输血科常用实验及工作体会.ppt

输血科常用实验及工作体会,山东省立医院输血科 王 玉 芝,前 言,血型鉴定、交叉配血、抗体筛选试验是输血科目前最常用的试验，也是每个输血工作者应该熟练掌握的试验，根据工作经验我们认为在试验过程中一些细节容易被忽略，值得注意，现将工作中的一些体会与大家一起探讨交流，请大家提出宝贵意见。,ABO血型鉴定,1、鉴定原理：根据红细胞上有无A抗原或(和)B抗原及血清中有无相应抗体将血型分为A型、B型、AB型和O型四种 正定型（细胞定型） 反定型（血清定型） 2、方法：试管法、微柱凝胶法、玻片法 均为凝集试验,ABO血型鉴定（试管法）,1、试验材料： 正定试剂： 抗-A、抗-B（是否质控？质控要求？记录？） 抗-AB 确认弱A、B抗原，与弱A、B抗原亲 和力强,会产生较强反应。 抗-H 用于检查亚型及孟买型。 抗-A1 用于A亚型检测。,ABO血型鉴定（试管法）,反定试剂 A1细胞（为什么？）、B细胞，自制细胞的质控 O细胞 检查是否存在ABO系统以外抗体干扰ABO反定型。 自身对照 用于确认正反定型结果的有 效性,排除自身抗体对定型的干扰(如冷凝集等)。 A2细胞 用于A亚型的鉴定（有些A亚型产生抗-A1抗体而不产生抗A2）。,ABO血型鉴定（试管法）,2、试验方法： 正定：1滴25%被检者红细胞+12滴标准血清混匀，3400 转15秒（转速的选择） 反定：2滴受检者血清+1滴标准红细胞混匀离心,ABO血型鉴定（试管法）,3、结果判定： 摇动力度，细胞扣边缘情况，弱凝集的判断（亚型尤其重要） 正定预期结果3+4+，如果出现弱凝集应该考虑是抗原减弱还是亚型，不能轻易错过。 血型判定并记录 正反不一致的思考与解决？关键在于认识发现问题,ABO血型鉴定（试管法）,4、正反不一致的原因分析 实验人员技术操作错误 红细胞标本的相关问题 血清标本的相关问题,ABO血型鉴定（试管法）,技术操作错误 试剂浓度与配比，一般问题不大，但是比例不合适可能漏检亚型 忘记加试剂，试剂工作中有可能出现 结果判定，尤其对溶血结果的认识，如果是血清标本可能遇到，56度破坏补体验证 记录错误，实际工作中对于错误报告占很大比例 标本错误,ABO血型鉴定（试管法）,红细胞问题： ABO亚型！使正定凝集较弱，也是发现亚型的关键所在 白血病或其它恶性疾病使患者红细胞的A、B抗原减弱！ 患者近期输入了ABO不同型红细胞，或ABO不同型的骨髓移植，可能出现混合视野。 红细胞获得性或遗传性异常，如获得性B抗原、T/Tn多凝集红细胞。 某些疾病（如腹腔癌）导致血浆中存在大量的型物质，中和抗-A或抗-B抗体，引起正定型为假阴性或弱阳性。 患者血清中的高效价自身冷凝集素使红细胞发生凝集！,ABO血型鉴定（试管法）,血清标本相关问题 新生儿抗体阴性或很弱、老年人抗体减弱！ 白血病、淋巴瘤及使用免疫抑制剂的患者、先天丙种球蛋白缺乏的患者、免疫缺陷的患者抗体减弱！ ABO不同型骨髓移植患者。 使用血浆或凝固不完全的血清会形成很小的纤维蛋白凝集的红细胞凝块！ 患者血清中有不规则抗体或自身冷凝集素！ 某些疾病（多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、何杰金淋巴瘤等）导致球蛋白水平增高，引起缗钱状凝集；纤维蛋白原水平增高，会引起缗钱状凝集；血浆增容剂（葡聚糖、PVP）也会引起缗钱状凝集导致假阳性结果。