【精品论文】青光安对兔眼滤过性术后中 I 型胶原蛋白的.doc

精品论文青光安对兔眼滤过性术后中 i 型胶原蛋白的影响刘艳，彭清华，李文娟5（湖南省中医药大学第一附属医院眼科重点学科，长沙 412200）摘要：目的 观察青光安有效组份对兔眼滤过性手术模型中 i 型胶原蛋白表达的影响，探讨 其抗青光眼术后滤过到瘢痕化的效果，并初步探讨青光安有效组份的毒性作用。方法 将健 康成年新西兰长耳白兔 42 只，采用随机数字法分为 a 组：空白组；b 组：模型组；c 组： mmc 对照组；d 组：有效组份 1 组；e 组：有效组份 2 组；f 组：有效组份 3 组；g 组：10有效组份 4 组。动物在造模后第 2 天开始用药并观察滤过泡形成情况；检查术口愈合及眼部 一般情况。用药 4 周后 he 染色观察滤过性手术术区组织形态,免疫组织化学方法检测滤过 泡区域 tenon 囊组织中型胶原蛋白的表达。结果 术后 c 组和 e 组能维持有效滤过泡，b组滤过泡在术后两周内基本都变为无功能滤过泡或滤过泡消失，d、f、g 组在术后第 4 周都有部分滤过泡存在。型胶原蛋白的表达除 c 组与 e 组、b 组与 g 组、f 组与 g 组组间15胶原表达差异无明显统计学意义，其他组间两两比较结果均为 p0.05，差异具有明显统计 学意义。术后一般情况及第 4 周标本光镜观察，mmc 组有一眼出现术后并发症，各有效组 份组眼部组织结构未见异常病变。结论（1）在正常兔眼上行常规小梁切除+虹膜根部切除术， 可成功建立滤过性手术模型。（2）青光安有效组份 2 和 mmc 可通过抑制型胶原蛋白， 起到抗青光眼术后滤过道瘢痕化的作用。（3）通过实验观察初步说明青光安有效组份口服20给药，无明显毒副作用，安全性优于 mmc。可能成为抗青光眼术后滤过道瘢痕化，提高手 术成功率的一个全新安全药物。关键词：中医眼科学；青光眼；滤过道瘢痕化；青光安有效组份；型胶原蛋白；毒性作用中图分类号：r276.725effect of effective components of qing guang an on type i collagen of scarring tissue of filtration canal afterglaucoma surgery and a preliminary study of their toxic effectsliu yan, peng qinghua, li wenjuan30(the key discipline of ophthamology,the first affiliated hospital of hunan traditional chinesemedicine university,changsha 412200)abstract: abstract:object: to observe effects of four effective components of qing guang an on typecollagen of scarring tissue of filtration canal after glaucoma surgery, and discuss their effecton preventing its formation, and a preliminary judgment on their toxic effects.methods: 42 healthy35adult new zealand long ears white rabbit, were divided into 7 groups randomly with 6 rabbits in each group. these seven groups were used as following: group a was blank group;group b wasmodel group; group c was a control group of mmc; group d, e, f, g was used effective component signed respectively as 1, 2, 3, 4. the next day after molding began to use medicine on each group. after surgery, the formation of filtering bleb was observed , and the intertion status40and eyes general condition were checked. after using medicine for four weeks，after dyed by heorganization structure where the surgery had done. expression of typecollagen in tenon boursein filtering bleb area was checked with the immunohistochemical method.result: c, e groups基金项目：国家自然科学基金资助项目(no.81273807);教育部博士点基金专项课题(no.20124323110006);湖 南省自然科学基金重点资助项目(np.11jj2050);湖南省教育厅科研基金重点资助项目 (no.06a052,no.10a094);湖南省卫生厅科研基金项目(no.204084);国家中医药管理局中医眼科学重点学科建 设项目;湖南省中医五官科学重点学科建设项目作者简介：刘艳，（1986-），女，医师，主要研究方向：中西结合眼科眼底病与角膜病。通信联系人：彭清华，（1964-），男，教授，主要研究方向：中西结合眼科。