肥料中10种植物生长调节剂的高通量快速筛选　液相色谱-质谱联用法（定稿）

ICS65.080G 20DB37山东省地方标准DB 37/T XXXXXXXXX肥料中10种植物生长调节剂的高通量快速筛选液相色谱-质谱联用法High-throughout screening of ten growth regulators in fertilizers by liquid chromatography-tandem mass spectometryXXXX - XX - XX发布XXXX - XX - XX实施山东省市场监督管理局发布DB37/ XXXXXXXXX目次前言II1 范围12 规范性引用文件13 原理14 试剂和材料15 仪器26 分析步骤26.1 样品制备26.2 提取26.3 测定26.4 空白试验36.5 结果表述46.6 允许差4附录A （资料性附录） 10种植物生长调节剂信息一览表5附录B （资料性附录） 标准物质的质谱分析参考参数7附录C （资料性附录） 标准物质的总离子流质谱图和提取离子质谱图8前言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由山东省市场监督管理局提出并监督实施。本标准由山东化工标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省产品质量检验研究院、金正大生态工程集团股份有限公司、山东省科学院生物研究所。本标准主要起草人：朱海荣、张娟、于燕萍、郭凯、刘爽、于晓菲、刘金凤、赵丽芳、张开亮、郑树林、苏本玉、孟强、尹畅。10肥料中10种植物生长调节剂的高通量快速筛选液相色谱-质谱联用法警告：本标准有可能涉及到有害物质、危险操作和设备的安全。本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的要求。1 范围本标准规定了肥料中10种植物生长调节剂的高通量筛选液相色谱-质谱联用法。本标准适用于水溶肥料、复混肥料、掺混肥料、配方肥料中10种植物生长调节剂复硝酚钠（2-硝基苯酚钠、4-硝基苯酚钠、5硝基邻甲氧基苯酚钠）、萘乙酸、脱落酸、赤霉酸、氯吡脲、烯效唑、多效唑、2,4-D的检测。方法中称样量为1.0 g时，复硝酚钠、萘乙酸、脱落酸、赤霉酸、2,4-D的检出限为0.1 mg/kg。氯吡脲、烯效唑、多效唑的检出限为0.05 mg/kg。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法3 原理试样中待测物用甲醇进行超声提取，在选定的工作条件下，用液相色谱-串联质谱仪进行测定，外标法定量。4 试剂和材料本标准中试验用水应符合GB/T 6682中一级用水的规格。4.1 高纯氮。4.2 乙腈：色谱纯。4.3 甲醇：色谱纯。4.4 甲酸：色谱纯。4.5 甲酸-水溶液（1+1 0000）：移取0.10 mL 甲酸（4.4）与 1 000 mL水混匀。4.6 2-硝基苯酚钠标准品：已知质量分数，98.0 %。4.7 4-硝基苯酚钠标准品：已知质量分数，98.0 %。4.8 5-硝基邻甲氧基苯酚钠标准品：已知质量分数，98.0 %。4.9 萘乙酸标准品：已知质量分数，98.0 %。4.10 脱落酸标准品：已知质量分数，98.0 %。4.11 赤霉酸标准品：已知质量分数，98.0 %。4.12 氯吡脲标准品：已知质量分数，98.0 %。4.13 烯效唑标准品：已知质量分数，98.0 %。4.14 多效唑标准品：已知质量分数，98.0 %。4.15 2,4-D标准品：已知质量分数，98.0 %。10种植物生长调节剂信息一览表见附录A中表A.1。4.16 标准储备溶液：称取0.01g（精确到0.000 1 g）10种植物生长调节剂标准品（4.6-4.15）于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，得到浓度为1 000 mg/L的标准储备液，现用现配。 4.17 标准中间液：取上述标准贮备液（4.16），用甲醇（4.3）稀释成浓度为10 mg/L的标准中间液。4.18 标准工作液：用甲醇稀释10种植物生长调节剂的标准中间液（4.17），配成6个不同浓度的混合标准溶液，其中的各植物生长调节剂质量浓度分别为1 g/L、10 g/L、25 g/L、50 g/L、100 g/L、200 g/L。5 仪器5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源和数据处理机。5.2 漩涡混合器。5.3 高速离心机：最高转速不低于6 000 r/min。5.4 分析天平：精度0.1 mg。5.5 金属试验筛：0.5 mm。5.6 超声波清洗器。5.7 有机相微孔滤膜：0.22 m。6 分析步骤6.1 样品制备固体样品：将样品粉碎，全部过0.5 mm试验筛，待用。液体样品混匀后直接称取。6.2 提取称取0.1 g1.0 g试样（精确至0.000 1 g）置于10 mL离心管中，加入8 mL甲醇（4.3），涡旋振荡1 min，超声提取30 min，以6 000 r/min高速离心10 min，冷却至室温，定容至10 mL，取1 mL上清液过0.22 m有机相滤膜，待测。6.3 测定6.3.1 液相色谱及质谱操作条件6.3.1.1 液相色谱操作条件：a) 色谱柱：50 mm2.1 mm(i.d.)不锈钢柱，内装C18、1.7 m填充物（或具有同等效果的色谱柱）；b) 柱箱温度：40 ；c) 流动相：流动相及梯度洗脱条件见表1；d) 流速：0.3 mL/min；e) 进样量：10 L。