,ABO血型鉴定（试管法）,5、正反不符处理程序： 患者的年龄 患者的病史 患者的近期输血史 患者的近期用药史 患者是否进行了骨髓移植 患者以前的血型 家系调查 处理细胞、血清、改变试验条件增加试验（洗涤细胞、改变比例、反应温度、吸收放散、血型物质测定）,ABO血型鉴定（试管法）,常见问题解决 ABO亚型 正定：抗-A、抗-B、抗-AB、抗-A1、抗-H 反定：A1c、A2c、Bc、Oc、自身对照 吸收放散 唾液型物质检测 有条件者可作家系调查,ABO血型鉴定（试管法）,A、B抗原减弱 延长孵育时间、4孵育 酶处理红细胞 吸收放散 唾液型物质检测 既往血型调查,ABO血型鉴定（试管法）,抗体减弱 延长孵育时间、4孵育 加大血清用量（很实用) 既往血型调查 酶处理试剂红细胞,ABO血型鉴定（试管法）,冷自身抗体 将血清和红细胞分别在37孵育后再混合 用37温盐水洗涤红细胞、45热放散3分钟 巯基试剂(DTT)处理红细胞 自身吸收去除血清中的自身冷抗体,ABO血型鉴定（试管法）,室温反应的同种抗体 用谱细胞做抗体鉴定 选择没有相应抗原的A、B细胞做反定型,ABO血型鉴定（微柱法）,1、原理：是生物化学凝胶过滤技术和免疫学抗原抗体反应相结合的产物，通过调节凝胶的浓度来控制凝胶间隙的大小。使其间隙只能允许游离的R BC通过，从而使游离RBC与聚集RBC分离。如果通过离心RBC沉积在凝胶管底部，则表明RBC未发生凝聚凝集，是阴性反应， 若RBC聚集在凝胶带上部，则表明RBC发生凝集，呈阳性反应。其本质仍是凝集试验（凝胶可能不同，长春为葡聚糖。） 基本概念：特异性胶、中性胶、抗人球蛋白试剂胶,ABO血型鉴定（微柱法）,2、试验材料：比较单一，都是商品化，定量加样，注意细胞浓度0.8% 3、操作：正定 反定（加样顺序） 4、结果判定：按说明，凝集强度判断，注意混合视野的判定，弱凝集的判定 5、注意事项：细胞浓度，试剂一定室温平衡，最好室温反应15分钟再离心以增强弱反强度（卫生部2008第1批质控出现的问题，有2个标本反定正确率60%）,ABO血型鉴定（微柱法）,6、假阳性反应可见于： （1）未完全除去纤维蛋白原的不完全血清标本，残存纤维蛋白原在凝胶中成为纤维蛋白，阻碍红细胞沉淀而浮于胶中或胶表面。（我们收到卫生部2、3批质控标本有此现象） （）被检标本染菌也使红细胞浮于胶中或胶表面。 （3）被检红细胞破碎，常管底及近底部一侧，而不是在管底尖部。此为离心时微柱管离心力方向和该微管轴向方向不一致，本应为阴性结果的沉淀位置偏离而呈似弱阳性是因为红细胞陈旧，此时即使应该是阴性结果，但破碎红细胞膜沉于胶中或胶面呈弱阳性。 （4）实验室温度低时，因凝胶颗粒活动性减少，单个细胞穿过时困难，容易出现假阳性结果。,ABO血型鉴定（微柱法）,（5）镰刀形红细胞贫血病人在做血型配血时易出现假阳性： 正常的红细胞有一定的变形性，可以通过小于其直径的凝胶间隙，而镰形红细胞贫血的病人红细胞变形能力降低，刚性增大，不能透 过凝胶间隙，故出现假阳性。 （6）严重感染的病人易出现假阳性： 病人血清或血浆中的白细胞过多，堵塞了凝胶间隙，从而影响了红细胞的沉降，造成假阳性。（曾遇到一例）,ABO血型鉴定（微柱法）,7、假阴性反应： （1）抗体过少、弱。 （2）抗原、抗体比例不合适。 注意：不是一个实验方法可以检测出所有抗原抗体反应。,ABO血型鉴定,总结 注意弱反应（尤其是正定，一般应该很强） 发现正反不一致，不能轻易错过，慎用假阳性解释，可重复试验 有问题的做好记录，解决方案，不断总结 不同试验方法结合，试管与微柱各有优缺点 发现问题是关键，由于每个医院情况不同，大部分医院试剂不全，不能准确判断其亚型，但是应该具备发现亚型的能力.,RH血型鉴定,1、原理：根据是否具有D抗原区分Rh阴阳性 2、试剂：IgM;IgG+IgM 3、操作及结果解释 试剂选择及阴性确认问题！ 