人体疟原虫镜检技.ppt

人体疟原虫镜检技术,一、 概述 二、疟原虫生活史 三、人体疟原虫形态特征 四、血片制作与染色,一、概述,疟疾是由按蚊叮咬传播疟原虫引起寄生虫病。疟原虫是单细胞真核生物，属原生动物门、孢子纲、真球虫目、疟原虫科、疟原虫属。自然界疟原虫有149种，能感染人体的疟原虫只有四种：即间日疟（Pv）、恶性疟（Pf）、三日疟（Pm）、卵形疟（Po）四种。 在我国间日疟最常见，分布最广，发病最多；恶性疟次之，但对人体危害严重，常引起脑型疟等凶险发作。三日疟偶尔发现，卵形疟已无病例报告。,二、疟原虫的生活史,疟原虫的发育和繁殖，必须通过脊椎动物与昆虫媒介两个宿主，人体疟原虫的宿主是人（中间宿主）和按蚊（终宿主）。 1、红细胞外期 2、红细胞内期 3、子孢子增殖期,疟原虫生活史,红细胞外期,红细胞内期,蚊体内发育,人体内发育,配子生殖,孢子增殖,1 红细胞外期,按蚊刺吸人血时，子孢子随唾液进入人体，约30分钟随血流侵入肝细胞。 在肝细胞内，子孢子滋养体裂体增殖红外期裂殖体裂殖子（约12000个） 肝细胞破裂裂殖子散出血窦，一部分裂殖子被吞噬细胞吞噬，一部分则侵入红细胞内发育。 目前认为间日疟原虫和卵形疟原虫的子孢子有：速发型和迟发型。,2 红细胞内期,由肝细胞释放出的红细胞外期裂殖子侵入红细胞内进行裂体增殖，称为红细胞内期（红内期）。包括滋养体和裂殖体两个阶段。 基本过程：环状体 大滋养体 未成熟裂殖体 成熟裂殖体 裂殖子健康红细胞 ，重复上述过程几次，部分裂殖子在红细胞内不再进行裂体增殖，而发育为配子体 。 红内期增殖周期：间日疟和卵形疟为48h/代；三日疟72h/代；恶性疟36-48h/代 。,3 子孢子增殖期,雌按蚊刺吸疟疾患者血液，疟原虫随血入蚊胃，仅雌雄配子体存活并继续进行配子生殖，而其它各期疟原虫均被消化。 雄配子体形成雄配子或称小配子。 雌配子体逸出红细胞外，发育为不活动的圆形或椭圆形的雌配子或称大配子。,3.1雄配子形成,雄配子体几分钟内核分裂为4-8块，胞质亦向外伸出4-8条细丝，核分别进入细丝内，称出丝现象，即雄配子形成 细丝脱离母体，在蚊胃腔中游动，即雄配子或小配子,3.2动合子和卵囊的形成,雌雄配子受精，形成圆球形的合子。 合子数小时后变为长形的香蕉状的能活动的动合子。 动合子穿过蚊胃壁的上皮细胞，停留在胃壁的上皮细胞和外层弹性纤维膜之间，虫体变圆并分泌囊壁形成球形的卵囊，卵囊也称囊合子。,3.3 孢子增殖,卵囊逐渐长大并向蚊胃壁外突出 囊内的核和胞质反复分裂进行孢子增殖，生成成千上万的子孢子 子孢子呈梭形，1015m1m 主动从卵囊壁钻出或因卵囊破裂后散出，随血淋巴流入蚊体组织。 只有到蚊唾腺内的子孢子才具有传染性。,子孢子,3.4 雌性按蚊-终宿主-虫媒,蚊唾液腺内含有疟原虫子孢子 当雌蚊刺吸人血时，可随唾液进入人体 雌性按蚊饱餐人血,三、人体疟原虫形态特征,在红细胞内发现疟原虫是确诊疟疾和鉴别虫种的重要依据 疟原虫基本构造相同-细胞膜、质、核 瑞氏Wright或姬氏Giemsa染色：核染成紫红色，胞质呈兰色，疟原虫消化血红蛋白产物-疟色素呈棕黄色 疟原虫在红细胞内各期形态各不相同 三期六种形态 滋养体期：大、小滋养体 裂殖体期：成熟、未成熟裂殖体 