表1 液相色谱梯度洗脱条件时间/min流动相甲醇（4.3）/%流动相甲酸溶液(4.5)/%010903.010905.060408.075259.0109012.010906.3.1.2 质谱操作条件：a) 电离方式：电喷雾电离，氯吡脲、烯效唑、多效唑采用正离子模式（ESI+），复硝酚钠、萘乙酸、脱落酸、赤霉酸、2,4-D采用负离子模式（ESI-）；b) 检测方式：多反应监测模式（MRM）；c) 离子源温度：550 ；d) 雾化气：氮气，流速8 mL/min；e) 气帘气：氮气，流速25 mL/min；f) 碰撞气：氮气；流速50 mL/min；g) 毛细管电压：22 V；其它质谱条件见附录B中表B.1。上述操作参数是典型的，可根据不同仪器特点对给定的操作参数做适当调整，以期获得最佳效果。标准物质的总离子流质谱图和提取离子质谱图见附录C。6.3.2 标准曲线的绘制分别移取一系列混合标准工作溶液（4.18），按照浓度由低到高的顺序依据仪器条件（6.3.1）进行测定，以色谱峰峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。6.3.3 试样测定6.3.3.1 定性按6.3.1的仪器条件对标准工作溶液和样品溶液进行测定，如果样品溶液中色谱峰的保留时间与标准物质色谱峰的保留时间一致；而且样品溶液中监测离子的相对丰度比与相当浓度的标准溶液的监测离子对的相对丰度比的偏差不超过表2的规定范围，则可判定样品中存在相应的目标成分。表2 定性测定时相对离子丰度最大允许偏差相对离子丰度/%502050102010允许的相对偏差/%202530506.3.3.2 定量取适量待测液（6.2），按照仪器条件（6.3.1）进行测定，外标法定量。待测物含量高的试样用甲醇稀释后测定。同时进行平行试验。6.4 空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。6.5 结果表述试样中待测物的含量Xi以质量分数（%）表示，结果按式（1）计算：(1)式中：ci 由标准曲线查得试样溶液中待测物的浓度，单位为微克每升（g/L）；c0 由标准曲线查得空白溶液中待测物的浓度，单位为微克每升（g/L）；V 样品的定容体积，单位为升（L）；m 样品质量，单位为克（g）；Di 样品稀释倍数。计算结果保留两位有效数字，取平行测定结果的算术平均值作为测定结果。注： 复硝酚钠含量以5-硝基邻甲氧基苯酚钠、4-硝基苯酚钠和2-硝基苯酚钠的含量总和计。6.6 允许差在重复性条件下获得的两次平行测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的20 %。AA附录A （资料性附录）10种植物生长调节剂信息一览表10种植物生长调节剂信息见表A.1。表A.1 10种植物生长调节剂信息一览表序号化合物英文名称分子式分子量CAS号结构式/复硝酚钠Sodium nitrophenolate/12-硝基苯酚钠2- Nitrophenol Sodium SaltC6H4NNaO3161.09824-39-524-硝基苯酚钠4-Nitrophenol Sodium SaltC6H4NNaO3161.09824-78-235-硝基邻甲氧基苯酚钠5-Nitroguaiacol Sodium SaltC7H6NNaO4191.1277-06-542,4-D2,4-Dichlorophenoxyacetic acidC8H6Cl2O3221.0494-75-75脱落酸Abscisic acidC15H20O4264.3214375-45-26萘乙酸1-Naphthylacetic acidC12H10O2186.2186-87-37氯吡脲ForchlorfenuronC12H10ClN3O247.7068157-60-88烯效唑UniconazoleC15H18ClN3O291.883657-22-1表A.110种植物生长调节剂信息一览表（续）序号化合物英文名称分子式分子量CAS号结构式9赤霉酸Gibberellic acidC19H22O6346.477-06-510多效唑PaclobutrazolC15H20ClN3O293.7976738-62-0BB附录B （资料性附录）标准物质的质谱分析参考参数标准物质的质谱分析参考参数见表B.1。表B.1 标准物质的质谱分析参考参数目标物母离子（M-H）(m/z)子离子（m/z）定量离子对（m/z）锥孔电压/V碰撞能量/eV2-硝基苯酚钠138.1592.18138.15108.123015108.1230254-硝基苯酚钠138.1592.17138.15108.123015108.1230255-硝邻甲氧基苯酚钠168.15123.10168.15152.972525152.972515萘乙酸185.00113.00185.00141.002218141.002215脱落酸263.11152.93263.11219.072818219.072820赤霉酸345.03143.06345.03239.092226239.062220氯吡脲248.10129.10248.10154.803835154.803830烯效唑292.0070.00292.00125.03422125.003432多效唑294.0070.00294.00125.02818125.0028342,4-D219.00124.90219.00160.802528160.802522CC附录C （资料性附录）标准物质的总离