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RT-PCR技术原理简介,张晓涛,RT-PCR简介,RT- PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）即逆转录PCR RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。 RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。,RT-PCR原理,掌握PCR技术。 学会操作RT-PCR简介PCR仪。 熟悉琼脂糖凝胶电泳技术。,首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再 以cDNA为模板，扩增合成目的片段。,RT-PCR两种方法,RT-PCR反应体系,RT引物的选择,RT逆转录酶的选择,RT-PCR操作流程,1.从细胞或特定组织中提取总RNA； 2.逆转录实验； 3.扩增内参和目的基因并比较基因表达差异。,实验流程（两步法）,实验流程（一步法）,RT实验要素决定特异性和灵敏度,问题（一）RT-PCR没有产物,原 因,对 策,问题（二）非特异性扩增,原 因,Thank You!,
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