课件：超敏反应及检验.ppt

超敏反应及其检验,一、基本概念,超敏反应（hypersensitivity） ： 是指机体对某些抗原初次应答后，再次接受相同抗原刺激时发生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。 同义词 变态反应（allergy） 过敏反应（anaphylaxis）,二、超敏反应的分型,按发生机制和临床特点可分四型： I型： 速发型 II型： 细胞毒型或细胞溶解型 III型：免疫复合物型或血管炎型 IV型： 迟发型,三、 I 型超敏反应（速发型）,发病率大约占人口的20%，从新生儿到中老年人各年龄段都有可能发生，没有明显的性别倾向，但有明显的遗传性倾向。 在我国，过敏性疾病的发病率已由前几年的30%迅增到现在的50%，成为影响人类健康的重要问题。世界卫生组织将其列为二十一世纪重点防治的疾病之一。世界卫生组织对该病已提出预防性治疗的主导思想。建立快速、有效的检测方法已成为新的热点之一。,I型超敏可涉及多种器官，组织,扁桃体,鼻息肉,荨麻疹,湿疹,结膜炎,哮喘病,超敏反应可能是致命的,发生快、消失快 主要由IgE介导 表现为生理功能紊乱，一般无组织损伤 具有明显的个体差异和遗传倾向,I 型超敏反应的特点,参与I型超敏反应的成分和细胞, 变应原（allergens） 指能选择性地激活CD4+Th2细胞及B细胞，诱导产生特异性IgE抗体应答，引起变态反应的抗原性物质 天然变应原分子量较小的可溶性蛋白质抗原 某些药物或化学物质本身只具抗原表位而无免疫原性，进入人体后需和组织蛋白结合而获得免疫原性，成为变应原,变应原的分类,食入性变应原,药物 青霉素 磺胺、VitB 普鲁卡因 有机碘化物,吸入性变应原 花粉 尘螨或其排泄物 真菌或其孢子 动物皮屑或羽毛,昆虫, 变应素（allergins） 是指引起I型超敏反应的特异性IgE类抗体。 IgE主要由鼻咽、扁桃体、气管和胃肠道粘下固有层淋巴组织中的B细胞产生，这些部位也是变应原易于侵入引发过敏反应的部位。 IgE为亲细胞抗体，可通过其Fc段与肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面IgE Fc受体结合，使机体处于致敏状态。 有小部分为IgG4类抗体。, 肥大细胞和嗜碱性粒细胞（Mast cell and basophils） 肥大细胞 结缔组织肥大细胞小血管周围结缔组织中 黏膜肥大细胞黏膜下层 嗜碱性粒细胞 分布在外周血中，也可被招募到变态反应局部发挥作用 两种细胞表面都具有高亲和性IgE Fc受体，与IgE Fc段结合后使细胞处于致敏状态。胞质内富含生物活性介质颗粒。, 嗜酸性粒细胞 分布于呼吸道、消化道和泌尿生殖道黏膜组织中，外周血中少量存在 细胞表面通常不表达高亲和性IgE受体。当被某些细胞因子（IL-3，IL-5或血小板活化因子）激活后，可表达高亲和性IgE受体,使细胞脱颗粒，释放活性介质。, 活性介质 组胺：预存介质。使血管扩张、通透性增加，平滑肌痉挛，腺体分泌增加 ，致痒。引起即刻相反应的主要介质 白三烯：新成介质。 使支气管平滑肌强烈而持久的收缩。是引起支气管哮喘的主要介质。,前列腺素：刺激支气管平滑肌收缩，使血管扩张和通透性增加。 