e-mail: - 9 -remained effective filtering bleb. filtering bleb in group b turned into no function or disappeared two weeks after surgery. group d, f, g had part of filtering bleb existing four weeks after surgery.45comparing with the the expression of typecollagen, except group c and e, b and g, f and g,result of others have obvious significance on statistics showing as p 0.05，胶原表达差异无 明显统计学意义。其他组间两两比较结果为 b 组与 f 组，p0.05，差异具有统计学意义, 余均为 p0.01，差异具有显著统计学意义。从实验结果的分析可以得到以下结论，在青光 眼滤过手术的过程中，结膜瓣下放置 mmc 棉片，可以使术后滤过道内瘢痕组织中型胶原 蛋白的合成极大的减少，而术后口服青光安有效组份可以在不同程度上抑制型胶原蛋白的 合成，其中以有效组份 2 的效果最好。图 8-14(400 倍)图 8：a 组正常结膜基质中胶原蛋白表 达很少。图 11：d 组胶原蛋白表达较正常组明显 增高，阳性面积率大。图 9：b 组胶原蛋白异常增高表达，胶 原纤维致密。图 12：e组胶原蛋白表达较 mmc 组稍高， 密度也大一些。图 10：c 组胶原蛋白表达比正常组增多， 但胶原纤维稀疏，面积少。图 13：f 组胶原蛋白表达比 b 组少，基 本同d 组。图 14：g 组胶原蛋白表达明显增高，基本达到 b 组水平。2302352402452502556结论中医对青光眼的认识有着悠久的历史，根据其症状及临床表现，开角型青光眼可归属于 中医“青风内障”，而闭角型青光眼归属于“绿风内障”的范畴。祖国医学对青光眼的治疗， 最开始没有手术治疗这一方法，但中医眼科传统外治法及手术治疗眼病的方法早在南北朝以 前的医学史料中就有提及，在审视瑶涵点服之药各有不同问答论一篇中更明确写道： “若内病既成，外症又见，必须内外并治，故宜点服俱行。”中医对眼病术后气血经络 功能的调理等有丰富的经验。现代眼科工作者在中医理论的指导下，根据青光眼的发病机理、 手术特点及术后临床表现，认识到青光眼术后都存在气阴两虚，脉络瘀滞，神水淤积的病理 特点，治疗上宜虚实兼顾，标本兼治。国内外对防治青光眼术后滤过道瘢痕化的研究，取得 了一定的进展，但临床应用效果都不十分明显，存在着疗效差、并发症多等问题。本实验成功建立滤过手术动物模后，将 4 种青光安组份应用于术后动物模型上，并通过 与空白组、手术模型组、mmc 药物组比较，观察发现：he 染色光镜下观察可见滤过泡区域及 巩膜板层间滤过道中，成纤维细胞增殖较正常手术组明显减少，胶原纤维排列整齐稀疏，瘢 痕组织间有明显间隙，滤过通畅；免疫组化方法检测滤过泡区域型胶原蛋白的表达，该两 组胶原蛋白光密度值与正常手术组比较差异也有显著统计学意义，该两组中型胶原蛋白的 合成明显减少。根据本动物实验研究中型胶原蛋白检测的结果，滤过泡形态、炎症反应 等常规指标的观察，以及结合前期实验中成纤维细胞和术后眼压变化的结果，分析得出青 光安有效组份 2 抗青光眼术后滤过术后道瘢痕化的作用机制可能为：由于药物益气滋阴等 作用，增强了机体的抵抗力，缓解了术后炎症反应，使房水来源及血浆来源的细胞因子产生 减少，趋化周边成纤维细胞向创伤部位移动的力量减弱，使得滤过道处成纤维细胞迁徙减少；通过调节成纤维细胞中 tgf-1 等细胞因子的合成，使得 tgf-/smad3 细胞信号转导途 径的信号传导减弱，成纤维细胞合成分泌型胶原的功能得不到发挥，从而降低滤过道内胶 原纤维的密度；由于型胶原等细胞外基质的密度降低，其交联粘附力度不够，反过来又 抑制了成纤维细胞的增殖。以上几个原因循环交互，最终使得滤过道瘢痕组织增生较少，保 持了滤过道的通畅。新药的开发除了疗效这一方面的研究外，还有一个必不可少的决定因素就是药物的毒性 作用。青光安 4 种有效组份（尤其是组份 2）应用于滤过术后动物模型，取得了显著的抑制 滤过到瘢痕化的效果，我们可以从这 1 个月的动物实验观察，初步评价青光眼有效组份口服 用药的安全性。mmc 组的 6 个标本就有一个出现了用药区域内结膜上皮及巩膜溶解，角膜损 害及脉络膜脱离病变。本实验中 mmc 的用法为 0.2 mgml 浓度的 mmc 棉片结膜瓣下放置 2 分钟后，彻底冲洗干净，这是 mmc 临床多次研究证实的最常规保守用法。不仅在本动物实验 中，在许多学者所做的 mmc 的研究中均多次发现过类似并发症。很多个实例说明 mmc 可导致260265270275如角膜上皮缺损、角膜浅层血管化，结膜巩膜损伤，术后持续低眼压浅前房、脉络膜脱离、黄斑病变、眼内炎等毒性反应8-10。本实验中有效组份 4 个组所有动物，在灌胃 28 天之后， 全身一般状况良好，眼部未见角膜上皮损伤，结膜上皮层及巩膜结构正常，无虹膜睫状体萎 缩样变或视网膜脉络膜病变等其他眼部损害情况，说明青光安有效组份短期服用一个月不具 有明显的毒副作用。参考文献 (references)1 azuara blanco a,katz lj.dysfunctional filtering blebsj.survophthalmol,1998,43(2):93-1262 vote b,fuller jr,bevin th,et al.system icant in inflammatory fibrosis suppression in threatenedtrabeculectomy failurej.clin expophthalmo,2004,32(1):81-863 herstorits b modified trab yields high successj.ocul surg news,2004,15(4):8-104 姚新生.中药天然药物活性成分的研究方法j.药学服务于研究,2003,3(4):205-2095 王瑞琳,李贵刚,陈志祺,等.he-ne 激光对兔眼小梁切除后滤过道瘢痕化的影响极其机制j.国际眼科杂 志,2010,10(9):16