讲稿-12食用菌栽培实验指导.doc

实验一 母种培养基配制（4学时）一、实验目的掌握固化培养基的配制，学会棉塞的制作方法。分析有天然原料与无天然原料培养基在配制过程中的不同。二、基本技能训练内容制备马铃薯滤液；融化琼脂；培养基的分装；棉塞的制作。三、主要仪器设备与材料天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、漏斗架、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、棉花、线绳、牛皮纸、皮筋、纱布、电炉、菜刀、菜板、小铝锅等；马铃薯、葡萄糖或蔗糖、麸皮、琼脂、水。四、实验方法1、配方（PDA）：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂1520g，自来水1000ml，pH自然。2、制作方法 1）制滤液：马铃薯去皮和芽眼，切成0.5mm粗的长条，称取200g放入锅中，加水1000ml，将其煮沸后再文火煮20min。用双层纱布过滤，滤液用水定容至1000ml。2）化琼脂：将滤液加热至即将沸腾时加入琼脂，不断搅拌（控制火力不要使培养基溢出或烧焦）。琼脂完全融化后加入剩余原料，并使其溶解（用热水不足水量）。3）分装：通过漏斗装置，趁热将培养基分装于试管中，装量约占试管高度的1/4（分装三角瓶以不超过其容积的一半为宜）。管口或瓶口不要沾染培养基。4）制棉塞：棉花以白色长绒的不脱脂棉花为宜。根据试管口大小取棉花，将其卷成棉塞，最好外包一层纱布。将棉塞塞入试管口。棉塞长度约67cm，塞入试管2/3。要求外表光滑，外包的纱布无皱折，松紧适宜等。5）包扎：管口堵入棉塞后7或9支试管扎一捆，棉塞部分用牛皮纸包扎。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。五、实验报告要求完成实验报告、详细记录培养基配制过程，并回答分装的技术要求有哪些？实验二 母种的转管与组织分离（2学时）一、实验目的清楚无菌操作要点，熟练操作母种转管、组织分离技术。能正确分析自己的接种结果。二、基本技能训练内容接种环境的处理；母种的转管；组织分离。三、主要仪器设备与材料超净工作台、酒精灯、接种环、火柴、尖头镊、酒精棉球、大镊子、75%酒精、标签纸等；空白斜面培养基、平菇母种、平菇子实体等。四、实验方法1、接种环境的处理超净工作台的消毒，用消毒液擦拭台面后放置接种所需物品，开启超净工作台上的紫外灯，照射20min后使用。2、母种的转管1）手及菌种管的消毒用肥皂洗手，再用75%酒精棉球擦手和菌种管表面，在酒精灯焰上略烧试管外的棉塞后，立即将菌种管放入超净工作台内。2）转管酒精棉球擦拭接种环。左手持菌种管和斜面管，两支试管口对齐于火焰上方。右手持接种环，并将其在灯焰上干热灭菌，用小指及无名指拔掉棉塞，使棉塞底部朝外。接种环冷却后伸入菌种管内取略豆粒大带有培养基的菌种块，迅速移人斜面培养基的中部，菌丝朝上。然后，将棉塞在火焰上烧一下，立即塞入试管口，旋紧棉塞。接种环不要触碰管口及管壁。接种后的试管应立即贴标签，注明菌种名称及接种日期，再进行适温培养。3、组织分离法此法是生产中最常用的方法，具有操作简便，菌丝萌发快，分离所得的菌种在培养基条件适宜的情况下，能保持原菌种的优良性状。1）种菇消毒在接种箱内，用镊子夹着燃烧的酒精棉球迅速擦拭菇体。2）取接组织将菇体撕开，用无菌尖头镊在柄盖交界处取绿豆粒大组织，放入斜面培养基上。迅速塞上棉塞。4、母种的培养将斜面朝下斜置叠放于瓷盘中，放于培养箱中适温培养。23天后每天都要检查菌丝生长情况。及时挑拣污染试管（出现粘膜或杂色）。5、注意事项1）分离的母种一定纯化后再做出菇试验。2）纯化菌丝长至斜面1/2时，挑尖丝转管，培养成再生母种。