血小板活化因子（PAF）：聚集活化血小板释放活性胺类;活化炎症性白细胞释放炎症介质 。 激肽原酶：激肽原缓激肽,引起毛细血管扩张，通透性增强，支气管、子宫以及肠道平滑肌收缩及刺激神经末梢引起疼痛。,I型超敏反应的发生机制,花粉,初次,机体,IgE,吸附于,肥大细胞 嗜碱性细胞,再次进入机体,与肥大细胞或嗜碱性细胞上的IgE结合,释放活性介质,组胺，白三烯，激肽等,平滑肌收缩、毛细血管扩张、通透性增加、 腺体分泌增加等病理变化,型超敏反应的常见疾病,过敏性休克 1.药物过敏性休克 药物：青霉素(最常见)、普鲁卡因、利多卡因、 链霉素、磺胺、有机碘等。 机制：青霉素 机体 青霉噻唑醛酸和青霉 烯酸 与人体组织蛋白结合（完全抗 原） 产生特异性IgE 过敏性休克。 2.血清过敏性休克 动物血清：抗毒素血清，如破伤抗毒素血清和白 喉抗毒素血清,呼吸道过敏反应 过敏原：尘土、花粉、霉菌、动物皮屑或呼吸吸道感染等。 常见病：过敏性鼻炎和过敏性哮喘。 消化道过敏反应 过敏原：鱼、虾、蛋、奶及一些药物。 常见病：过敏性胃肠炎。 皮肤过敏反应 过敏原：多种抗原，或冷热刺激、日光照射、肠内寄生虫感染等。 常见病：荨麻疹、湿疹、皮炎、神经血管性水肿。,I型超敏反应的检测,皮肤试验,血清IgE检测,组胺释放试验,流式细胞术检测活化脱颗粒嗜碱性粒细胞,1. 皮内试验 抗原和对照液各0.020.03ml分别用皮试针头注入皮内，使局部形成圆形皮丘。最常用的I型超敏反应检测方法。 2. 点刺试验 将抗原与对照液分别滴于试验部位皮肤上，用针尖透过液滴在皮肤上轻轻挑刺一下，以不出血为度，1分钟后拭去抗原液。 1530分钟内观察结果。皮内试验的阳性反应以风团为主，点刺试验的阳性反应以红晕为主。,皮肤试验,皮肤试验的评价 能反映机体各种因素综合作用的实际免疫状态，操作简单。临床常用于预防药物过敏，寻找、鉴定过敏原。 可出现假阳性和假阴性的结果。 有时会发生致命危险。,血清IgE的检测（ELISA法）,总IgE检测： 用抗IgE抗体包被固相 特异性IgE检测： 用变应原包被固相,总IgE测定 酶联免疫测定法，国内最常用。 固相放射免疫测定法，125I标记，有放射污染和需要计数设备。 临床意义 IgE水平受地域、种族、年龄、性别、遗传和测定方法等影响。 有些过敏者IgE不高，而血清IgE水平高的并非都是过敏患者。,特异性IgE的测定 需要用纯化的过敏原去检测相应的IgE抗体。 特异性过敏原放射免疫吸附试验（RAST） 酶联免疫测定法 临床意义 特异性强、影响因素少、对患者绝对安全。 敏感度比皮试低、检测费用高、费时、不同试剂盒 不易对比。 只表明机体的致敏，但不能说明临床危险度（发病风险大小和严重程度）,免疫印迹法检测特异性IgE及总IgE,嗜碱性粒细胞组胺释放试验（HRT）,目前仍是国外最常用I型超敏反应的诊断手段。 这种基于放免原理的方法是检测特异性过敏原通过与嗜碱性粒细胞膜表面的IgE桥联而使后者脱颗粒释放出的组胺的量，具有敏感、特异的特点。 缺点：费时耗钱，步骤繁琐；需要的血标本量相对较多；不能排除其它来源（如血小板）的组胺的干扰。,高倍镜和油镜下的嗜碱性粒细胞,流式细胞术检测活化脱颗粒嗜碱性粒细胞,流式细胞术检测嗜碱性粒细胞脱颗粒试验简便，易操作；更因为该实验在体外极为近似地模拟了I型超敏反应的发病过程，在疾病发病危险度的预测，发病严重程度的评估方面能起到重要作用。