脊椎动物浸制标本制作.ppt

第三章 脊椎动物浸制标本制作 第一节 常用器具材料的准备 一、常用器材 解剖刀、剪刀、镊子、骨钳、探针、废砂轮片、注射器、针头、木工刀、大头针、量筒、量杯、搪瓷盘、洗瓶刷、标本瓶和标本缸、橡皮板、解剖板、玻璃板、棉花、试管、玻璃棒、毛笔、软塑料尺、号牌、塑料薄膜和纱布、蜡线等。 二、化学药品 40%甲醛、95%酒精、苯酚、甘油、乙二醇、醋酸、硝酸钾、醋酸钠、百里酚、盐酸、乙醚、氯仿、均四氯乙烷、过氧化氢、硫酸镁、汽油、氢氧化钠溶液、618或634环氧树脂、聚氨酯黏合剂、苯二甲酯二丁酯、石蜡、蜂蜡、丹麦树胶、活性炭、合成樟脑、乳白胶水等。,第二节 脊椎动物整体浸制标本制作 整体浸制标本：将动物作一定的处理后，浸在防腐液里，作永久保存，称浸制标本。 整体浸制标本的制作过程是：选择材料，处死，整理姿态，防腐固定，装瓶保存，编号，记录和粘贴标签等。方法简便，容易制作。 （1）选择材料 : 应选择大小适中的动物个体。 鱼类尽可能选新鲜的，保持鳍、鳞等的完整。 两栖、爬行动物活体应装入密闭的容器中，同时放入浸有乙醚的棉球使其麻醉致死。,（2）整理姿态 : 待动物麻醉至死后取出，用清水冲洗体表的粘液，然后进行编号，登记和记录，并将标签系好。 随即在腹腔内注入适量福尔马林以固定内脏器官. 鱼类将背鳍、胸鳍和尾鳍适当展开，用回形针将塑料薄片或厚纸片与鱼鳍夹在一起，使其展开呈生活状态。 两栖类整理成生活时的匍匐姿态。并将指、趾展开。整理两栖类时，先用镊子将一团脱脂棉塞入口腔，使其张开，以便观察牙齿。 蛇类应将其身体盘成螺旋状，使其头部在上，或者将其折成“S”形，龟和蜥蜴的四肢，应用大头针固定在腊盘上。 （3）固定保存: 用福尔马林浸泡固定体内组织。待固定好后，再将标本用白线固定在大小适宜的玻璃片上，放入适当的标本瓶中，加入福尔马林浸泡保存。,防腐液： 常用酒精或者甲醛水溶液（福尔马林）作防腐液。 酒精一般用左右（买来的酒精为）配制时要考虑这个含量； 甲醛一般用左右（买来的甲醛为3）配制时不考虑这个含量，一瓶原液加九瓶水就可以了。 原则上生物体含水量较高的防腐液浓度要高一点，生物体含水量低的防腐液浓度要低一点。如：鱼一般用15%甲醛水溶液，昆虫一般用6-8%甲醛水溶液。 酒精一般在75-85%浓度间选择。酒精成本高，适宜青少年用，甲醛成本虽低，但是刺激性气味太强，不适宜青少年用；所有的动植物都可以用酒精浸制； 螃蟹、虾、蜗牛等有几丁质外壳者不宜用甲醛。,浸制标本长期保存时应注意的问题： 1某些新制作的浸制标本，经过一段时间，溶液会变黄或混浊，是动物体内的浸出物所造成。标本在浸泡13个月后，根据情况更换固定液23次，直到浸液不再发黄为止。 2瓶口应密封，以防药液挥发。当标本不能全部淹没在保存液中时，应及时添加药液，否则露出部分会变干、变形，甚至发霉变质 3要注意浸制液的浓度。当打开标本瓶，可嗅到较强烈的气味时，表明浓度恰当，若无任何气味时，则表示浸制液的浓度不够，须立即更换。,一鱼类的浸制标本制作 1.选择材料 2.鱼体的观察、测量和记录 3.整理姿态： 4.防腐固定： 5.装瓶保存： 6.贴标签：,7.注意事项： （1）在装瓶时应根据各种鱼类的不同体形选择标本瓶、缸的规格。 （2）在教学和实验中，经常需要将标本取出，因此一般不宜将标本瓶封口。,（3）在野外采集时，无法按上述方法进行操作。必须先将标本进行登记和编号，并用布标签系在尾柄基部，并做好记录。然后进行整形固定，待运回后，再按上述方法进行制作。,8.