生化实验血糖的测定.ppt

血糖的测定,实验四,血糖及血糖水平的概念：,血糖：指血液中的单糖：葡萄糖,血糖水平：血浆中葡萄糖浓度,血糖总维持在恒定水平： 3.96.7mmol/L,调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。 血糖水平异常：高血糖及糖尿病；低血糖,临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的主要依据。 科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。,测定血糖的意义,体液糖的测定项目：,血糖浓度测定 口服糖耐量试验 糖化血红蛋白试验 糖化血清白蛋白测定 胰岛素测定 C-肽测定等,测定方法,无机化学法： Folin-Wu法,有机化学法：邻甲苯胺法,酶法：葡萄糖氧化酶法,血糖测定的常用方法,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理,（1）葡萄糖O2H2O,（2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚,葡萄糖酸H2O2,葡萄糖氧化酶（GOD）,H2O 红色醌式物质,过氧化物酶 （POD）,Trinder反应,505nm,光吸收法测定,相对血糖浓度,分光光度计的原理,分光光度技术 电泳技术 层析技术 离心技术,生物化学的四大研究技术：,光的波粒二象性 物质的光吸收性 分光光度计的原理,分光光度计的工作原理,朗伯-比尔定律,朗伯定律：A=k1L 比尔定律：A=k2C 朗伯-比尔定律：如同时考虑液层厚度和溶液浓度对吸光度的影响，则吸光度与溶质的浓度和溶液的厚度的乘积成正比。 A=KLC,朗伯-比尔定律应用,A标=KC标L A样=KC样L,标准品法测定未知样品含量,1. 接通电源，调整波长。 2. 比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中，注意：加入样品量不超过比色杯体积的2/3。 3. 调模式为“透射比”，对空白对照进行调“0”（开盖）和调“100”（闭盖）。 4. 调模式为“吸光度”，将空白对照调“0”，测定待测样品的吸光度值。,分光光度计的使用,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测激素对血糖浓度的影响,方法,（1）取4支试管，按下表加入试剂:,实验步骤：,充分混匀，37 水浴中保温20min；,冷却至室温后，505nm处比色,比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管光密度值。,（2）计算： 依据朗伯-比尔定律： A=KLC 标准管葡萄糖浓度：5mmol/L,正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液应占比色皿的2/3。 血糖测定应在取血后2小时内完成，放置太久，血糖易分解，故使含量降低。 酶酚混合液一般现用现配。,注意事项,补充实验,测2-3名同学早餐后和空腹血糖的水平，并比较二者之间的区别。 使用怡成JPS-5型血糖仪。,小结,1、葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法测定血糖的原理。 2、分光光度计的正确使用。 3、实验操作中存在的问题。,其他常用血糖测定方法介绍,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法 Folin-Wu法 邻-甲苯胺法,原理 葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使 Cu2+还原成Cu+ ，后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色的钼蓝。通过比色法测定蓝色化合物，计算出血糖的含量。 评价 稳定、准确、但对葡萄糖无特异性，受血中非糖还 原物质的影响。 空腹正常血糖参考值 4.46.7mmol/L或80-120mg/dL,Folin-Wu法,其他常用血糖测定方法介绍,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法 Folin-Wu法 邻-甲苯胺法,原理 葡萄糖在冰醋酸中加热脱水后，与邻-甲苯胺缩合产生蓝绿色的席弗(Schiff)碱，颜色的深浅与葡萄糖含量成正比，可通过比色法测得血糖含量。 评价 结果较可靠、但邻-甲苯胺须蒸馏后使用，有毒性。 空腹正常血糖参考值 3.96.1mmol/L或70-110mg/dL,邻-甲苯胺法,葡萄糖氧化酶法：该法特异性高，反应条件温和，能反映血中葡萄糖的真实含量，且已推广出试剂盒，广泛应用与临床。 Folin-Wu法：该法对葡萄糖无特异性，一切还原物质均可产生同样的反应。虽血液中葡萄糖为主要还原物质，但仍存在其他非糖还原物质，故该法其参考值较其他方法略高。 邻-甲苯胺法：该法涉及强酸、加热等反应条件，不便于大规模检测，且使用的试剂具有毒性，临床和科研上已很少采用。,思考题,1、为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考值存在差异？ 葡萄糖氧化酶法