试剂选择：输血科可以选择IgM试剂 Rh阴性确认：输血科与血站对阴性标本的处理不同，输血科对阴性标本不必再进一步确认，以防弱D或部分D患者输入Rh阳性血；血站必须对RH阴性标本确认，以防弱D过部分D血液输给Rh阴性患者。,交叉配血,常用方法 盐水：发现IgM抗体 凝聚胺、微柱凝胶、酶法：发现IgG型不规 则抗体,交叉配血（凝聚胺）,原理：（略） 操作：（是否质控？记录？） 试剂用量:假凝集消除液不能轻易多加，可能会造成假阴性 反应时间：加凝聚胺试剂后不可立即离心，应使其充分反应 观察时间：一分钟之内观察结果 影响因素：抗凝剂的影响（反定凝集较差可能受到抗凝剂影响，可以多加凝聚胺试剂凝集较好）、细胞浓度不可太浓,交叉配血（微柱凝胶）,原理：属于经典的抗人球蛋白试验 操作：50微升0.8%红细胞+25微升血清或血浆（根据厂家说明） 结果判断：不能错过弱凝集，如果有怀疑可以重复试验， 注意：标本最好抗凝、离心以消除纤维蛋白带来的干扰,交叉配血（微柱凝胶）,凝聚胺与微柱凝胶法两种方法的差异：微柱法相对敏感，但不是万能的，有些抗体可能凝聚胺更敏感（如Rh抗体），实际工作很难发现此现象，可能与工作人员的熟练程度有关，不管任何一种方法配血不合均不能发血。,抗体筛选（微柱法）,操作及结果判断（略） 抗体筛选阳性结果的处理： 最好作抗体鉴定，有些稀有抗体配血成功率极低可以寻求帮助，一般医院可能无此条件 用微柱法和凝聚胺两种方法同时配血或者用微柱凝胶法配血，绝对不可以单纯用凝聚胺配血（方法的差异可能漏检）,问题讨论： 1、微柱法抗体筛选弱阳性，遇配血不合标本是否也应为弱阳性？（剂量效应以及红细胞的新鲜度的影响） 2、微柱法抗体筛选阳性，选择3袋微柱法配血均相合是否说明抗体筛选为假阳性？ 3、微柱法抗体筛选阳性，是否可用凝聚胺法直接配血选择相合血液？,发现B(A)血型1例,试管法正定AB，A抗原弱于B抗原，但是结果明显 微柱法正反定型，正反定型相符为B型，抗A抗体很强与正常抗A无差异，怀疑初检血型错误 试管法正反定型复检：正定AB，反定B型，怀疑特殊血型或标本问题 保险起见重抽标本，结果相同 怀疑A亚型B，产生抗A（以上试验我科完成） 省血液中心送检，报告A2B,发现B(A)血型1例,我科随后进行以下试验： 父母血型鉴定：父亲：O 母亲：与女儿血型表现一致，初步判为 cisAB 根据资料一般cisAB为A强B弱，产生抗B，而此例A弱B强产生抗A，与B(A)血型表现一致，高度怀疑B(A) 无法确认，送上海血液中心进行血清血及分子生物学确认,上海血液中心鉴定结果,ABO正定 抗-A 抗B 抗A1 人源抗A 人源抗B 2+ 4+W - 1+ 4+W 说明确实存在A、B抗原 ABO反定：A1细胞 B细胞 O细胞 A2细胞（6滴） 3+S - - 1+W 说明确实存在抗-A，且与A1、A2细胞同时凝集 抗-H： O细胞 B细胞 患者细胞 2+S 1+W 2+ 说明 抗H增强,上海血液中心鉴定结果,结论：患者存在AB抗原，且A弱B强；血清中存在抗A，同时和A1、A2细胞凝集；抗-H增强，符合B(A)特点 鉴定为：B（A）血型 为了进一步证实进行基因测序 结论为640碱基变异，A被G取代为B（A）*04型,B(A)血型血清学特点,B(A)血型血清学特点：同时存在AB抗原，A弱B强一般鉴定为A