标准进行修订。修订后的标准增加了1 9 9 5年新公布的国内检疫对象大豆疫病， 该病也是我国 1 9 9 3年公布的一类进境植物检疫对象; 同时， 由于大豆菌核病是土传病害， 种子本身并不带菌传病， 因此修订后不再列为应检有害生物。有害生物的综合治理措施也做了相应的调整， 增加了一些新的技术内容。 本标准的附录B 、 附录C为规范性附录， 附录 A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由农业部种植业管理司归口。 本标准负责起草单位: 全国农业技术推广中心、 东北农业大学、 辽宁省植保植检站、 吉林省植物检疫站、 黑龙江省植保植检站、 农业部大豆种子质量监督检验中心、 黑龙江省富锦市植保站。 本标准主要起草人: 王福祥、 吴立峰、 文景芝、 蔡明、 吴雨泉、 杜淑梅、 孙波、 万振家。 本标准委托全国农业技术推广服务中心负责解释。 本标准 1 9 9 1 年首次发布， 本次为第一次修订。C日 1 2 7 4 3 - 2 0 0 3大 豆 种 子 产 地 检 疫 规 程范围本标准规定了大豆种子产地的限定性有害生物种类、 健康种子生产、 检验、 检疫、 签证等。本标准适用于实施大豆种子产地检疫管理的植物检疫机构及繁育、 生产大豆种子的单位和个人。2术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。2 . 1 产地 因植物检疫的目的而单独管理的生产点。2 . 2 产 地检疫 植物检疫机构对植物及其产品( 含种苗及其他萦殖材料， 下同) 在原产地生产过程中的全部工作， 包括田间调查、 室内检验、 签发证书及监督生产单位做好选地、 选种和疫情处理等工作。2 . 3 有害生物 任何对植物或植物产品有害的植物、 动物或病原物的种、 株( 品) 系或生物型。2 . 4 限定性有害生物 一种检疫性有害生物或限定非检疫性有害生物。2 . 5 检疫性有容生物 对受其威胁的地区具有潜在经济重要性、 但尚未在该地区发生， 或虽已发生但分布不广并进行官方防治的有害生物。2 . 6 限定非检疫性有害生物 一种非检疫性有害生物， 但它在供种植的植物中存在， 危及这些植物的预期用途而产生无法接受的经济影响， 因而在输人方境内受到限制。2 . 7 健康种子 按本标准所列检验方法检验， 符合本标准对限定性有害生物要求的大豆种子。3 限定性有害生物3 . 1 检疫性有害生物: 大豆疫病 P h y t o p h t h o r a s o j a e K a u f m . &G e r d . 冤丝子属 C u s c u t a s p p .3 . 2 限定非检疫性有害生物: 大豆病毒病S o y b e a n v ir u s d i s e a s e 大豆霜霉病P e r o n o s p o r a ma n s c h u r i c a ( N a u m. ) S y dGB 1 2 7 4 3 - 2 0 0 3大豆灰 斑病C e r c o s p o r a s o j i n a H a r a3 . 3 省里补充的其他检疫对象。4 健康种子生产4 . 1 妞育地选择4 . 1 . 1 繁育地设在排灌条件良好、 土壤肥力中等的地块， 并翻耕晒土。4 . 1 . 2 繁育地选择连续种植禾谷类作物二至三年以上的地块， 无本标准所列的检疫性有害生物发生。4 . 1 . 3 避免邻作是限定性有害生物的寄主( 如向日葵和油菜等) ， 并保持 1 0 0 m内无大豆的隔离条件。4 . 1 . 