鱼类浸制标本褪色的原因及克服方法 （1）彩色鱼类浸制标本变色的原因 红色素细胞的化学性质、黄色素细胞的化学性质、光彩细胞的化学性质、黑色素细胞的化学性质、影响保色的其他因素。 （2）彩色鱼类浸制标本的保色方法 获得材料后，必须及时冷藏或固定消毒，以求呈色结构尽量少受损害。 用肉眼或显微镜观察材料呈色情况，判断它属于纯红、纯黄或是杂色，然后分别对待。 固定。总的原则是固定液浓度不可太大，时间不要太长。3%苯酚、75%酒精和6%-8%甲醛等固定液，各有优缺点。 保存。以1%-1.5%苯酚最好，而甲醛和酒精次之。,二、两栖类浸制标本制作 1.测量 （1）有尾两栖类成体测量方法 （2）无尾两栖类成体测量方法 （3）蝌蚪测量方法,2.成体的固定和保存 （1）整理姿态： （2）固定保存： 3.蝌蚪及卵的处理,三、爬行动物浸制标本制作 1.爬行动物浸制标本制作方法 （1）酒精浸制法 （2）福尔马林浸制法 因为不同的动物个体大小不同，对福尔马林的浓度的浓度要求也不同。一般是浸泡液用10%20%福尔马林溶液，保存液5%10%福尔马林溶液 龟的浸制标本制作： 将龟体清洗干净。用注射器分别向体腔，四肢，头颈注射10%福尔马林溶液，将龟体固定在泡沫板上，整理姿态后晾24小时。 然后浸泡在20%福尔马林溶液15天，然后保存于70%酒精溶液或5%10%福尔马林溶液里。 若龟体上浮，可用玻璃块压在上面。盖上瓶盖后需在瓶口处涂抹凡士林，起密封效果。 最后，制作一标签帖在瓶的侧面，内容包括龟的中文名，产地，体重，制作时间等。,2.爬行动物浸制标本制作的一般步骤 （1）外部形态观察 （2）麻醉致死 （3）标本测量 （4）防腐固定 （5）装瓶保存,四、小型哺乳动物浸制标本制作 对某些小型兽，一次性捕获较多（如蝙蝠、鼠类等），因野外工作条件无法一次制作完毕或因分类的目的标本干后收缩无法看清、因内部器官的研究需要等目的，为防止腐烂掉毛可使用此法。方法是从腹部开口露出内脏浸泡在75%酒精溶液中，或浸制在510%福尔马林溶液内。浸泡前，需将每个标本系上已编号的竹签，便于查阅数据。,第三节 脊椎动物整体剖浸标本制作 解剖标本的制作目的是观察内脏，应按解剖的一般方法除去体壁，以露出内脏。 如要展示某一器官系统时，还须小心地除去不需要的部分，展示部分的各器官仍保持其自然位置，然后浸泡于10%福尔马林液中。 如为标明各器官名称，可用打印好的名词签（或用铅笔书写），用水胶贴在各器官上，待粘牢晾干后，浸入保存液中即可。,1.解剖： 2.呼吸系统：鳃、piao。 3.循环系统：心室、心房、静脉窦。 4.泌尿生殖系统：肾脏、输尿管、膀胱、生殖器官。 5.神经系统 6.浸制制作：用线穿背缚于事先准备好的玻璃片上，轻轻冲洗，然后按原色浸制法进行固定、保色、浸存等操作。 7.装瓶：装瓶前可以从过渡液里取出标本。 8.封瓶：一般不采用永久封瓶法。 9.包口,一、鱼纲(鲫鱼或鲤鱼剖浸标本制作),二、两栖纲(青蛙或蟾蜍剖浸标本的制作),1.取材 2.解剖： 3.消化系统：肝脏、食管、胃、肠、胰脏、脾。 4.呼吸系统：喉气管室、肺。 5.泌尿生殖系统：肾脏、输尿管、膀胱、生殖器官 6.循环系统：心室、心房、静脉窦、动脉圆锥。 7.浸制制作：用线穿背缚于事先准备好的玻璃片上，轻轻冲洗，然后固定、浸存。 8.装瓶：装瓶前可以从过渡液里取出标本 9.封瓶：一般不采用永久封瓶法,1.捉拿方式 2.解剖： 3.消化系统、 4.呼吸系统 5.泌尿生殖系统、 6.循环系统 7.浸制制作：用线穿背缚于事先准备好的玻璃片上，轻轻冲洗，然后固定、浸存。 8.