,流式细胞术检测活化脱颗粒嗜碱性粒细胞原理,静止期的嗜碱性粒细胞膜表面只表达少量的CD63；其胞浆中内含生物活性物质的囊泡的膜表面富含CD63；细胞膜表面高表达CD63表明了嗜碱性粒细胞活化 检测嗜碱性粒细胞膜表面抗原表达量的改变,嗜酸性粒细胞测定,外周血嗜酸性粒细胞计数 多用直接计数法。常用苯酚甲醛伊红染色液，低渗，可溶解红细胞和其他白细胞。 嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（ECP） ECP是嗜酸性粒细胞释放的毒性蛋白之一，可造成呼吸道上皮细胞的损伤。由于取材因素，临床常用患者血清作为检测标本。方法同特异性IgE相同。,I型超敏反应的防治原则,找出变应原，避免接触:变应原皮肤试验 脱敏疗法： 异种免疫血清脱敏疗法：小量多次注射,暂时性 特异性变应原脱敏疗法：少量多次,IgG+过敏原封闭抗体、阻断抗体 药物防治： 抑制生物活性介质释放：色甘酸二钠，稳定细胞膜、阻止释放颗粒 生物活性介质拮抗物：扑尔敏，抗组胺；乙酰水杨酸，拮抗缓激肽 改善效应器官的反应性：肾上腺素，收缩外周毛细血管,四、 II 型超敏反应（细胞毒型）,是由IgG或IgM类抗体与靶细胞表面相应抗原结合后，在补体、吞噬细胞和NK细胞参与作用下，引起的以细胞溶解或组织损伤为主的病理性免疫反应。 抗原与抗体特异结合后，通过： 1. 激活补体 2. 调理作用 细胞溶解 3. ADCC作用,参与II型超敏反应的成分和细胞,抗原 细胞固有抗原 如血型抗原（ABO、Rh）、HLA抗原、肺/肾基底膜抗原 外来抗原/半抗原吸附在细胞上 如病原微生物、药物 共同抗原 如链球菌胞壁多糖抗原与心脏瓣膜和关节组织糖蛋白之间的共同抗原 改变的自身抗原,抗体IgG/IgM 此类抗体具有补体C1q结合点，通过补体溶解靶细胞； IgG抗体通过Fc段与效应细胞受体结合，ADCC作用 参与细胞 吞噬细胞和NK细胞,机体,激活补体,ADCC,调理作用,抗原抗体结合,刺激,产生,II型超敏反应常见疾病,输血反应 多发生于ABO血型不符的输血。 B型血受者体内含天然的抗A血型抗体，误输入A型血液后，抗A抗体和A抗原结合，激活补体，溶解输入的A型红细胞，发生溶血反应。,新生儿溶血症 多发生于母子间Rh血型不符。 Rh-母亲因输血、流产或分娩接受Rh抗原刺激后，产生IgG类型的Rh抗体。此抗体可通过胎盘。 当再次怀孕Rh+血型的胎儿时，通过胎盘的Rh抗体与胎儿红细胞结合使之溶解发生新生儿溶血症。 母子间ABO血型不合也可引起新生儿溶血症，但症状较轻。,医学免疫学,上海第二医科大学免疫教研室,自身免疫性溶贫、药物过敏性血细胞减少症 服甲基多巴类药物或某些病毒感染后，红细胞膜表面成分发生改变，刺激机体产生抗红细胞自身抗体。 溶血性贫血 粒细胞减少症 血小板减少性紫癜,肺肾综合征、链球菌感染后肾小球肾炎 病毒感染使肺泡壁基底膜抗原变化，机体产生自身抗体。因肾小球基底膜与肺泡壁基底膜具有共同抗原，故两者同时受上述自身抗体的作用，发生免疫损伤。同时表现肺部和肾脏的症状。 A族12型溶血性链球菌与肾小球基底膜也有共同抗原。链球菌感染后可能会发生肾小球肾炎。,自身免疫性受体病 甲状腺功能亢进（Graves病）（TSH受体） 特殊的II型超敏反应即抗体刺激型超敏反应。 