出菇试验将再生母种扩成原种、栽培种，使其出菇。看产量、质量、形态、长势、抗性如何，鉴定为优质菌种后，才可供生产使用。3）控制菌龄菌丝即将长满斜面（一般710天）终止培养。分别用于菌种保藏或繁衍原种。五、实验报告要求完成实验报告，详细记录转管接种和组织分离过程，分析接种成败的原因。实验三 原种、栽培种的培养基制备（4学时）一、实验目的能制作适宜培养料，独立完成接种前的准备工作。二、基本技能训练内容培养料的配制；菌种瓶及菌种袋的分装。三、主要仪器设备与材料高压灭菌锅、菌种瓶、棉塞、打孔棒、菌种袋；材料 木屑、麸皮、蔗糖、石灰粉、过磷酸钙、母种、原种等。四、实验方法1、配方与培养料配制1）颗粒培养基（麦粒、玉米粒等）配方：粮食粒98.5%，石膏粉1%，碳酸钙0.5%。配制：将洗净的粮食粒洗净，用1%石灰水泡胀，文火煮沸1520min（熟而不烂，勿破皮），捞出晾至无明水后拌入余料。原种多使用颗粒培养基。2）棉籽壳麦麸培养基配方：木屑87%，麦麸10%，白糖1%，石灰1%，过磷酸钙1%。配制：将木屑、麦麸、石灰混合为主料，余料溶解于少量水后浇入主料中。边加清水边翻拌至含水量达60%65%（紧握料的指缝中有水泌出而不下滴）。2、分装 原种培养基装入菌种瓶（或其他大口瓶），装量约占瓶高的1/2（非颗粒培养基可装至瓶肩，用锥形棒打一料孔），瓶口擦净，堵棉塞后外包牛皮纸或双层报纸。栽培种培养基一般装入聚丙烯菌种袋，上端套颈圈后如同瓶口包扎法。两端开口的菌种袋可将两端扎活结。要求装地外紧内松，培养料需紧贴瓶壁或袋壁。松散的培养料会导致菌丝断裂及影响对养分、水分的吸收。3、培养基的灭菌原种与栽培种培养基的容器大、装量多，应增加灭菌压力及灭菌时间。高压蒸汽灭菌，一般在152kpa压力（1.5kg/cm2）、温度约128.1条件下，保持灭菌时间12h。若用常压灭菌，需保持最高温度10h左右，闷1天或1晚。五、实验报告要求：完成实验报告，详细记录原种、栽培种培养基的制备过程，分析母种、原种、栽培种培养料配方不同的原因。实验四 原种与栽培种的接种与培养（2学时）一、实验目的能用无菌操作法准确进行原种、栽培种的接种。并通过培养观察，分析自己的接种结果。二、基本技能训练内容原种的接种；栽培种的接种。接种环境的处理；母种的转管；组织分离。三、主要仪器设备与材料超净工作台、接种耙、大镊子、酒精灯、火柴、酒精棉球、标签、消毒药品等；高压灭菌后的菌袋。四、实验方法两菌种的生产过程基本相同，主要区别在于接种时取接的菌种不一样。1、接种：灭菌后的原种及栽培种培养基及时运送至无菌环境中，待料温降至约30，进行抢温接种。1）接原种用接种耙取蚕豆大母种（连同培养基），放于瓶中培养料的孔口处（1支母种约接58瓶原种）。斜面尖端及原来的母种块勿接入。2）接栽培种用大镊子、接种铲或接种匙取枣大原种，放于瓶或袋中料面上（若两端扎活结的菌种袋，每端都要接入原种）。1瓶原种约接60瓶或25袋栽培种。去弃表面老化菌丝及老种块。堵棉塞或用线绳扎袋口。贴标签，注明菌种名称和接种日期。2、培养1）接种后，将种瓶（袋）置于适温下培养。菌种瓶初放时，应直立于床架上，当菌丝吃料后，再将其横放。菌种袋根据气温可单层或多层叠放。隔45天转动或调换位置，以利于受温一致，并避免培养料水分的沉积。2）常检查：及时去除出现杂色、粘液及菌种死亡的瓶或袋。3）逐渐降温：当菌丝长至料深的1/2时，降温23，以免料温升高，并有壮丝作用。4）注意菌龄：原种约3040天、栽培种约2030天菌丝长满，再继续培养710天是使用的最好菌龄。五、实验报告要求完成实验报告，记录实验结果，并对出现的异常现象进行原因分析？实验五 平菇代料栽培管理技术（8学时）一、实验目的能制作优质发酵料，快速正确的进行袋栽。正确处理发菌过程中的异常现象。