装瓶：装瓶前可以从过渡液里取出标本 9.封瓶：一般不采用永久封瓶法,三、爬行纲(龟或鳖剖浸标本的制作),四、鸟纲(家鸽剖浸标本的制作),五、哺乳纲(家兔剖浸标本的制作),第四节 脊椎动物器官和系统剖浸标本的制作 一、保持内脏原色的方法 1.凯塞尔林氏方法：这种方法可以保持脊椎动物哺乳类内脏的自然色泽，效果较好。 （1）固定。取出刚杀死动物的内脏，浸在固定液里，内脏不要跟水接触，因为水会引起红细胞溶解，使标本褪色。固定液配制：200ML福尔马林、15克硝酸钾和30克醋酸钠，加1000ML水。 （2）还原。将固定后的标本放在水里洗涤后，用棉絮和滤纸吸干水分，再浸在85%-95%酒精里6-24小时，直到组织恢复自然色泽为止。 （3）保存。颜色恢复以后，将标本放在流水中冲洗干净，再放在保存液里保存，封瓶口。保存液的配方是：甘油200ML、醋酸钠100克、百里酚3克，水1000ML。 2.萧尔氏方法,二、脊椎动物脑与心脏比较标本制作 在动物由低级向高级、由简单向复杂的演化中，为了说明其间的关系，需要用比较解剖学的手段来做标本，以示范教学。,（一）脊椎动物五纲脑的比较标本制作方法,（二）脊椎动物五纲心脏的比较标本制作方法,（三）血液循环注射标本的制作 向动物的血管内注射带有颜料的填充剂，使血管保持饱满的形状和一定的颜色，以显示血管的分布，是解剖脊椎动物循环系统时，为便于观察所经常采用的方法。 在注射之前，应了解该动物心脏的结构及血管分布特征，保证注射工作顺利进行。 注射时，一般将动脉注射红色，静脉注射蓝色，门脉注射黄色。 1.用具 100mL烧杯、水浴锅、玻棒、注射器、79号针头、棉线、解剖盘、解剖器、麻醉剂（乙醚或三氯甲烷）。,2.注射色剂的配制 常用注射色剂的配制方法如下： （1）明胶（动物胶）25g,银珠或柏林蓝或铬黄 10g,水 100mL.先将明胶捣碎成小片，按比例加水浸泡34h，待充分软化后，在水溶锅中隔水加热，使明胶全部溶化。加入色料，用玻璃棒搅拌均匀。然后用双层纱布过滤后即可使用。 （2）明胶 1份,重铬酸钾 5份,醋酸铅 5份,水 4份。将明胶与重铬酸钾同水融合，在水浴锅中隔水加热至接近沸点，然后加入醋酸铅并搅拌均匀。色剂的浓度，可取一滴胶液在玻璃板上能缓慢流动即可。 （3）淀粉（粉粒应较细） 4份,2%水合三氯乙醛 4份,95酒精 1份,色料 1份。将前3种先混合调配后，再加入色料，继续调和至均匀即可。 （4）丙酮 100mL,赛璐珞 30g,银珠 2g。将赛璐珞加入丙酮中溶解，再加银珠搅拌均匀。丙酮易挥发，在使用中注意添加丙酮。,3.赡蜍（或青蛙）和家兔的血管注射方法 （1）赡蜍（或青蛙）血管注射方法： 把青蛙放在玻璃缸中，将脱脂棉用乙醚浸湿后丢入缸内，待蛙深度麻醉后取出，放入解剖盘内。 先将腹面皮肤由后向前剪开，再沿着腹部偏蛙体的左侧（因腹静脉紧贴在腹壁内侧的正中线上）向前剪开腹壁，一直剪到肩带，并剪断肩带的锁骨及乌喙骨。,动脉注射： 剪开围心膜，提起心脏，用一棉线结扎动脉圆锥的基部，隔断动脉圆椎和心室的通路。 另备一棉线，待针头抽出后结扎用。针头自动脉圆锥处刺入，注射色剂（大约 35mL），待肠系膜或皮肤的小血管充满了红色剂，即停止注射，抽出针头，结好线即可 静脉注射： 先用棉线把静脉窦结扎起来，然后翻转腹部肌肉，可见腹静脉，先穿好2条棉线，将左手食指垫在腹静脉下，再将针头自两棉线之间刺入，注射完前部，再注射后部，待胃壁或皮肤的静脉充满蓝色剂即可抽出针头，结紧线圈。 前肢血管色剂如未到达，可自前大静脉或其分支补充注射。