4 产地检疫申报: 种子繁育单位或个人应在播种前一月向当地植物检疫机构申请产地检疫， 并填写申 报表( 见表1 ) , 表 1 产地检痊申报表申报 号 :作 物名 称 :申报单位( 农户) :联系人:联系电话:地址:种植地点种 植 地 块编号种 植 面 积 /6 6 7 m ( 亩 )品 种种苗来 源预计播 期 预 产种子量/ k g隔离 条 件合计植物检疫机构审核意见:审核人:植物检疫专用章 年月日注 1 :本表一式二联， 第一联由审核机关留存， 第二联交申报单位.注2 : 本表仅供当季使用。4 . 2 种子健康标准4 . 2 . 1 原原种: 不带本标准所列的限定性有害生物， 无斑驳。4 . 2 . 2 原种: 无疫霉菌、 冤丝子种粒; 霜霉病、 病毒病发病率要分别低于 3 %和 0 . 2 %， 灰斑病发病率、 种子斑驳率低于3 0%a4 . 2 . 3 一般良种: 无疫霉菌、 冤丝子种粒; 霜霉病、 病毒病发病率要分别低于 1 0 %和。 . 5 %， 灰斑病发病率、 种子斑驳率低于 5 %.4 . 3选种4 , 3 . 1 原原种自上一年无限定性有害生物的大豆 田中大豆健株上采集， 经检疫证明符合原原种健康标准 。4 . 3 . 2 原种及一般良种采 自上一级符合标准的种子田。4 . 4 防疫措施4 . 4 . 1 播种前用筛子、 选种机等机械或人工办法粒选， 汰除混人的杂质。GB 1 2 7 4 3 - 2 0 0 34 . 4 . 24 . 4 . 34 . 4 . 44 . 4 . 54 . 4 . 6处理 。4 . 4 . 74 . 4 . 8播种前用药剂拌种， 防止大豆疫病或其他有害生物危害。在幼苗期， 及时拔除病苗杂草。在大豆花期以前， 如果有蚜虫发生， 应对种子田及保护带施药灭蚜。盛花期遇潮湿天气， 田间灰斑病病叶率达到3 0 %时， 应施药防治。开展大豆疫病 田间监测， 发现可疑株， 应进行土壤检测， 一旦确认立即销毁病株并进行土壤当田间发现冤丝子时， 少的随即拔除， 多的连同大豆一起销毁。对田块内的大豆残株及落叶等应及时清除、 烧毁， 避免串田灌溉， 并及时防治其他有害生物。5 检查、 检验、 签证51 检查以农业植物检疫部门为主， 种子部门、 生产单位( 农户) 协助。5 . 2 原原种逐行逐株目测。原种、 一般良种采用棋盘式抽样检验， 检验区面积不得大于 3 3 . 3 3 h m ,0 . 6 7 h . 以下取 5点， 0 . 6 7 h m ， 一6 . 6 7 h m ， 取 8点， 6 . 6 7 h m 2 一1 3 . 3 3 h . 1取 1 1 点， 1 3 . 3 3 h m3 3 . 3 3 h m 取 1 5 点， 每点检验株数不得少于2 0 0 . 3 3 . 3 3 h 耐 以上可根据各方面条件的均匀程度， 另外划分检验区5 . 3 检查时期: 在大豆整个生育期间， 要进行限定性有害生物发生情况的系统调查。在幼苗期、 盛花期、 鼓粒成熟期进行三次田间检查， 田间症状详见附录A， 将检验结果填人大豆种子田间检验记录表( 见表 2 ) , 表 2 大豆种子田间检验记录表地 点品 种臀处 理种 子级 别调 查 项 目调 查 时 期亩 产 量/ k g质 量等 级播 前种 子苗期开 花盛 期结 英盛 期收 获种 子检查株( 粒) 数冤丝子种( 株) 数疫病率/ ( 00/ a )箱霉病率/(%)灰斑病率/(%)种子斑驳率/(%)病毒种传率/(%)其他调 查 日期调 查 人5 . 3 . 1 幼苗期检查: 检查有无限定性有害生物的可疑症状， 如发现有则按 4 . 4的有关防疫措施处理。5 . 3 . 2 盛花期检查: 检查大豆疫病和冤丝子并按照 4 . 4 的有关防疫措施及时处理。病毒病检验以盛花期为主， 该期原种及良种田田间病株率可作为该地块种传率预测的依据， 原种及良种田花期病毒病株率应分别低于 1 %和 3 %。灰斑病于花期检查后， 根据病情和当地气象预报决定是否应进行药剂防治。5 . 3 . 