细胞化学染色ppt课件.ppt

细胞化学染色,Cytochemical stain,概 念,细胞化学染色是以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学物质（糖类、蛋白质、脂类、酶类、铁、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。 细胞原位的化学反应,临床应用,辅助判断急性白血病的细胞类型 辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断（Fe、NAP等）,FAB ALL（急性淋巴细胞白血病）L1、L2、L3 AML（急性髓细胞白血病） M0 急性粒细胞白血病（微分化型） M1 急性粒细胞白血病（未成熟型） M2 急性粒细胞白血病（部分成熟型） M3 急性早幼粒细胞白血病 M4 急性粒单核细胞白血病 M5 急性单核细胞白血病 M6 急性红白血病 M7 急性巨核细胞白血病,细胞化学染色的基本步骤,固定,显示,复染,保持细胞结构及化学成分不变，并使血 膜在染色、冲洗过程中不易脱落损坏,形成稳定的有色沉淀，显示出被检 测的化学物质,既能显示细胞结构又能清楚地看出细 胞化学染色结果,细胞化学染色的种类,过氧化物酶染色（POX)、苏丹黑染色（SBB) 过碘酸-雪夫反应（PAS）又称糖原染色 酯酶染色 酸性磷酸酶染色（ACP) 铁染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）,过氧化物酶染色 Peroxidase stain, POX,染色原理（四甲基联苯胺法）,H2O2 溶酶体颗粒中的 H2OO2 四甲基联苯胺 O2 联苯胺蓝 联苯胺蓝亚硝基铁氰化钠 O2 蓝色物质 （沉淀）,正常血细胞的染色反应,粒细胞系统 原粒（可为阴性） 分叶（阳性程度逐渐增强） 嗜酸阳性最强 嗜碱阴性 单核细胞系统 阴性或弱阳性（颗粒少而细） 其他血细胞 阴性,临床意义,1.ALL：原始细胞的POX阳性3% 2.AML：原始细胞的阳性3% 在多数的M1、绝大部分M2和M3中，原始细胞的阳性率大于85%，M3呈强阳性； M4和M5时，原单有时可呈弱阳性，但绝大多数的原单是POX阴性。 M6，原粒和幼稚粒细胞是POX阳性，幼红细胞是POX阴性。 M7，血小板POX的活性只能在超微结构上证实。,POX染色的临床应用,POX染色是辅助诊断急性白血病细胞类型首选、最重要的细胞化学染色，主要用于急性白血病的鉴别诊断。 急性粒细胞白血病时，其原、幼细胞呈阳性反应，以APL 反应最强;急性单核细胞白血病时，原幼细胞呈弱阳性反应 ALL时呈阴性反应,用途：鉴别急性淋巴系与非淋巴系白血病 结果：粒系(+)；单核系()； 淋巴系(),过氧化物酶染色( peroxidase，POX ),苏丹黑染色 Sudan black, SBB,苏丹黑染色,原理：SBB能溶解于细胞内的含脂结构，使脂类物质显示出来，呈棕黑色或深黑色。 正常细胞的染色反应 同POX染色。 临床评价 POX染色特异性高于SBB染色 SBB染色敏感性高于POX染色,过碘酸-雪夫反应(糖原染色） Periodic acid-Schiff reaction, PAS,染色原理（PAS）,乙二醇基（多糖类物质中） 过碘酸 双醛基无色品红 紫红色化合物,正常血细胞的染色反应,粒细胞系统 原粒（可为阴性） 分叶（阳性 程度逐渐增强） 嗜酸胞质呈红色，颗粒不着色 嗜碱反之 红细胞系统 阴性 单核细胞系统 原单（可为阴性）， 其他阳性,正常血细胞的染色反应,淋巴细胞系统 大多数阴性，少数阳性。 巨核细胞系统 巨核细胞和血小板阳性，阳性反应的程度随细胞的发育成熟而增强。,临床意义,红细胞系统疾病 红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）；某些红系良性疾病如缺铁贫、巨幼贫等阴性。 白细胞系统疾病 ALL：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗颗粒或块状） 急粒：少数原粒呈阳性，阳性细颗粒状 急单：可呈阳性，阳性细颗粒状,PAS临床意义,AML-M6 幼红细胞呈阳性反应,MA 幼红细胞呈阴性反应,ALL,AML-M6,AML-M6 PAS(+),AML-M5,M5 PAS(+),AML-M7,M7 PAS(+),PAS染色的应用,鉴别淋巴系统增生的性质： 凡恶性增生时PAS反应多呈强阳性反应，见于急、慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤等。 鉴别红系增生的性质： 凡恶性增生者， 如红血病、红白血病其原、幼红细胞多 呈强阳性反应；增生性贫血、巨幼贫， PAS多为阴性。 有助于巨核细胞白血病的诊断,酯酶染色,-醋酸萘酚酯酶染色(-NAE),原理 -醋酸萘酚 PH中性 -醋酸萘酚酯酶 -萘酚+重氮盐(坚牢蓝B) (黑色或灰黑色),正常血细胞的染色反应,单核细胞、粒细胞、淋巴细胞（均可+） 仅单核细胞的阳性可被氟化钠抑制(NaF抑制率50%)。 NaF抑制率=抑制前的阳性率/积分-抑制后的 抑制前的阳性率/积分 100%,-NAE对诊断急性白血病的作用,酸性磷酸酶染色 Acid phosphatase, ACP,ACP染色的临床意义,铁染色 Ferric stain,染色原理（Fe染色）,铁+亚铁氰化钾 酸性环境 亚铁氰化铁（蓝色）,正常血细胞的染色反应,正常人骨髓中的铁主要存在于骨髓小粒及幼红细胞中，分为细胞外铁和细胞内铁。 细胞外铁：骨髓小粒的巨噬细胞中 细胞内铁: 中幼红细胞、晚幼红细胞 及红细胞中 铁粒幼红细胞-含铁颗粒的中、晚幼红细胞 铁粒红细胞-含铁颗粒的红细胞,细胞外铁的观察,低倍镜观察骨髓小粒中的铁，阳性结果呈弥散性、颗粒状、小珠状或块状蓝色。,细胞内铁的观察,5,3,5,3,环形铁粒幼细胞,参考范围： 细胞外铁： （+）（+） 细胞内铁：铁粒幼红细胞12% 44%，以型为主，少数为型，无环形铁粒幼红细胞及铁粒红细胞。,临床意义,MDS,中性粒细胞碱性磷酸酶染色 Neutrophilic alkaline phosphatase NAP,染色原理（NAP染色）,Kaplow偶氮偶联法：中性粒细胞胞质中的碱性磷酸酶在PH9.6的碱性条件下能水解磷酸奈酚钠底物，生成奈酚，后者与偶氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀定位于胞质中的酶活性处。（紫黑色颗粒） 钙-钴法：红色颗粒,正常血细胞的染色反应,NAP主要存在于中性成熟粒细胞（包括中性杆状核粒细胞和中性分叶核粒细胞）胞浆内，故中性成熟粒细胞胞浆呈阳性，其他细胞基本呈阴性。,参考范围： 阳性率40%； NAP积分值为30130分。,临床意义,NAP积分增加： 细菌性感染(包括类白血病反应）、再生障碍性贫血、某些骨髓增殖性疾病、慢性粒细胞白血病（加速期、急变期）、急性淋巴细胞白血病、慢