静脉系的注射量一般为78mL左右。,（2）家兔血管注射方法： 将活家兔用乙醚麻醉致死，放置在解剖盘内。必要时，可用纱布或棉花蘸热水覆盖在家兔表面，在注射时，使动物还保留一定的体温。 动脉注射： 股动脉部位注射：自左侧后肢股部内侧剪开皮肤，剥离周围结缔组织，现出2条血管，即股动脉和股静脉。用镊子细心地将股动脉分离，取一段线在血管下面穿过，插入针头并把针头连同血管一起扎紧，用注射器吸取红色剂后，套上针头进行注射。注射时速度不宜太快，避免压力过大，直到耳部血管呈现红色时，停止注射，拔出针，扎紧血管。如果血管已被针头穿破，可由另一侧股动脉补充注射，或自兔的左侧第79肋骨处剪一开口，使心脏露出，自左心室补注色剂。 总颈动脉部位注射：总颈动脉位于颈部气管和食管的两侧，呈淡红色。用镊子分离出一段总颈动脉，插入针头以线扎紧，注射红色剂，直到腹部皮肤呈现红色为止，停止注射，拔出针头，扎住血管。,静脉注射： 股静脉部位注射：与股动脉注射方法相同，用线从血管下面穿过，插入针头，先缓慢地抽出部分静脉血，再注入蓝色剂，直到耳部静脉呈现蓝色即可。 颈静脉部位注射：与总颈动脉注射方法相同，剥离出外颈静脉，插入针头，先抽出部分静脉血，以减少静脉血管内的压力，然后再用注射器注入蓝色剂，直到后肢静脉血管呈现蓝色，停止注射并拔出针头，扎住血管。 肝门静脉注射：剪开腹壁，抽出一段小肠，拉开肠系膜，沿小肠静脉找到肝门静脉，在肝门静脉基部穿入棉线并扎紧，防止色剂经肝静脉进入后大静脉。在肠系膜处找寻较大的静脉注入黄色剂后用线扎紧血管。,4.血管注射应注意的事项 （1）注射前应检查针筒是否干净，针头是否畅通，注射后应立即洗净注射器。 （2）解剖时注意不要损坏大的血管，以免注射剂从破损处流出。 （3）注射动物胶做填料的色剂时： 色剂必须始终隔水加温，保持其融解状态。 动作应快而准确。 被注射的动物体，尽可能在其体温尚未散失时进行，避免色剂在注射过程中遇冷而凝结。在室温较低时，可将动物体浸泡在温水中15min，或适当降低明胶的含量。,（4）双色注射时，一般是先注动脉，再注静脉。注射静脉前必须抽出部分静脉中的血液，以免注射时涨破血管。 （5）针头刺入血管，是注射的关键。应事先把该血管周围的组织分离，使血管完全暴露。注射针头可稍磨成圆刃以免将对侧血管壁穿透。 （6）针头尽量选用大一点的，以确保注射时针头畅通，如针头被阻塞，应另换针头，若多次阻塞，应过滤色剂。 （7）注射剂的用量应适当，检查方法是观察距注射部位较远端的小血管，或是看皮肤上的血管有无着色。 （8）用棉线结扎，不应用力过大，以免扎破血管。,三、脊椎动物神经系统标本制作 1.兔神经系统标本制作 （1）取材： （2）骨骼软化：从福尔马林里取出，转浸在脱钙液里18-24小时。脱钙液配方是：15ML38%盐酸、2ML40%福尔马林、83ML水。,（3）分离神经：将经过脱钙液处理的材料放在解剖板上，分离肱神经丛、腰荐神经丛、脊髓、颈部脊髓和脑。 （4）漂白：将分离的神经系统浸入10%-15%过氧化氢溶液里漂白24-36小时。 （5）整修： 2.其他脊椎动物神经标本制作,（1）鱼神经系统标本制作,（2）蟾蜍神经系统标本制作,（3）龟神经系统标本制作,（4）鸽神经系统标本制作,四、脊椎动物消化系统标本制作 1.兔消化系统标本浸制 （1）取材：选择体型完整的小兔，体重250-300克，让它饿一天，消除肠内的积食。然后用乙醚处死，冲洗干净后解剖。 （2）解剖： （3）定形：用冲洗骨髓腔的方法，充除兔子肠内的粪便。在解剖板上划好玻璃片的长和宽，各器官的位置应该放在长和宽的