3 鼓粒成熟期检查: 检查大豆疫病并按照 4 . 4 给出的防疫措施及时处理。5 . 4 田间不能确诊的限定性有害生物样本带回实验室， 做室内检验( 大豆疫病检测方法见附录B ， 病毒病检测方法 详见附录 C， 其他有害生物按 常规方法进行) 。检验结果填人大豆室 内检验报告单( 见 表 3 ) 3GB 1 2 7 4 3 - 2 0 0 3表 3 产地检疫室内检验报告单对应申报号:样 本 编 号取样 日期 :作 物 名 称 :作物品种取 样 部 位检 验 方 法 :检 验 结 果 :备注:检验人( 签名)审核人( 签名) : 植物检疫专用章 年月日5 . 5签证5 . 5 . 1 凡检查、 检验发现大豆疫病者不予签证。5 . 5 . 2 病毒病检验以田间为主， 必要时做室内检验， 若病毒病不符合本标准要求， 不应签证。5 . 5 . 3 发现冤丝子经严格处理合格， 可以签证。5 . 5 . 4 凡经过田间检验及室内检验后， 收获的种子符合健康种子标准的， 发给产地检疫合格证( 见表4) . 表 4产地检疫合格证有 效 期 至检 疫 日期 :) 检( ) 字第号口目口目月月年年作 物 名 称品种名称种 植 面 积田块 数 目种 苗 数 量k g ( 株)种苗来源种 植 单 位负贵人检 疫 结 果签发机关( 盖章)检疫员 年月日注: 本证一式两联， 第一联交生产单位凭证换取植物检疫证书， 第二联留存检疫机关备查。 本证不作 植物检疫证书 使用。5 . 5 . 5 若检验没有发现检疫性有害生物， 但发现限定非检疫性有害生物的， 记录下结果， 不予签发产地检疫合格证。调运时， 检疫机构视是否符合种子调入地检疫要求确定是否签发植物检疫证书。GB 1 2 7 4 3 - 2 0 0 3 附录A ( 资料性附录)大 豆限定有 害生物的田间症状A . 1 大豆疫病 幼苗期， 幼苗出土前后碎倒， 根及下胚轴变褐、 变软， 真叶期被害幼苗茎部呈水渍状， 叶片变黄， 严重者枯萎而死。 成株受害时， 往往在茎基部发病， 出现咖啡色病斑， 并向上下扩展， 病茎髓部变褐， 皮层和维管束组织坏死、 叶片变黄下垂但不脱落， 根部受害变黑褐色， 病痕边缘不清晰A. 2茧丝子 茎线状， 直径1 . 0 m m -1 . 5 m m， 黄色、 淡橙黄色或黄 绿色， 光滑无毛， 在寄主茎上向左缠绕， 叶鳞片状， 膜质。花黄白色， 多数簇生一起， 呈绣球形， 种子为小型茹果。A . 3 大豆肠易病A . 3 . 1 幼苗: 沿叶片主脉两侧出现褪绿块斑， 扩大后叶片全部变黄， 病叶背面密生灰白色霉层， 病株矮化， 叶皱缩， 封垄后死亡。A . 3 . 2 成株: 叶片上病斑散生， 呈圆形或不规则形的黄绿色小斑点， 叶背有灰白色霉层， 呈星芒状。发病重的， 病斑可汇成更大病块， 病叶干枯， 被害籽粒表面粘附有灰白色霉层。A . 4 大豆灰斑病 叶背病斑色较深， 生有黑灰色霉层( 即分生袍子梗和分生抱子) ， 干枯时破裂成孔。初在叶片表面生圆形小斑点， 后扩大。中心变灰色或灰褐色， 周缘成赤褐色， 圆形、 椭圆形、 多角形或不规则形， 荚上病斑为圆形， 褐色， 有深褐色轮廓。茎部病斑呈纺锤形， 黑褐色， 逐渐发展绕茎一周。种子上的病斑为褐色圆形， 边缘深褐色， 轻病粒仅产生褐色不规则形小点。A . 5 大豆病毒病A . 5 . 1 大豆花叶病毒病( S o y b e a n mo s a i c v i r u s )A . 5 . 1 . 1 病苗症状 大多数病苗在第 1 -2 复叶展开后都已显症， 气温持续在2 5 以上时则隐症或延迟显症， 病苗单叶两侧向下纵卷成筒状， 或倒三角形， 单叶及复叶可有斑驳、 花叶， 或背面叶脉局部坏死， 而引起叶片向下弯曲。A . 5 . 1 . 2 成株症状 花叶型: 花叶、 斑驳、 黄斑、 矮化、 皱缩。 