配子体期：雌、雄配子体,1、薄血膜疟原虫形态特征,（1）间日疟：环状体、滋养体、裂殖体、配子体 （2）恶性疟：环状体、配子体,小滋养体（环状体）,薄血膜间日疟环状体,2.1 未成熟裂殖体 （immature schizont）,薄血膜间日疟环状体,恶性疟薄血膜环状体,薄血膜恶性疟环状体,薄血膜恶性疟环状体,大滋养体,薄血膜间日疟滋养体,薄血膜间日疟滋养体,未成熟裂殖体,薄血膜间日疟未成熟裂殖体,成熟裂殖体,薄血膜间日疟成熟裂殖体,薄血膜间日疟成熟裂殖体,薄血膜间日疟成熟裂殖体,雌配子体,雄配子体,薄血膜配子体,薄血膜配子体,恶性疟配子体,恶性疟配子体,恶性疟配子体,大配子体和大滋养体的形态区别,大配子体和大滋养体的形态区别,吉氏染色液,被寄生红细胞形态,2、厚血膜中疟原虫形态,厚血膜的血量多，红细胞重叠且干燥较慢，致使疟原虫皱缩，空泡缩小或消失，虫体变形，虫种鉴别比薄血膜困难。,厚血膜中小滋养体,胞浆可呈环状，也可收缩在核的一侧或两侧，也可围核分布等，形成各种形态。 间日疟原虫的环较大，胞浆较厚；核一个；虫体形态常呈分号“；”和感叹号“！”；品型 恶性疟原虫的环纤细，较小，着色较浅；核12个，虫体形态常呈分号“；”、飞鸟“. ”、V状“V”和断环“O”状等；,厚血膜中间日疟大滋养体,间日疟原虫呈阿米巴样，形状不规则。核位于胞质中或边缘；胞浆常断裂成几块或缩成圆形，疟色素分布不均。,厚血膜中间日疟裂殖体,虫体较大，核2个以上，一般1224个，除虫体略为缩小且着色较深外，均与薄血膜的相似。,厚血膜中间日疟配子体,除虫体略为缩小且着色较深外，均与薄血膜的相似。一般虫体较大，圆形，色素粗大，大配子核小，偏与一侧，胞浆深兰色。小配子核大，居中，胞浆浅兰色。,厚血膜中恶性疟配子体,恶性疟原虫大配子体为新月形，小配子体为腊肠形。核居中，疟色素围在核周，外为一圈胞浆。此外，还可见配子体的胞浆部分或全部消失，只留下核和疟色素，或核和胞浆均消失，只留下一些疟色素,厚血膜中红细胞,一般染色后，寄生的红细胞溶解，轮廓消失。但间日疟有时尚留下红细胞的“影子”和薛氏点。 恶性疟常见红细胞“影子”和茂氏点,疟色素,疟色素与原虫在一水平面上 有立体感； 黄褐色、深褐色、金黄色。 形状如沙粒状、短杆状等，可聚集成堆。 疟色素在疟原虫诊断，虫期判断中有着重要作用。,厚血膜间日疟原虫形态,厚血膜间日疟原虫形态,厚血膜间日疟原虫形态,本片中部有两个白细胞，在其左上方、左下方各有一个大滋养体；其右上方有两个大滋养体，胞浆皆已绉缩成数块，但皆有红细胞残骸可见 间日疟,虫体位于本片中部，胞浆皱缩为多块，色素聚集于虫体右上方；本虫上方为一个大滋养体,间日疟,厚血膜恶性疟环状体,厚血膜恶性疟配子体,厚血膜疟原虫鉴别要点,在厚血膜中必须根据疟原虫的核、胞浆、疟色素三个条件鉴别是否是疟原虫及虫种。 具备上述三条中的二个条件也能给与判定。 有时因染色较浅，看不到核和胞浆，但看到典型的疟色素也可判定。,疟原虫与其它物体的鉴别,疑似疟色素：血膜上的染料残渣及灰尘，有时被误认为疟色素。可依据颗粒大小、色泽及分布范围加以区别。转动微调时，可见残渣及灰尘浮于红细胞上，于疟原虫不在一平面。 疑似疟原虫核：球菌、白细胞破裂后散出的颗粒、血小板，皆为红色小点，与疟原虫核相似，最易混淆。但球菌形体较大，边缘光滑，常见多个聚集一处，分布较广。