二、基本技能训练内容制作发酵料；袋栽；排袋发菌 利用课余时间进行观察和管理。三、主要仪器设备与材料聚乙烯栽培袋、线绳、铁锨、水桶、大盆、脸盆、喷雾器、大镊子等；木屑、石灰粉、过磷酸钙、栽培种、高锰酸钾等。四、实验方法1、发酵料的制作1）培养料配方，木屑96%，石灰2%，过磷酸钙1%，石膏1%。2）拌料提前一天将木屑摊薄、撒石灰粉、洒水预湿。然后拌入石灰及石膏粉，过磷酸钙溶解少量水后拌入。最后加清水将培养料拌到含水量（挤出12滴水），调pH8.09.0。3）发酵建长形堆，纵横打料孔，顶部盖草被，四周围薄膜。料温升至65时保持一天翻堆，共翻23次堆。气温高时可在最后一次翻堆时喷0.1%多菌灵。发好的料呈咖啡色、有香味、pH7.07.5、含水量以指缝泌水而不下滴为宜。2、装袋用宽252850cm聚乙烯袋，事先扎3道微孔线（中间及距两端67cm处各一道线）一端扎活结，层播法装袋（微孔线处放菌种），上端再扎活结。两端用种量各占总用种量的2/5，中层1/5，多撒于四周。菌袋要装得外紧内松，光滑、饱满、充实。3、排袋发菌根据气温决定菌袋放置的场所及袋层高度。管理要点是：防杂菌、害虫，料温2025，光线暗，空气新（1周后逐渐加强通风），空气湿度60%70%。710天倒换一次菌袋位置。直至白色菌丝长满菌袋，吃透培养料。4、分化：加大温差（810）、提高空气湿度（80%85%）、加强通气及光照条件。5、育菇：现原基时解口或划口，保持光照及85%90%空气湿度，随菇体的长大加强通气条件，直至菌盖边缘变薄时成丛扭收或割收。喷水时，勿强水喷、硬风吹；勿喷珊瑚期以前的菇；勿喷后闷湿。通风时，勿通对流风与干热风，有风天气开背风窗。6、主要病虫害的诊断1）外观用肉眼和放大镜观察根霉、毛霉、青霉、木霉、曲霉、链孢霉等竞争性杂菌的危害症状。2）外观用肉眼和放大镜观察菇蚊、菇蝇、螨虫、线虫等害虫的危害症状。五、实验报告要求完成实验报告，记录各期的生长情况，并对异常现象进行原因分析。回答培养料在发酵中出现变黑、发粘、发臭现象是哪些原因导致的？主要虫害有哪些？实验六 菌种复壮（4学时）一、实验目的掌握淘汰衰退菌丝的复壮法，能用数据证明菌种复壮前后的区别。二、基本技能训练内容制备菌丝悬浮液；制平板；培养；转管。三、主要仪器设备与材料超净工作台、高压锅、接种环、精精灯、火柴、干燥器、注射器或吸管试管、棉塞、装100ml水的三角瓶（有玻璃珠）、装90ml水的试剂瓶等；母种、三角瓶装的培养基等。四、实验方法1、制备菌丝悬浮液将待复壮菌种的菌丝体刮下，置入100ml有玻璃珠的无菌水三角瓶中，充分摇荡，使菌丝分散。吸取10ml菌丝液注入盛有90ml无菌水的小瓶中，摇匀备用。2、制混合平板将融化的PDA培养基倒入无菌培养皿中，凝固后滴入23滴菌丝液，用无菌涂棒涂抹，使菌丝均匀分散于平板上。3、培养适温下培养，使菌丝萌发生长。挑取健壮尖端菌丝转管。4、检测通过菌丝形态特征的检查及出菇试验等项目测定，符合原菌种性状即可用于生产。五、实验报告要求完成实验报告，详细记录菌种复壮方法，回答防治菌种衰退的有效措施。实验七 菌种液体培养（4学时）一、实验目的掌握液体培养基的制作方法和液体菌种的培养条件。二、基本技能训练内容PDA加富培养基、液体培养基制备；菌种活化；液体培养；生物量测定三、主要仪器设备与材料超净工作台、高压锅、摇床、干燥器、接种环、精精灯、火柴、注射器或吸管试管、棉塞、150ml三角瓶、装90ml水的试剂瓶等；母种、三角瓶装的培养基等。四、实验方法 1、加富培养基在1000ml的PDA培养基中，加入MgSO45g、维生素B1（B2） 100m、KH2PO42.5g配制成PDA 加富培养基，高压灭菌后倒入培养皿中制成平板。2、液体培养基按照马铃薯浸汁1000ml、蔗糖20g、磷酸二氢钾1.5g、硫酸镁0.5g的配方配制液体培养基，分装于