患者产生针对甲状腺细胞表面甲状腺刺激素（TSH）受体的自身抗体。抗体与甲状腺细胞表面TSH受体结合，刺激甲状腺细胞合成分泌甲状腺素，引起甲亢。 重症肌无力（乙酰胆碱受体抗体） 胰岛素抗性糖尿病（抗胰岛素受体抗体）,II型超敏反应检测,血型检测 血细胞的数量 抗血细胞抗体 抗基底膜抗体 抗甲状腺刺激素受体抗体,五、 III型超敏反应（免疫复合物型）,由中等大小可溶性免疫复合物沉积于局部或全身毛细血管基底膜后，通过激活补体和在血小板、嗜碱性、嗜中性粒细胞参与作用下，引起的以充血水肿、局部坏死和中性粒细胞浸润为主要特征的炎症反应和组织损伤。,参与III型超敏反应的成分和细胞,抗原抗体复合物 又称免疫复合物（IC）。抗原可以是自身的抗原，也可是外来的抗原（微生物，寄生虫，药物半抗原等）。 大分子不溶性IC被单核巨噬细胞吞噬清除 小分子可溶性IC通过肾小球滤过膜随尿排出 中等大小可溶性IC长期存在血流中时，可能沉积于毛细血管基底膜，引发III型超敏反应。,补体成分 主要为C3a，C5a，C5b67和C3b。 细胞 中性粒细胞，嗜碱性粒细胞，肥大细胞和血小板等。,中等大小免疫复合物,沉积于血管基底膜,血小板积聚,形成血栓,激活补体,吸引中性粒细胞,组织损伤,局部缺血,溶酶体酶,嗜碱性粒细胞和肥大细胞,血管活性物质,毛细血管扩张、渗出增加,炎症,局部充血、水肿,释放,释放,III型超敏反应常见疾病,人类局部IC病:多次注射胰岛素、狂犬疫苗及类毒素时，这些抗原和局部已产生的相应的抗体结合成IC并沉积导致急性炎症反应。注射局部出现皮肤红肿、出血甚至坏死。,局部IC病Arthus反应,血清病:初次接受大剂量异种动物免疫血清治疗后12周，可出现局部红肿、皮疹、淋巴结肿大、关节疼痛和发热等症状，称初次血清病。随着抗原被逐渐清除，可自行恢复。,感染后肾小球肾炎 发生于A族溶血性链球菌感染后23周。 体内产生的抗链球菌抗体与链球菌可溶性抗原结合成IC，沉积在肾小球基底膜所致。 葡萄球菌，肺炎链球菌及乙肝病毒感染后，也可导致肾小球肾炎。,系统性红斑狼疮和类风关 都是自身免疫病，病因未明。 目前认为两者都于IC的反复沉积有关，为慢性IC病。 SLE患者多种抗核抗体与血中核抗原结合，形成可溶性中等大小IC，反复沉积于毛细血管基底膜，引起多部位持续性血管炎。 RA患者体内出现抗自身变性IgG的抗体（类风湿因子:RF），与自身变性的IgG结合成IC，反复沉积于关节滑膜，引起RA。,系统性红斑狼疮 SLE,III型超敏反应检验,免疫复合物（IC）检测 循环免疫复合物检测 固定或沉积于组织中IC的测定,PEG沉淀法,补体技术,六、 IV型超敏反应（迟发型）,是由效应T细胞与相应抗原作用而引起的以单个核细胞浸润和组织细胞变性坏死为主要特征的炎症反应。 因其发病较慢，在接受超敏原刺激后2472小时发生，故称迟发型超敏反应。 因其无抗体和补体参与，是由T细胞介导，故又称细胞介导型超敏反应。,参与IV型超敏反应的成分和细胞,超敏原 胞内寄生菌，病毒，真菌，寄生虫和化学物质等 细胞因子及效应分子 炎性T细胞释放的趋化因子及细胞毒性T细胞释放的穿孔素和颗粒酶等 细胞 T细胞（CD4+Th1细胞，CD8+Tc细胞），单核吞噬细胞,IV型超敏反应的常见疾病,传染性IV型超敏反应,麻疯病人,结核菌素试验,接触性皮炎,半抗原 橡胶成分