顶枯型: 叶脉坏死， 自茎顶部生长点向下坏死， 也可弯曲A . 5 . 2 大豆矮化病毒病( S o y b e a n s t u n t v i r u s ) 单叶扭曲， 叶背脉部分坏死， 叶片沿脉抽缩， 复叶轻性斑驳， 或叶脉退绿， 成株期呈顶枯状， 与大豆花叶病的顶枯型相同。A . 5 . 3 其他病毒病 由不同病毒引起。 5GB 1 2 7 4 3 - 2 0 0 3A . 5 . 3 . 1花生轻性斑驳病毒病( P e a n u t mi l d mo t t le v i r u s )叶上有黄斑、 枯斑、 脉坏死、 斑驳或皱缩。A . 5 . 3 . 2 首蓓花叶病毒病( A l f a l f a mo s a i c v i r u s )叶片上呈现黄色斑驳或花叶 。 附录B ( 规范性附录)大豆疫病实验室检验方法B . 1 病原菌分离和培养B . 1 . 1 从病组织分离 选择典型病株， 切取病斑边缘病健组织交界处约 5 c m长的一段组织， 放人滤网中， 自来水冲洗1 0 mi n ， 然后切成 0 . 5 c m见方的小块， 放人0 . 1 %次抓酸钠水溶液中浸泡0 . 5 mi n - I mi n 后取出， 立即放人无菌水中冲洗 3 次4 次， 用选择性培养基进行分离， 室温2 2 0 C -2 5 下培养 3 d ， 在实体解剖镜下观察， 挑取疫霉菌丝， 转移到胡萝 卜 ( C A ) 或利马豆( L A) 培养基上繁殖。B ， 1 . 2 从土壤分离 将土壤风干， 研碎， 过筛( 孔径2 mm) ， 加蒸馏水润湿， 使土壤含水量达到或接近饱和， 2 4 0C 2 6 0C光照条件下培养 4 d -6 d后， 加适量蒸馏水浸泡， 浸泡水面高出土表不超过 1 . 5 e m， 加感病大豆品种5 m m叶碟诱集 6h -1 2h ， 取出叶碟， 光照条件下用无菌水培养， 1 d 3 d 后镜检叶碟边缘有无抱子囊。若有， 则吸取游动抱子悬浮液， 涂于选择性培养基上， 2 4 C-2 6 黑暗条件下培养 4h - 1 2h ， 显微镜下选择已萌发的单个抱子， 用接种针挑取含单个抱子的琼脂块转移到选择性培养基上， 2 5 0C黑暗条件下继续培养， 4h -6h后继续转皿纯化。取得单游动抱子菌株后， 以形态和致病性作最终鉴定。B . 2 鉴别特征 大豆疫霉菌在 P D A培养基上生长缓慢， 气生菌丝致密， 幼龄菌丝无隔多核， 分枝大多呈直角， 分枝基部稍有缴缩， 菌丝老化时产生隔膜， 并形成结节状或不规则膨大。膨大部球形、 椭圆形， 大小不等。菌丝体宽 3 p m-9 p m。可以产生厚垣抱子。 该菌在利马豆培养基和自来水中可以形成大量抱子囊。抱囊梗单生， 无限生长， 多数不分枝， 抱子囊顶生， 倒梨形， 顶部稍厚， 乳突不明显。新抱子囊在旧抱子囊内以层出方式产生， 抱子囊不脱落， ( 2 3 -8 9 ) p m X( 1 7 -5 2 ) p m ， 平均5 8 p mX 3 8 u m 。游动抱子在抱子囊内形成， 卵 形， 一端或两端钝尖， 具两根鞭毛， 茸鞭朝前， 尾鞭长度为茸鞭的4 倍一5倍。 利马豆不易购得， 可以用“ 白芸豆琼脂培养基” 代替。该培养基用干豆吸胀 2 4 h ， 取吸胀豆 1 5 0 g ,加3 0 0 mL蒸馏水， 用高压灭菌锅 1 2 1 0C煮2 0 mi n ， 双层纱布过滤， 滤汁加水补足至 1 。 。 。mL ， 加琼脂制成含2 %琼脂的培养基。在白芸豆琼脂培养基平板上， 菌落边缘整齐， 菌丝致密， 气生菌丝白色， 菌落前沿有环形半透明带( 淀粉利用带) ， 菌落上可产生大量卵抱子。 用胡萝 卜 或利马豆固体培养基培养、 一周后可产生大量卵抱子。藏卵器壁薄， 球形至扁球形， 直径2 9 p m -4 6 p m ， 一般在4 0 K m以 下。 