中性和嗜酸性粒细胞颗粒，着色较淡，边缘整齐，附近常有白细胞碎屑。血小板：红点结构松散，花瓣状，多35成群。,疟原虫与其它物体的鉴别,疑似疟原虫胞浆：网织红细胞残留物和白细胞残留物通常为蓝色，与疟原虫胞浆相似，与某些红点结合在一起，易误诊为疟原虫 。如似大滋养体，可根据有无疟色素特点加以区别。如似小滋养体，可依据虫体大小、折光是否均匀、核与胞浆是否在一个平面上进行区别。,四、血片的制作与染色,1、材料 玻片：推玻片（具有光滑的边缘）、载玻片 一次性采血针 75%的医用消毒酒精（湿棉球） 干棉球（止血用） 标签、记号笔：载玻片上标识与编号 玻片盒 玻片的处理： （1）新玻片常有游离的碱质，使用前应用重铬酸钾洗液或稀盐酸（将浓盐酸稀释10倍）浸泡24小时，然后用自来水反复冲洗，晾干或烘干备用。 （2）旧的玻片，应放入5%的肥皂或洗衣粉水中煮沸20分钟，再用热水将肥皂或血膜等污物洗去，用自来水反复冲洗，必要时再置95%乙醇中浸泡1小时，然后擦干或烘干备用。 2、采血 厚血膜血量约为5立方毫米左右(即一小滴)，涂成边缘光滑之园形，直径约0.81.0厘米左右。 薄血膜血量只需0.5-1.0立方毫米左右,过多则血膜过厚过大。薄膜宜涂成舌状长约2.5厘米，宽约2厘米,3、制片 疟原虫镜检要求在一张玻片上必须同时制作厚、薄血膜。 （1）涂制厚血膜：取玻片2张，1张作载片，1张作推片（具有光滑边缘）。用右手拇指和食指夹持推片侧缘中部，用推片的左下角刮取血液45l，再用该端中部刮取血液11.5l。将左下角的血滴涂于载片的右端1/3处，由里向外划圈涂成直径为0.81cm的圆形厚血膜（厚度以1个油镜视野内可见到510个白细胞为宜）。 厚血膜外观：圆形，厚薄均匀。过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。,涂制厚血膜,（2）推制薄血膜：用干棉球抹净玻片角上的血渍，然后将推片下缘（最好为磨口边缘）平抵载玻片的中线，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持3045度夹角，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜（角度过大、速度过快，血膜太薄，反之血膜则太厚），用力要均匀，中途勿停顿，理想的薄血膜，应是一层均匀分布的血细胞。 薄血膜外观：呈舌状，头体尾明显，厚薄均匀。位于玻片1/21/3处。,推制薄血膜,厚、薄血膜的位置 每张载玻片上可做1个薄血膜和1个厚血膜，如图,4、血片的固定和脱膜 薄血膜用甲醇固定 现场检查的血片厚血膜可以不脱血膜，直接染色。 保存时间较长的标本片厚血膜要脱血膜后保存。,5、制作血片的注意事项 自然干燥，不能太阳晒和火烤。 血片放置待干时不可倾斜，否则厚血膜中血细胞沉在一边，可使厚薄不匀。 制成的血膜须完全干燥后(自然情况下约4-12小时才能全干燥；必要时，可置于3 7的暖箱中，促其速干)始可进行固定及染色否则薄血膜中的红细胞边缘皱缩，厚血膜容易在染色时脱落，而常现网状的背景；反之；血片搁置过久则有霉菌及枯草杆菌生长，血红蛋白凝固，也不能使用，因此不利于镜检。 若把未经固定的血片盛于氯化钙的干燥器