雄器 侧生， 长形或圆形。 卵抱子球形， 直径1 9 f c m -3 8 p m ， 有光滑的内壁和外壁， 淡黄色， 壁厚1 t m- 3 K m 由 于常规洗涤检 验也可洗下大豆霜霉菌卵抱子， 为免混淆，可根据表 B . 1进行甄别 。CB 1 2 7 4 3 - 2 0 0 3表 B. 1 疫.菌和括扭菌卯抱子 比较项目疫 霉 菌 卵 泡 子箱母菌卯抱子卵抱子直径/ P M2 3 . 2 - 3 1 . 92 3 . 2 -2 9 . 0卵抱子壁厚/ P .2 . 3 - 3 . 21 . 3 -2 . 6卵 抱 子 形 态 及 颜 色球 形 、 黄 褐 色球形、 淡黄色卵抱子着生部位及特点种皮里面、 分散种皮表面、 集中成堆病种子表面特征无霉 层灰白色干粉状祥层B . 3 常用培养基及其配方B . 3 . 1 胡萝 卜 琼脂培养基( C A) : 胡萝 卜2 0 0 g ， 加 2 0 0 m L蒸馏水组织捣碎， 过滤， 汁液中加2 0 g琼脂加热融化， 蒸馏水补足至 1 0 0 0 m L， 分装灭菌 3 0 mi n ,B . 3 . 2 利马豆琼脂培养基( L A) : 利马豆 2 5 g ， 加水浸胀后加人 1 0 0 0 mL蒸馏水， 高温灭菌3 0 m i n ， 过滤， 加 2 0 g琼脂， 将溶液体积补充至 1 0 0 0 mL , 高温灭菌 3 0 mi n ,B . 3 . 3 在 C A或 L A培养基中添加不同药剂即配置成多种选择性培养基， 常用的有以下几种:B . 3 . 3 . 1 P A R P选择性培养基: 在 C A或 L A基础培养基中添加匹马霉素( P i m a r i c in ) 1 0 mg / L ， 安比西林( A mp i c i l li n ) 2 5 0 m g / L， 利福平( R i f a mp i c i n ) 1 0 mg / L ， 五氯硝基苯( P C N B ) 5 0 mg / L ,B . 3 . 3 . 2 P A R P H选 择性培养基: 在C A或L A基础培养基中 添加匹马 霉素( P i m a r i c i n ) 1 0 m g / L ， 安比西林( A mp i c i l li n ) 2 5 0 m g / L， 利福平( R i f a mp i c i n ) 1 0 mg / L ， 五氯硝基苯( P C N B ) 5 0 mg / L , 恶霉灵( Hy -me x a z o l ) 5 0 mg / L ,B . 3 . 3 . 3 P B N C选择性培养基: 在 L A基础培养基中添加五氯硝基苯( P C N B ) 2 0 m g / L, 苯莱特( B e n -l a t e ) 5 mg / L ， 硫酸新霉素( N e o my c i n S u l f a t e ， 新丝霉素) 1 0 0 mg / L , 氯霉素( C h l o r o a mp h e i c o l) 1 0 mg / L , 附录C ( 规范性附录)大豆病毒病种传率的检测技术C . 1 检测范围原原种 和原种 。C. 2器材C . 2 . 1 防虫温室或网室。C . 2 . 2 河沙、 砾石、 珍珠岩或消过毒土壤， 任选一种。C . 2 . 3 花盆或塑料果盘( 长方形， 约长4 5 c m、 宽 3 3 c m、 高 1 0 c m， 底有细孔) 供播种。C . 2 . 4 消毒 钵体。C . 2 . 5 电镜。C . 2 . 6 硅藻土或金刚砂( 4 0 0目6 0 0目) 。C . 2 . 7 指示作物菜豆品种“ mo n r o e b e a n ， 供试幼苗， 要求在防虫温室培育， 在单叶到一片复